具降胆固醇功能的海洋源乳酸菌的筛选及发酵条件工艺优化

本研究采用邻苯二甲醛法从柏式中喙鲸(Mesoplodon densirostris)内脏中筛选出一株具高效降解胆固醇功能的乳酸菌HJ-S2,利用16S r DNA分子生物学和API 50CH系统鉴定其为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。为提高乳酸菌HJ-S2体外降胆固醇能力,考察了菌株的生长特性,并从培养基条件和发酵条件两个方面,采用单因素和正交试验进行工艺优化。优化后的培养基条件为:蛋白胨含量5 g/L,葡萄糖含量25 g/L,胆固醇含量1.0 g/L,胆盐含量2.0 g/L;发酵条件为:温度37℃,p H 6,培养时间24 h,接种量1%。在此优化条件下,胆固醇降解率达到69.81%,较优化前有显著提升,为功能性益生菌制剂的开发应用提供生产工艺及参考依据。     

深海贝莱斯芽孢杆菌DH82的筛选、鉴定及其抗菌粗蛋白性质分析

本研究从西太平洋雅浦海沟 6 000 m 深的水样中分离得到 106 株深海细菌，其中筛选到一株能较强拮抗迟缓爱德华氏菌等水产致病菌的 DH82 菌株。采用 16S rDNA 和 gyrB 基因 （NCBI 登录号：MK203035 与 MK203036） 分子生物学分析， 结合形态学和生理生化特性，鉴定 DH82 菌株为贝莱斯芽胞杆菌 Bacillus velezensis。对其抗菌粗蛋白性质进行研究发现：该粗蛋白具有较好热稳定性，在 100 益，处理 30 min 后，仍有 85.5 %抑菌活性；木瓜蛋白酶、蛋白酶 K、胃蛋白酶及胰蛋白酶对粗蛋白影响不显著；粗蛋白在 pH7.0 条件下抑菌活性最佳；金属离子 K+和 Na+对粗蛋白抑菌活性有促进作用，Mg2+、Ca2+及 Fe3+等多价金属离子对粗蛋白抑菌活性有抑制作用。     

深海贝莱斯芽孢杆菌DH82的抑菌活性物质初步分离纯化及其抑菌谱检测

贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) DH82发酵上清液经最佳硫酸铵饱和度(70%)沉淀、透析获得粗蛋白,粗蛋白经Sephadex G-75柱层析的色谱条件为柱1. 6 cm×50. 0 cm;上样量为5 mL;洗脱液为超纯水,流速2 mL/min;检测波长280 nm,获得两个具有抑菌活性的峰蛋白PrⅠ和PrⅡ。两个峰蛋白经抑菌谱检测,发现对常见水产指示病原细菌包括迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、坎氏弧菌(Vibrio campbellii)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)都具有较好抑菌活性,表明深海贝莱斯芽孢杆菌DH82产生的抑菌活性物质对水产病原细菌的抑菌谱较广,其中峰蛋白PrⅡ对指示植物病原真菌水贼镰刀菌(Fusarium equisetum)也具有较好抑菌作用。进一步对峰蛋白进行最小抑菌浓度(MIC)检验,发现其对迟缓爱德华氏菌和溶藻弧菌的MIC都较低(为7. 16μg/mL)。以上研究结果表明,深海贝莱斯芽孢杆菌DH82具有较宽的抑菌谱及较强的抑菌活性,预示该菌株在常见水产细菌性及个别植物真菌性病害防治上具有较好的开发利用价值。