方格星虫多糖对小鼠免疫活性的影响

研究了方格星虫多糖对小鼠免疫功能的影响。结果表明:方格星虫粗多糖(CSG)能够对抗环磷酰胺引起的小鼠胸腺萎缩和脾萎缩,明显拮抗白细胞减少,对正常小鼠免疫器官没有明显的增重作用;对正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力有显著的增强作用。方格星虫多糖粗品(CSG)和精制多糖(SG1和SG2)能够促进小鼠脾淋巴细胞增殖,且能与ConA协同作用。     

香鱼(Plecoglossus altivelis)肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 基因的分子克隆、鉴定及免疫相关性表达

肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)是TNF 超家族成员之一, 在动物机体抵 抗细菌和病毒入侵时发挥重要作用。本研究基于香鱼(Plecoglossus altivelis)单核/巨噬细胞转录组数 据库, 获得了香鱼TNF-α 基因(PaTNF-α)全长cDNA 序列。PaTNF-α 由1932 个核苷酸组成, 包含一 个大的开放阅读框, 编码235 个氨基酸, 预测分子量为26.4 kDa.氨基酸序列多重比对分析表明, PaTNF-α 具有TNF 超家族的特征序列、1 个TACE 酶切位点和1 个保守的二硫键, 与虹鳟 (Oncorhynchus mykiss)TNF-α 同源性最高, 为53.4%; 系统进化树分析表明, 鱼类TNF-α 形成一个大 簇, PaTNF-α 与虹鳟TNF-α 进化相关性最高。实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR, qRT-PCR) 结果显示, PaTNF-α mRNA 在头肾中表达量最高; 鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染后香鱼肝、脾、头 肾和外周血细胞中PaTNF-α mRNA 表达量显著上调; 香鱼单核/巨噬细胞经鳗弧菌、LPS 和poly(I: C) 处理后, PaTNF-α mRNA 表达量显著上调。原核表达了PaTNF-α 成熟肽, 并制备了抗血清。Western blot 分析表明, 鳗弧菌感染后香鱼血清和单核/巨噬细胞上清中的PaTNF-α 表达量含量也显著增加。 综上, 香鱼TNF-α mRNA 及蛋白的表达与病原体感染密切相关, 为深入研究鱼类TNF-α 的生物学功 能及其在病原体感染中的作用机制提供理论基础。     

月华丸（胶囊）及其拆方对巨噬细胞增殖影响的研究

目的：研究月华丸（胶囊）对小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）活性的影响，为后续研究月华丸（胶囊）对耐多药结核分支杆菌感染细胞自噬的影响提供前期实验基础。方法：取对数生长期的RAW264.7细胞，用10%胎牛血清培养制成的细胞悬液加入96孔培养板中培养。分别采用终浓度为1.25g/mL、0.63g/mL、0.32g/mL、0.16g/mL、0.125g/mL、0.063g/mL、0.032g/mL、0.016g/mL不含阿胶的月华丸（胶囊）以及相同浓度梯度含阿胶的月华丸（胶囊）处理RAW264.7细胞，并设不加药的对照组。以4-甲偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞存活情况。结果：（1）不含阿胶的月华丸（胶囊）在1.25g/mL、0.63g/mL浓度时对RAW264.7细胞增殖抑制率明显升高，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05），表明不含阿胶的月华丸（胶囊）高浓度对巨噬细胞的增殖有一定的抑制作用。（2）含阿胶的月华丸（胶囊）对RAW264.7细胞增殖率明显升高，各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05），提示含阿胶的月华丸（胶囊）对巨噬细胞的增殖有明显促进作用。（3）浓度为0.32g/mL的含阿胶月华丸（胶囊）对RAW264.7细胞增殖率最高，为最佳促细胞增长药液浓度。结论：月华丸（胶囊）能提高巨噬细胞的活力，增强巨噬细胞的增殖。     

Evaluation ofAntitumor, Immunomodulatory and Free Radical Scavenging Effects of A New Herbal Prescription Seaweed Complex Preparation

Seaweed Complex Preparation （SCP） is a clinical traditional Chinese medicine preparation which is composed of seven traditional Chinese herbs, and it has been used for treatment of lung cancer, liver cancer and digestive cancer. However, little infor- mation is available about the pharmacodynamic basis. The antitumor, immunomodulatory and free radical scavenging effects of SCP were evaluated in this study. Transplanted tumor in vivo method was used to determine the antitumor effect. The effects on spleno- cyte proliferation and phagocytosis of macrophages in tumor-bearing mice were measured by the MTT method and the phagocytizing cock red blood cell （CRBC） method respectively. The scavenging activities of SCP on DPPH and hydroxyl radicals in vitro were investigated. It was found that the medium-dose and high-dose of SCP could significantly inhibit the growth of transplanted hepatic tumor of murine hepatocarcinoma cell line H22, and promote proliferation of splenocytes and phagocytosis of macrophages. SCP possessed noticeable scavenging activities on DPPH and hydroxyl radicals. The antiturnor effects of SCP might be achieved by im- proving immune system and scavenging free radicals, which is in accordance with the viewpoint of traditional Chinese medicine in promoting the body resistance and eliminating pathogenic factors for cancer treatment.     

转录组和蛋白组分析海带褐藻多糖硫酸酯对RAW 264.7细胞的免疫调节作用

海带(Saccharina japonica)是我国的主要经济褐藻,从海带中制备的褐藻多糖硫酸酯具有免疫调节等多种生物活性,但鲜有基于组学的研究报道。本文采用RNA高通量测序(RNA-sequencing,RNA-seq)转录组学技术以及平行反应监测(Parallel Reaction Monitoring,PRM)靶向定量蛋白组学方法,探究海带褐藻多糖硫酸酯作用于小鼠巨噬细胞RAW 264.7后对巨噬细胞功能和通路的影响。结果表明,褐藻多糖硫酸酯(100μg/mL)作用于RAW 264.7细胞后,差异表达基因主要富集在免疫反应、先天性免疫应答等生物过程以及TNF、NF-κB、Toll样受体等信号通路,也可促进RAW 264.7细胞膜蛋白A类清道夫受体(SR-A)中SCARA3和Toll样受体中TLR4的表达。采用流式细胞仪对褐藻多糖硫酸酯作用后SR-A和TLR4的表达量进行蛋白水平的验证,SR-A和TLR4的表达量均有升高,证实了组学结果的可靠性。本研究结果为利用褐藻多糖硫酸酯开发具有免疫调节作用的功能食品或药物提供依据。     

PaCLR介导PaLECT2激活脂多糖刺激的香鱼(Plecoglossus altivelis)单核巨噬细胞功能

香鱼(Plecoglossus altivelis)白细胞衍生趋化因子2(leukocyte cell-derived chemotaxin 2,PaLECT2)可以激活香鱼头肾来源的单核巨噬细胞(monocytes/macrophages,MO/MΦ),提高细菌感染后香鱼存活率。进一步研究显示,PaLECT2与香鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,PaCLR)相互作用可激活静息状态下香鱼MO/MΦ,增强其免疫活性。在前期基础上,本研究通过抗体封闭实验检测PaCLR是否介导PaLECT2激活LPS刺激的MO/MΦ功能。结果显示,重组PaLECT2成熟肽(rPaLECT2m)显著提高了LPS刺激的香鱼MO/MΦ细胞因子的表达,并增强了其吞噬能力和杀菌活性。封闭PaCLR显著抑制了rPaLECT2m激活LPS刺激的香鱼MO/MΦ细胞因子表达、吞噬和杀菌功能。因此,PaCLR介导PaLECT2可以激活病理状态香鱼MO/MΦ。这一认识进一步揭示了LECT2在病理状态的鱼类巨噬细胞调控和炎症反应中的作用及机制。     

黑鲷造血组织中黑色素巨噬细胞发育过程的超微结构观察

应用电镜技术研究了黑鲷造血组织中黑色素巨噬细胞发育过程的超微结构变化.结果表明:黑鲷头肾、体肾、脾脏及肝脏造血组织中存在着两类黑色素巨噬细胞,即非典型黑色素巨噬细胞和典型黑色素巨噬细胞.非典型黑色素巨噬细胞的胞质中不含有典型的黑色素体,但含有一些大型或巨型的圆形或椭圆形浓染颗粒.非典型黑色素巨噬细胞根据其超微结构特点不同,又可分四型,即Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型非典型黑色素巨噬细胞.典型黑色素巨噬细胞的特征就是其胞质中含有典型的极度嗜染的黑色素体,并且这类细胞可进一步发育形成黑色素巨噬细胞中心.在研究中还非常明确地观察到了不同类型黑色素巨噬细胞的前体细胞,这些前体细胞的超微结构存在较大差异.由观察结果可知,黑鲷造血组织中存在着不同种类的黑色素巨噬细胞,这些细胞是由不同类型的前体细胞发育而来.     

条斑星鲽免疫器官个体发生的组织学观察

应用石蜡切片技术和显微观察法，对从孵化后到变态完成（55～60日龄）的条斑星鲽（Verasper moseri Jordan et Gilbert）仔稚幼鱼早期发育中免疫系统的组织结构进行了研究，描述了个体发育过程中的组织学结构特征。实验表明；在13～15℃，条斑星鲽免疫器官原基出现的先后顺序为肾脏、脾脏和胸腺。孵化后即出现肾脏原基，8日龄和12日龄分别出现脾脏和胸腺原基；而免疫器官淋巴化的先后顺序较为特殊，首先淋巴化的器官是头肾，其次为胸腺和脾脏，不同于大多数海水鱼类。在其免疫器官发生后期除头肾和脾脏外，在胸腺中同样出现黑色素巨嗜细胞中心，虽然在数量和形态上不如头肾和脾脏丰富。作者通过对条王醺星鲽免疫器官发生过程研究，初步了解了其免疫器官发生，成熟过程以及特点，为进一步开展条斑星鲽的规模化养殖，以及人工疫苗的应用提供理论依据。     

CpG-DNA对异育银鲫(Carassius auratus gibelio)免疫细胞活性的诱导作用

探索含CpG基序的未甲基化寡脱氧核苷酸(ODNs)对鱼类的免疫调节,将人工合成的鱼免疫刺激剂寡脱氧核苷酸序列1670(含一个CpG基序)、1670-D(含两个CpG基序)加入到离体培养的异育银鲫的头肾巨噬细胞和外周血白细胞中,采用MTT法测定其对鲤外周血白细胞增殖的影响,NBT还原法和Griess试剂显色法测定对头肾巨噬细胞的呼吸爆发的影响。结果显示,1670可显著(浓度为20.0μg·mL-1)或极显著(浓度为0.1、1.0、10.0μg·mL-1)提高异育银鲫巨噬细胞的氧呼吸爆发活性,但对氮呼吸爆发活性和外周血白细胞的增殖无显著作用;1670-D可显著(浓度为0.1μg·mL-1)或极显著(浓度为1.0、10.0、20.0μg·mL-1)增强异育银鲫巨噬细胞的氧呼吸爆发活性和外周血白细胞的增殖,且可极显著(浓度为1.0、10.0、20.0μg·mL-1)提高异育银鲫巨噬细胞的氮呼吸爆发活性。表明特定序列、特定作用剂量的CpG-DNA可增强体外培养的异育银鲫巨噬细胞和外周血白细胞的非特异性免疫应答。