RP-HPLC双波长法同时测定参橘草营养强化饮液中5种成分的含量

目的：采用双波长HPLC同时测定参橘草营养强化饮液中5种化合物(腺苷、虫草素、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、橙皮苷)的含量。方法:依利特Hypersil BDS C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相：乙腈-水,梯度洗脱;流速：1.0 ml/min;柱温25℃;检测波长203 nm(人参皂苷Rg1、人参皂苷Re),260 nm(腺苷、虫草素、橙皮苷)。结果：5种化合物在各自的浓度范围内均呈现良好的线性关系(r>0.9990),平均加样回收率（n=6）分别为96.72%、97.93%、98.04%、99.22%、101.69%。结论：该法简单快捷、稳定可靠,准确率高,重复性好,可用于参橘草营养强化饮液的质量评价。     

海洋药用生物系列HPLC化学指纹图谱研究 Ⅱ.三斑海马HPLC化学指纹图谱研究

采用高效液相色谱(HPLC)法建立三斑海马的参考指纹图谱.运用DAD-Agilent 1100高效液相色谱仪,色谱条件:Agilent Zorbax XDB C18色谱柱(4.6 mm×250 mm;5.0 μm),乙腈-0.1%磷酸水流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长200 nm,参比波长360 nm,柱温30 ℃.结果显示建立的指纹图谱包含11个共有峰,方法的精密度、重现性和稳定性试验RSD值均小于5.0%.研究表明所建立的三斑海马的参考指纹图谱可用于药材的真伪鉴别.     

3种海参的皂苷对血管内皮细胞作用的比较研究

比较研究了日本刺参(Apostichopus japonicus, A. japonicus)、北极刺参(Thelenata anax, T. anax)和菲律宾刺参(Pearsonothuria graeffei, P. graeffei)的皂苷对氧化损伤血管内皮细胞的作用.实验结果显示,对于正常血管内皮细胞,日本刺参皂苷无细胞毒作用,而北极刺参和菲律宾刺参皂苷具有显著的细胞毒作用.对于氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)氧化损伤的血管内皮细胞,日本刺参皂苷能显著提高细胞增殖活性(P<0.01),抑制其凋亡(P<0.01),而北极刺参和菲律宾刺参皂苷无显著影响.另外,3种海参的皂苷均能显著降低细胞内丙二醛(MDA)含量(P<0.01),但对细胞NOS活性和NO释放量无显著影响.提示日本刺参皂苷能够有效保护氧化损伤血管内皮细胞,对动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)的防治具有重要意义.而北极刺参和菲律宾刺参的皂苷对血管内皮细胞无保护作用.     

高效液相色谱-质谱联用技术在海洋药用生物化学成分快速鉴别中的应用

高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术,将HPLC的高分离效能与MS的强大结构鉴定功能结合起来,已逐渐成为天然产物化学成分快速分离、鉴别的强有力手段。本研究采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用(HPLC-ESI-MS)技术,成功建立了刺参皂苷快速鉴别方法,并对市售干刺参中的4种皂苷进行了鉴别。此外,应用该技术对罗氏海盘车中的13种化学成分进行了快速鉴别。为海洋药用生物化学成分快速鉴别提供了1种值得推广的新方法,为更好的开发利用海洋天然药物奠定了基础。     

炎可宁丸质量评价研究

目的：建立炎可宁丸质量标准。方法：采用显微鉴别法鉴别黄连。采用薄层色谱法（TLC）鉴别黄柏、大黄、黄芩、板蓝根、黄连。采用高效液相色谱（HPLC）法测定大黄素与大黄酚的含量,使用Phenomenex Luna C₁₈色谱柱（4.6 mm ×250 mm,5μm）,以甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）为流动相,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为254 nm。采用HPLC法测定黄芩苷的含量,使用CAPCELL PAK C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以甲醇-0.1%磷酸溶液(45∶55)为流动相,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为280 nm。结果:薄层色谱斑点清晰;大黄素和大黄素酚的线性范围分别为9.3～465.0 ng、11.6～580.0 ng,加样回收率分别为93.3%、98.0%,RSD分别为1.8%、2.7%;黄芩苷的线性范围为68～3400 ng,加样回收率为97.2%,RSD为1.2%。结论:本法简便可靠、结果准确,可用于该制剂的质量控制。     

海洋药用生物系列HPLC化学指纹图谱研究Ⅰ——二色补血草HPLC化学指纹图谱研究

建立滨海湿地药用植物二色补血草的HPLC化学指纹图谱。运用DAD-Agilent 1100高效液相色谱仪,色谱条件:Agilent Zorbax XDB C18色谱柱(4.6 mm×250 mm;5.0μm),乙腈-0.1%磷酸水流动相梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长200 nm,参比波长360 nm,柱温30℃。首次建立的二色补血草HPLC化学指纹图谱包含17个共有峰。方法的精密度、重现性和稳定性试验RSD值均5.0%。结论:所建立的二色补血草HPLC化学指纹图谱可用于药材的真伪鉴别。     

注射用丹红(粉针)-中间体-药材HPLC指纹图谱相关性研究

探讨中药指纹图谱相关性研究方法,运用Agilent 1100 DAD-HPLC高效液相色谱仪,采用色谱条件:大连依利特SinoChrom ODS-BP(250 mm×4.6 mm,5um)色谱柱,甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0 mL·min-1检测波长280mm,进样量20uL.建立了的相同条件下丹红注射剂、中间体和药材的HPLC指纹图谱.所建立的指纹图谱个峰分离度较好,指纹信息完整,符合指纹图谱技术规范.进一步利用相似度分析软件进行了指纹图谱相关性分析,揭示了丹红注射剂与中间体和药材具有较好的相关性.共有峰的相对保留时间及相对峰面积参数,可作为中药注射剂质量控制的重要依据.     

基于指纹图谱和含量测定评价脑得生丸的质量

目的：以高效液相色谱(HPLC)指纹图谱结合含量测定方法，为科学评价脑得生丸的质量提供理论依据。方法：采用HPLC建立脑得生丸的指纹图谱，色谱柱为 Inertsil ODS-SP（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液，梯度洗脱；柱温 30℃；检测波长为254 nm；流速为1 ml/min。采用HPLC方法测定脑得生丸中人参皂苷 Rg1，色谱柱为 HypersilODS2（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相为乙腈-0.05%磷酸（19∶81），等度洗脱；检测波长为 203 nm；流速为 1.0 ml/min；进样量为10 μl。基于指纹图谱和含量测定结果，对脑得生丸的质量进行评价。结果：建立了脑得生丸的指纹图谱，确定了11个共有峰，15批脑得生丸样品相似度均大于0.97。人参皂苷 Rg1的线性方程为 y=13600x-9.5581，线性范围是 19.2 μg/ml～1.920 mg/ml，相关系数是0.9992。15批脑得生丸中有5批样品为过期产品，仅批次为161003样品（过期5个月）含量检测不合格，其他均符合质量标准要求。结论：该方法简便、准确、重复性好，为脑得生丸质量的有效评价与整体控制提供了实验依据。     

滨海湿地典型耐盐植物盐地碱蓬的HPLC化学指纹图谱

建立药用耐盐植物盐地碱蓬(Suaeda salsa)的HPLC指纹图谱。运用DAD-Agilent 1100高效液相色谱仪,色谱条件:Agilent Zorbax XDB C18柱(4.6 mm×250 mm;5.0μm)色谱柱,1.0 mL.min-1流速,320 nm检测波长,360 nm参比波长,10μL进样量,30℃柱温,乙腈(A)-0.1%磷酸水(B)梯度洗脱。建立了盐地碱蓬的HPLC指纹图谱,包含16个共有峰,指纹图谱特征明显,化学信息完整。方法的系统适应性测定结果符合指纹图谱的技术规范。结论:首次建立的盐地碱蓬HPLC参考指纹图谱可用于盐地碱蓬的快速真伪鉴别。     

基于FT-IR、GC及核磁共振的仿刺参(Apostichopus japonicus)消化道多糖结构解析研究

仿刺参(Apostichopusjaponicus)因其高营养价值并富含多种生物活性成分,具有重要的经济价值。为了充分利用仿刺参加工下脚料,提高养殖经济效益,本文采用复合蛋白酶解法提取仿刺参消化道多糖,研究了酶解温度、时间、pH及加酶量对仿刺参消化道多糖得率的影响,并通过正交实验对仿刺参消化道多糖提取工艺进行优化,利用DEAE-sepharoseFastFlow层析柱对多糖进行纯化,通过傅里叶红外光谱(FT-IR)、气相色谱(GC)及核磁共振(13C, 1H谱)对多糖的结构及组成进行分析。结果表明,复合蛋白酶在pH 7,加酶量1.2?104 U/g,温度60℃酶解6h;利用Sevage法脱蛋白提取得到的仿刺参消化道多糖纯度均一,效果最佳。通过FT-IR结果判断其为糖类化合物,含有β型葡萄毗喃糖苷键;利用气相色谱确定该多糖主要由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖六种单糖组成,其摩尔比为1︰32.86︰14.56︰1.66︰0.78︰10.43,其中岩藻糖的含量最高;核磁共振综合分析结果进一步证实仿刺参消化道多糖含有β型毗喃已糖,且主要是以l, 4-糖苷键相连接。     

刺参（Apostichopus japonicus）幼参对高温和低盐协同胁迫的生理响应:生长和诱导型热休克蛋白基因表达

全球气候变化背景下的极端高温和强降雨频发天气导致的养殖池塘持续性的高温和低盐环境给刺参池塘养殖带来了严峻的挑战。为了研究刺参对高温和低盐环境的生理响应,本实验分析了高温和低盐协同胁迫对刺参幼参生长及诱导型hsp70和hsp90基因表达的影响。实验设置4个温度梯度（16℃、20℃、24℃和28℃）和3个盐度梯度（22、27和32）,共12个不同的胁迫组。经过40 d的长期胁迫,研究发现,随着温度的升高和盐度的降低,幼参的体重增加量减少,并在高温、低盐组出现体重负增长。长期胁迫提高了刺参幼参的诱导型hsp70和hsp90基因表达量,从而在一定程度上增强了对极端天气的抵抗能力。同时,高温下盐度22处理组刺参幼参诱导型hsp70和hsp90基因的表达量较盐度27条件下低。双因子方差分析结果显示,高温和低盐对幼参特定生长率和诱导型hsp70和hsp90基因表达量的交互作用均不显著,并且盐度对诱导型hsp70和hsp90基因表达量没有显著的影响。因此,相较低盐,高温对刺参幼参的影响更大,可作为刺参育种的选择压力。在高温期应该采取有效措施降低海水温度,并防止极端天气造成的养殖水体温度分层。该研究丰富了刺参生理生态学理论,可为刺参良种选育工作提供思路,并为指导极端天气下刺参生产实践活动提供一定的理论依据。     

两种海参对实验性高脂血症大鼠治疗作用的比较研究

比较研究菲律宾刺参（Pearsonothuria graeffei）和日本刺参（Apostichopus japonicus）对实验性高脂血症大鼠血脂水平和抗氧化能力的影响。结果表明，菲律宾刺参和日本刺参均能明显降低高脂血症大鼠血清TC（P〈0．01），LDL—C（P〈0．01）含量及LDL—C／HDL．C比值（P〈0．01），提高HDL—C及NO（P〈0．01）含量；显著降低血清和肝脏中MDA含量（P〈0．05，P〈0．01），并提高其SOD和GSH-PX活性（P〈0．05，P〈0．01）。其中，日本刺参对血清TC，LDL-C，LDL—C／HDL—C及肝脏MDA水平降低作用和NO含量提升作用显著优于菲律宾刺参（P〈0．05）。提示了菲律宾刺参和日本刺参对大鼠实验性高脂血症均具有显著的治疗作用，日本刺参的治疗效果优于菲律宾刺参。     

海参低聚肽对肾阳虚小鼠的影响

分析海参低聚肽和海参粉的基本营养成分,研究并比较了海参低聚肽和海参粉对氢化可的松致肾阳虚小鼠的作用。小鼠随机分为空白、阴性、阳性对照组(丙酸睾酮,5mg/kg)、海参低聚肽组(0.5g/kg)和海参粉组(0.5g/kg)。连续灌胃24 d后测定小鼠的体温、体重、自主活动次数和低温游泳时间,以及胸腺、脾脏指数和肾上腺、包皮、精囊、睾丸的指数以及精子浓度。结果显示,与阴性对照组相比,海参粉显著增加肾阳虚小鼠的自由活动次数、低温游泳时间、睾丸指数和精子浓度,具有一定抗疲劳和补肾壮阳作用;海参低聚肽显著增加肾阳虚小鼠的体温、体重、自由活动次数和低温游泳时间,还能显著增加睾丸指数、精囊指数和精子浓度,使其接近阳性对照组和空白对照组的水平,具有显著的抗疲劳和补肾壮阳作用,且海参低聚肽的效果明显好于海参粉。     

刺参肌肉组织cDNA文库的构建

用RNA提取试剂--TRIZOL Reagent提取刺参(Apostichopus japonicus)肌肉组织总RNA,用SMART cDNA Library Construction Kit构建cDNA文库.经测定原始文库滴度达到 3.2×10~6,扩增后文库滴度达到 5.1×10~9,重组率达到96.7%,从扩增文库随机挑取12 个克隆进行PCR 扩增鉴定,结果显示,插入片段大小为0.5～2.5 kb.通过各项指标验证成功构建了刺参肌肉组织cDNA 文库.     

日本刺参的抗肿瘤及免疫调节作用研究

采用日本刺参（Apostichopus japonicus）浆灌胃移植性肿瘤模型小鼠，探讨了日本刺参的抗肿瘤作用及其对免疫功能的调节作用。结果表明，日本刺参各剂量组均能显著抑制小鼠S180肉瘤的生长，提高小鼠脾指数及胸腺指数（P〈0．05）；显著提高荷瘤小鼠血清溶血素含量（P〈0．01）和抗体形成细胞数（P〈0．05）；提高迟发型变态反应水平和脾淋巴细胞转化能力（P〈0．05，P〈0．01）；促进NK细胞活性和巨噬细胞的吞噬能力（P〈0．05。P〈0．01）。提示日本刺参能全面调节机体的特异性和非特异性免疫功能．控制和杀灭肿瘤细胞。     

中国刺参(♂)×日本红刺参(♀)杂交子代的胚胎、幼体发育及幼参生长性状的研究

本研究建立中国刺参(♂)与日本红刺参(♀)杂交组合,通过对杂交子代的胚胎发育进行观察,详细描述其胚胎及幼体各个阶段的发育时序和形态特征,并比较在幼参培育期间杂交苗与中国刺参自交苗的生长和成活.结果表明,在20～22℃时,杂交子代发育至初耳幼体的时间为受精后24 h 38 min,发育至中耳幼体的时间为72 h 8 min,然后经过167h 8 min(约7d)发育至大耳幼体,到受精后第9天发育至樽形幼体.樽形幼体后期,纤毛环逐渐退化,浮游能力减弱,幼虫由浮游转至底栖生活.在幼参培育期间,受精后第38～51天,平均水温为25.2℃,杂交幼参的体重特定生长率(SGR)为2.58％,而自交幼参的SGR略高,为3.03％;从受精后第51～80天,平均水温达到27.17℃,杂交幼参的生长速度减慢,SGR减小至0.66％,但平均体质量明显增加,到第80天达到(0.34±0.035)g,而自交幼参活动能力减弱,摄食量明显减少,SGR减小至0.08％,生长近于停滞,到第80天平均体质量为(0.19±0.034)g.自交苗和杂交苗的成活率相差不显著,分别为82.2％和73.9％.这表明,在高温条件下杂交苗种比自交苗种生长优势明显.     

刺参对温度适应的生理生态学研究进展

综述了近年来刺参对温度适应的生理生态学研究进展,概述了温度对刺参生长、发育、繁殖的影响以及刺参对极端温度的生理生化适应机制,重点分析了温度波动对刺参生长的影响及其相关机制;夏眠过程中刺参行为和生理变化;温度历史对刺参温度耐受性的影响及其生理机制等,并对今后刺参温度生理生态学研究的热点进行了初步分析。     

刺参体腔细胞的电镜制样技术研究

设计2种不同的固定方法,比较2种固定方法在刺参体腔细胞的扫描电镜制样和透射电镜制样中固定效果的优劣.选择能使体腔细胞充分分散的固定方法用于扫描电镜制样;而将能使体腔细胞凝聚成团的固定方法用于透射电镜制样.获得了令人满意的体腔细胞扫描和透射电镜照片.以多聚赖氨酸法、明胶法和聚乙烯醇缩甲醛法收集、黏附固定后的体腔细胞,实验结果显示：3种方法均可起到黏附体腔细胞的作用,通过探讨玻片黏附体腔细胞的有效方法,建立适用于海产无脊椎动物体腔细胞、血细胞、生殖细胞和原生动物、细菌等样品的扫描电镜制样方法.     

刺参不同养殖模式实验围隔内沉积物——水界面营养盐通量研究

研究刺参(Apostichopus japonicus)养殖模式对池塘底质的影响,于2007年5～11月间从不同养殖模式实验围隔内采得底泥样并通过实验室培养的方法测定了底泥耗氧率(SOD)及沉积物-水界面的N、P等.结果表明,投饵对SOD影响不显著(P>0.05),说明本实验条件下投饵没有造成实验围隔底泥中的有机物积累;7月份的SOD与其它月份间存在显著差异(P<0.05);大部分模式中沉积物释放溶解性无机磷酸盐(DIP)且不同月份之间的通量存在显著差异(P<0.05),不同模式之间的变化较复杂;在硝酸盐(NO-3+NO-2)通量结果中,投饵模式下的平均通量为非投饵模式下通量值的2～3倍,夏季的交换通量为冬季交换通量的2倍;当养殖密度较大时,非投饵模式中沉积物吸收氨氮的通量大于投饵模式中的通量,其它密度下投饵模式中沉积物释放氨氮的通量大于非投饵模式中的通量,并且随着养殖密度的增加通量值降低.     

日本对虾仔虾呼吸和排泄的初步研究

本文采用水瓶法和径流装置研究了不同温度下摄食和饥饿的日本对虾（Penaeus japonicus)仔虾（P）的呼吸与排泄。结果表明，日本对虾仔虾体长与干体重呈指数函数关系，DW＝0．006e^0.515L(r^2=0.999,n=16)；耗氧和氨排泄率随着温度的升高而提高、随着仔虾体重的增长反而变小；耗氧和氨排泄率与体重呈幂函数关系，30和26℃下耗氧率（R）与体重的关系方程式分别是R＝2.669DW^-1.041(r^2=0.953,n=8)和R=2.370DW^-0.708,(r^2=0.533,n=8)，30和26℃下氨排泄率（E）与体重的关系方程式分别是E＝36.81DW^-0.615(r^2=0.654,n=8) 和E＝15．28DW^-0.795(r^2=0.652,n=8）；饱食仔虾的耗氧率明显高于饥饿的仔虾，因摄食使仔虾（P15）额外消耗的能量为4％－20％，仔虾的特殊动力作用（SDA）大约在摄食5－7h后发生，并可持续作用10h左右。