甲壳动物免疫机能的衡量指标及科学评价

研究甲壳动物免疫系统和免疫机理的重要目的之一是为开展甲壳动物免疫防病提供理论基础。甲壳动物免疫防病的研究,是当前水产养殖中比较活跃的一个领域。而选择一个合适的指标进行科学正确的评价甲壳动物免疫状况,则是有效开展免疫防病治病的前提。作者就目前用于衡量甲壳动物免疫机能的各种指标及其检测和科学应用做一综述。     

Rapid detection of virulent protease secreted by Vibrio anguillarum by dot enzyme-linked immunosorbent assay

Dot enzyme-linked immunosorbent assay （dot-ELISA）, indirect ELISA and Westem blot were performed to detect the virulent protease secreted by Vibrio anguillarum which was isolated from the diseased left-eyed flounder, Paralichthys olivaceous. Sensitivity results showed that dot-ELISA is a more sensitive, rapid and simple technique for the protease detection. The minimal detectable amount of protease is about 7 pg in the dot-ELISA test, while 7.8 ng in the indirect ELISA and 6.25 ng in the Westem blot respectively. Protease could be detected 2 h after incubation of V. anguillarum in the 2216E liquid medium but enzyme activity was very low at that period. From 6 to 12 h, the amount and enzyme activity of protease increased markedly and reached maximum at stationary phase. Analysis of serum samples periodically collected from the infected flounders showed that after 2 h of infection by V. anguillarum, the pathogenic bacteria could be detected in the blood of the infected flounders but no protease was found. It was 5-6 h after infection that the protease was detected in blood and then the amount increased as infection advanced. Quantitative detection of protease either incubation in the medium or from the blood of infected flounders could be accomplished in virtue of positive controls of quantificational protease standards （＂marker＂） so that the alterations ofprotease secretion both in vitro and in vivo could be understood generally. In addition, the indirect ELISA and dot-ELISA were also performed to detect V. anguillarum cells. Results indicated that the sensitivity of indirect ELISA to bacteria cells is higher than that of the dot-ELISA, and that the minimal detectable amount is approximately 10^4 cell/mL in the indirect ELISA, while 10^5 cell/mL in the dot-ELISA.     

钝顶螺旋藻藻蓝蛋白和多糖的抗肿瘤免疫活性研究

对钝顶螺旋藻藻蓝蛋白 (PC)和多糖 (PSP)的抗肿瘤免疫活性进行了研究。采用免疫酶标技术、MTT法及定量溶血分光光度测定法等免疫分析实验 ,从免疫器官、免疫细胞、免疫分子 3个水平上进行藻蓝蛋白和多糖的抗肿瘤免疫活性检测。结果显示 ,藻蓝蛋白和多糖处理组小鼠瘤块直径及瘤体重量均小于对照组 ,T细胞及 B细胞活性明显增强 ,体液抗体量显著提高 ,螺旋藻藻蓝蛋白比多糖抑制肿瘤细胞生长和提高机体免疫力的作用更明显。     

LAPP对中国对虾（Penaeuschinensis）生长,缺氧耐受力免疫抵抗力的影响

实验研究维生素Ｃ多聚磷酸添加在对虾饲料中，对中国对虾的生长、缺氧耐受力免疫抵抗力的影响；实验进一步证明了中国对虾饲料中ＬＡＰＰ的最适添加量为４００ｍｇ／１００ｇ饲料；本文还提出饲料中的ＬＡＰＰ能够提高中国对虾的缺氧耐受力，在溶氧超过３．１ｍｇ／ｋｇ海水的情况下，效果显著，在降低到２．３ｍｇ／ｋｇ海水时，作用减弱，用副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｏｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）注射入虾体内，１２小时内记录     

中国对虾血细胞及其免疫研究

于１９９１年３月－１９９２年４月青岛近海及一养虾场捕集中国对虾亲虾和越冬亲虾，以扫描电镜和透射电镜观察中国虾的血细胞形态及其亚显微结构；研究定量测定细胞吞噬活性的方法。结果表明，中国对虾血细胞分３种：无颗粒细胞，呈球形或梭形，胞质不含颗粒粒；小颗粒细胞及颗粒细胞，卵球形或椭球球形，胞质含有电子致密颗粒，颗粒可分均匀、非均匀的；小颗粒细胞质富含线粒体，可能与它对异物敏感易发生胞吐作用有关，该细胞是识     

LAPP对中国对虾(Penaeus chinensis)生长、缺氧耐受力及免疫抵抗力的影响

实验研究维生素C多聚磷酸酯（LAPP）添加在对虾饲料中，对中国对虾的生长、缺氧耐受力及免疫抵抗力的影响；实验进一步证明了中国对虾饲料中LAPP的最适添加量为400mg／100g饲料;本文还提出饲料中的LAPP能够提高中国对虾的缺氧耐受力，在溶氧超过3．1mg／kg海水的情况下，效果显著，在降低到2．3mg／kg海水时，作用减弱；用副溶血弧菌（Vibroparahaemolyticus）注射入虾体内，12小时内记录发现，饲料中不含LAPP的一组中国对虾，死亡率高于其它组，并且，LAPP含量最高的一组，死亡率明显低，死亡时间也出现较晚，这证明LAPP能够提高中国对虾的免疫抵抗力；本实验用注射金黄色葡萄球菌后细胞的吞噬百分率作指标，研究对虾细胞的吞噬作用，发现饲料中不含LAPP的对虾的吞噬百分率较低，随着饲料中LAPP浓度的提高，对虾血细胞的吞噬百分率逐渐升高，说明中国对虾细胞的吞噬作用逐步增强。     

缢蛏消化道组织学与组织化学的研究

运用组织学和组织化学染色方法对缢蛏消化道的组织结构和功能进行了研究。结果表明 ,缢蛏的消化道由唇瓣、口、食道、胃、晶杆囊、肠、直肠和肛门组成。除唇瓣外的消化管壁由内向外可分为 4层 :粘膜层、粘膜下层、肌层和外膜。粘膜层包括粘膜上皮和粘膜肌层。口腔上皮为假复层纤毛柱状上皮 ,其它部位的粘膜上皮都为单层纤毛柱状上皮。胃壁的局部和肠壁缺乏肌层。除口的腹面、直肠、肛门等处的外膜为浆膜外 ,其余皆为纤维膜。肠上皮、直肠上皮和唇瓣上皮有较强的碱性磷酸酶活性 ,胃上皮和肠上皮有较强的酸性磷酸酶活性。直肠的粘膜及粘膜下层中含有丰富的钙和铁     

栉孔扇贝消化管的组织学观察

运用石蜡切片法和组织化学方法，对栉孔扇贝的消化管进行了研究，结果表明，整个消化管从腔内到腔外，都由黏膜上皮、黏膜肌层、结缔组织和外膜组成。黏膜上皮层由纤毛柱状细胞和杯状细胞组成，基膜很薄，皮下有一层有肌纤维，结缔组织中有丰富的血腔隙，除直肠的外膜为浆膜外，其余皆为纤维膜。纤毛和黏液在食物的运输中起重要作用。胃和晶杆囊上皮能分泌消化酶。胃上上有较弱的碱性磷酸酶和脂酶活性。胃和晶杆囊上皮及纤毛有酸性磷酸酶活性，晶杆囊上皮的核前细胞质中含铁，各部位不含钙。     

日本对虾血清三类免疫球蛋白样物质的研究

采用单向免疫扩散法（SRID）和免疫酥斑点法（Dot-ELISA)对日本虾（Penaeus japonicus)血清中类IgM，IgG,IgA样物质进行了系统的研究分析。结果发现，虾血清中存在能与羊抗人IgM,IgG,IgA发生结合且能被特异性阻断试验确证的物质。文中还对12例对虾血清类IgM,IgG,IgA样物质的含量进行了检测。结果显示，虾血清中确实存在与人免疫球蛋白（Ig）特异性抗原决定簇极为相似的物质，它的存在对研究虾的抗病机制具有重要意义。     

免疫添加物对大黄鱼血液白细胞数量及其吞噬功能的影响

采用低聚糖益力素、稳定型维生素C、渔用多维等免疫、营养添加物定期投喂大黄鱼，以粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、吞噬百分率、吞噬指数等为指标，跟踪检测试验大黄鱼血液中白细胞组成数量和吞噬细胞吞噬能力的变化。研究结果表明，免疫添加物可以提高大黄鱼血液中白细胞数量和吞噬细胞的吞噬能力，增强大黄鱼的非特异性免疫功能，促进大黄鱼的健康生长。