金属离子对锯缘青蟹NAGase活力的影响

本文研究了几种金属离子对锯缘青蟹（Scylla serrata）N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）活力的影响．其结果表明：Li^＋、Na^＋和K^＋对酶活力没有明显影响，Mg^2＋、Ca^2＋和Ba^2＋对该酶均有激活作用，激活程度依次为Ca^2＋〉Ba^2＋〉Mg^2＋．Al^3＋、Fe^3＋、Cd^2＋、Pb^2＋和Hg^2＋对该酶具有一定的抑制作用，2．0μmol／dm^3的Hg^2＋可以使酶活力完全丧失．Co^2＋对酶的效应是先激活后抑制，Mn^2＋对酶仅有轻微的激活作用．Cd^2＋和Fe^2＋对锯缘青蟹NAGase的抑制作用都呈竞争性-反竞争性混合Ⅱ型效应，Cd^2＋的抑制常数Ki和KiS分别为23．9、5．0mmool／dm^3，Fe^3＋的抑制常数Ki和KiS分剐为395．5、135．6μmol／dm^3．Ki〉KIS说明酶一底物络合物（ES）与抑制剂的亲和力比游离酶（E）与抑制剂的亲和力大．     

牙鲆孵化酶的分离纯化及其部分生物化学性质研究

利用凝胶过滤柱层析和阴离子交换柱层析技术，从牙鲆（Paralichthys olivaceus）胚胎孵化液中分离纯化出了大小约为34．8ku的牙鲆孵化酶。该酶卵膜裂解的最适反应温度为35℃，最适pH为7．0；对底物酪蛋白的米氏常数Km值为1．53mmol／L。该酶对丝氨酸蛋白酶和胰蛋白酶的特异性抑制剂非常敏感，而对其他蛋白酶抑制剂不敏感，表明该酶极可能是一种丝氨酸蛋白酶类型的胰蛋白酶。此外，该酶可浓度依赖性地被EDTA所抑制，被Cu^2＋所强烈抑制，被Ca^2＋和Mg^2＋所激活，对Zn^2＋则不敏感，表明该酶很可能是一种金属蛋白酶。     

深海沉积物宏基因组文库中产蛋白酶克隆CAPRO2的筛选及酶学性质分析

利用选择性筛选培养基从所构建的深海沉积物宏基因组文库中筛选得到一株产蛋白酶的克隆（CAPR0002）,对其进行了酶学性质分析．结果表明该酶的最适作用温度为65cc,最适作用pH值为9．0．该蛋白酶具有较好的热稳定性,在40cC以下的温度中可长期保持稳定,在50℃中处理6h后仍能保持60％的活力,在60℃下保温30rain后仍能保持约60％的活力．Ca^2＋、Mg^2＋、sr^2＋、co^2＋对该蛋白酶有明显的促进作用,而且ca^2＋的存在可明显提高该蛋白酶的热稳定性,ca^2＋、sr^2＋、c0^2＋这3种离子均在3．0mmol／dm^3。浓度时具有最高的促进作用,当浓度高于3．0mmol／dm’时,这3种离子对酶活力的促进作用减弱．Hg^2＋、Fe^2＋、cu¨对酶有明显的抑制作用．CAPR02蛋白酶在pH值为7。5～9．5时活力较高,pH值为7。5时可保持约80％的活力,pH值为9．5时保持60％的活力,而在pH值高于9．5的条件下酶活力下降较快,pH值为10．0时活力降为约15％,表明CAPR02属于碱性蛋白酶．丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF、E一64和AEBSF对CAPR02蛋白酶均无抑制作用,显示该酶不属于丝氨酸蛋白酶,而EDTA对酶有明显的抑制作用,表明该酶属于金属蛋白酶．     

不同养殖期的凡纳滨对虾外壳膜NAGase基本性质比较

以不同生长期的凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）的外壳为材料，分离提取外壳膜N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（EC3．2．1．52，NAGase），测定分析不同生长期的外壳膜NAGase的酶比活力及其性质的变化．结果表明：不同生长期的酶活力、最适温度、催化反应的动力学参数（Km、vm）、活化能等均存在差异．不同生长期酶的最适pH均为5．5．不同生长期的对虾外壳膜NAGase对Cu^2＋、Zn^2＋和Hg^2＋的敏感性也不同．Cu^2＋对养殖8周对虾外壳膜NAGase的激活作用最为显著，可以使酶活力提高到400％．Zn^2＋对不同生长期的酶活力均有抑制作用，但对成体对虾酶抑制作用最为显著，可以使酶活力下降80％．Hg^2＋对各个生长期的酶活力影响效果也不一样，当浓度为0．1mmol／dm^3时，仅对养殖6、8、9周的对虾的酶有激活作用，当Hg“浓度为1．0mmol／dm^3时，五个生长期的虾皮NAGase活力均受到不同程度抑制．     

重金属毒性对刺参幼参SOD活性的影响

采用体外慢性毒性实验，研究了3种重金属离子Cd^2＋、Hg^2＋和Zn^2＋对刺参（Apostichopus japonicus）幼参内脏超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响。结果表明，随着3种重金属离子暴露时间的延长，幼参SOD活性发生了明显的变化。0．009-0．046mg／L的 Hg^2＋对SOD活性的影响在24h和48h时表现为诱导效应，96h的SOD值达到最大，144h的SOD值下降。0．195～0．976mg／L的Zn^2＋对幼参SOD活性的影响48h表现为诱导效应，96h和144h的SOD活性下降。Hg^2＋和Zn^2＋对幼参SOD活性的影响，均表现为随暴露时间延长，先诱导后抑制的趋势。0．214～1．069mg／L的Cd^2＋对幼参SOD活性的影响48h表现为抑制效应，96h和144h表现为诱导效应。     

温度、pH和金属离子对仿刺参蛋白酶活力影响的研究

利用分光光度计比色法测定了温度、pH值和Hg2 等9种金属离子对体长24.2cm±0.7cm仿刺参(Apostichopusjaponicus)消化道中蛋白酶活性的影响。结果表明,蛋白酶的最适温度为40℃,对热不稳定,最适pH为7.2。Hg2 ,Mn2 ,Ag ,Pb2 ,Ba2 ,Ca2 对蛋白酶的活性有抑制作用,抑制作用由强至弱依次为Hg2 >Ag >Mn2 >Pb2 >Ca2 >Ba2 ,其中Hg2 和Ag 与对照差异极显著(P﹤0.01),表现出极强的抑制作用;Cu2 ,Zn2 ,Mg2 则对酶活有一定的促进作用,其促进作用大小依次为Mg2 >Zn2 >Cu2 ,Mg2 与对照差异显著(P﹤0.05)。     

海洋细菌Pseudomonas sp.色素的提取及稳定性的研究

对分离自广东大亚湾表层海水的一株海洋细菌（Pseudomonassp.）所产的灵菌红素,作了提取和稳定性分析,探讨了酸度、温度、紫外线、金属离子对色素稳定性的影响.结果证明,灵菌红素在pH 2～pH 5之间稳定性很好,在碱性环境中稳定性差;在pH=3时该色素的热稳定性好,pH＞5时其热稳定性较差;紫外线随溶液的pH增大对色素的稳定性影响越大,pH=9时的影响最大;Zn^2＋对该色素有增色作用,Mg^2＋和Mn^2＋则有一定的破坏作用,Pb^2＋可以使色素产生沉淀,其它金属离子影响不大.总之,该灵菌红素各种性质比较稳定,具有作为一种天然色素资源的开发和应用价值.     

中国对虾酚氧化酶的部分生物化学特性的初步研究

以海捕中国对虾(Penacus chinensis)为材料，运用离心、凝胶过滤柱层析和离子交换柱层析的方法从对虾血淋巴中部分纯化出酚氧化酶。实验又以L-DOPAC为底物，分析各种因子对其活力的影响。结果显示酚氧化酶的最适pH值约为6．0，最适温度为40℃，Cu^2 能强烈抑制酚氧化酶的活性，而Mg^2 则能促进其活性，表明酚氧化酶可能是一种金属酶。     

不同条件因子对海月水母胃丝蛋白酶活性的影响

本实验采用福林-酚法测定了海月水母(Aureliaaurita)胃丝酶粗提液中蛋白酶的活性,并系统地研究了不同温度、pH和金属离子对海月水母胃丝蛋白酶活性的影响。结果表明,海月水母胃丝蛋白酶具有很高的活性,且蛋白酶的最适温度为37℃,最适pH值为8.5。Mn~(2+)离子对海月水母蛋白酶活性具有良好的促进作用,而Cu~(2+)和Zn~(2+)对蛋白酶具有很强的抑制作用, Mg~(2+)、K~+、Ca~(2+)对蛋白酶活性没有明显影响。     

温度和pH值对南美白对虾(Penaeus vannmei)消化酶活性的影响

采用双因子交互的方法研究了不同温度和pH值对南美白对虾淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性的影响。结果表明，南美白对虾肝脏、肠道、胃的淀粉酶最适温度分别为30℃、35℃、30—35℃，最适pH均为6．2。肝脏、肠道、胃的蛋白酶最适温度分别为50—65℃、55—65℃、60℃，肝脏蛋白酶最适pH为8．5—9．0，肠道蛋白酶最适pH为7．5—8．5，胃蛋白酶最适pH为2．0和5．5—6．5。脂肪酶的活力很小，肝脏、肠道、胃的脂肪酶最适温度均为37℃ ，最适pH均为7．7。同时测得南美白对虾肠道、肝脏、胃组织内的pH分别为6．7—7．0、5．9—6．1、5．1—5．3。在三种消化酶各自最适的温度、pH值下，比较其活力大小，在肝脏、肠道、胃均为蛋白酶>淀粉酶>脂肪酶。     

产壳聚糖酶菌株选育及培养条件优化

以假单胞菌Y8．0为出发菌株,分别通过亚硝基胍(NTG),Co^60,UV(紫外)诱变,采用透明圈法筛选,获得了产壳聚糖酶较好的突变菌株假单胞菌Y8,其所产酶活力达到3．0U／mL,酶活力提高近6倍,并具有较好的遗传稳定性。3种诱变方法中,UV诱变效果最好。对假单胞菌Y8产壳聚糖酶培养条件进行研究,得到1个比较优化的培养条件为：pH值6．5,温度32℃,壳聚糖3g／L,酵母膏0．3％,培养时间3d。不同金属离子及不同诱导物对酶合成的影响表明：Fe^2 ,Mg^2 激活作用显著。而Zn^2 ,Mn^2 则具有一定的抑制作用,壳聚糖和氨基葡萄糖对壳聚糖酶的产生都有较好的诱导作用。     

亚致死剂量铜对文昌鱼和玫瑰无须钯的组织病理学影响

采用半静水实验法测试研究了重金属Cu^2＋对文昌鱼（Branchiostoma belcher）和玫瑰无须喜巴（Puntius conchonius）的急性致死毒性和亚急性毒性。实验结果表明，Cu^2＋对文昌鱼和玫瑰无须喜巴24，48，72，96h的半致死浓度分别为0．561，0．373，0．261，0．211mg／L及0．976，0．783，0．562，0．473mg／L，其安全质量浓度分别为0．021和0．047mg／L。亚急性毒性实验中，文昌鱼和玫瑰无须喜巴分别用浓度为20％和30％的96h LC50的Cu^2＋处理。不同器官的组织病理学观察结果表明，过量Cu^2＋对玫瑰无须喜巴的鳃、肝脏、肾脏等器官产生毒害，对文昌鱼鳃和肝盲囊细胞也产生了严重的毒害，表现为细胞空泡化等明显的结构破坏。实验结果显示文昌鱼的肝盲囊和脊椎动物的肝脏一样，也是受过量铜显著毒害的主要靶器官器官。因此，文昌鱼的肝盲囊至少在经受过量Cu^2＋毒害方面与脊椎动物肝脏具有相似性，从生理功能方面为类文昌鱼祖先的盲囊（digestive caecum）是脊椎动物肝脏的前体这一假说提供了资料。     

中华绒螯蟹鳃上皮Na+-K+-ATPase性质的研究

本文研究了中华绒螯蟹鳃上皮Na^ -K^ -ATPase的性质，并比较了各对鳃丝Na^ -K^ -ATPase的活性大小。结果表明：中华绒螯蟹鳃上皮Na^ -K^ -ATPase的最适温度为40℃，温度高于45℃时酶活急剧下降；最适pH为8．0，并且其活力对pH的变化非常敏感，当pH小于7．5或大于8、25时酶活急剧下降；最适底物和Na^-，K^ ，Mg^2 浓度分别为1．5，75，15，6mmol／l；反应介质中乌本苷浓度达到2mmol／l时，Na^ -K^ -ATPase的活力完全被抑制；中华绒螯蟹后3对鳃丝Na^--K^ -ATPase的活力极显著高于前5对鳃丝的酶活力。     

金属离子对长毛对虾酸性磷酸酶的影响

本文研究几种金属离子分别对健康虾和病虾酸性磷酸酶ＡＣＰａｓｅ（ＥＣ３．１．３．２）活性的影响。结果表明,Ｎｉ＾２＋、Ｍｇ＾２＋、Ｃｄ＾２＋对酶无明显抑制作用,Ｚｎ＾２＋、Ｃｕ＾２＋、Ｈｇ＾２＋对酶活力抑制明显。当Ｈｇ＾２＋离子浓度达０．５ｍｍｏｌ／ｄｍ＾２时,酶活力被抑制９６％和９５％;各金属离子对酶的抑制强度依次为Ｈｇ＾２＋〉Ｃｕ＾２＋〉Ｚｎ＾２＋〉Ｐｂ＾２＋〉Ｃｄ＾２＋、Ｍｇ＾２＋〉Ｎｉ＾２＋     

褐藻胶裂解酶产生菌Vibro sp．OY102的发酵条件优化

对海洋来源的Vibro sp．QY102的产褐藻胶裂解酶的发酵条件进行研究。结果表明，该菌株最适液体培养基成分为（w／v）：0．5％褐藻酸钠；0．4％蛋白胨；0．3％KH2PO4；0．7％K2HPO4·3H2O；2％NaCl；0．01％MgSO4·7H2O，pH=6．0。按3％的接种量接入培养基，30℃150r／min振荡培养120h，产酶达到10．2u／mL，为优化前的4．5倍。Mg^2＋是该菌株产酶所必需的，这在其他褐藻胶裂解酶生产菌株中未见报道。该菌株产酶发酵条件的研究，为褐藻胶裂解酶的大规模制备及应用奠定了基础。     

探针药物法评价磺胺甲基异噁唑、甘草和连翘对牙鲆CYP2E1活性的影响

采用探针药物法研究磺胺甲基异噁唑（SMZ）、甘草及连翘对牙鲆细胞色素P4502E1（CYP2E1）活性的影响，为临床合理用药提供参考。将牙鲆随机分为4组，即对照组、SMZ组、甘草组和连翘组。依次每日口灌0．9％的生理盐水、口灌SMZ150mg／kg·bw、甘草30mg／kg·bw和连翘100mg／kg·bw。连续6d后，第7天时4组牙鲆同时一次性腹腔注射探针药物氯唑沙宗。分别于注射给药后不同时间点采血。通过HPLC检测探针药物的血药浓度，计算药动学参数，间接评价各组对CYP2E1酶的活性影响。结果表明：氯唑沙宗在4组牙鲆体内代谢的药时曲线均符合二室模型。甘草组和连翘组氯唑沙宗的半衰期分别增加了0．311倍和0．799倍，均差异极显著（P〈0．01）；SMZ组与对照组差异不显著。药时曲线下面积SMZ组与对照组比较减少了0．277倍，甘草组增加了0．286倍，差异均显著（P〈0．05）；连翘组增加了0．865倍，差异极显著（P〈0．01）。总清除率（CL）SMZ组增加了38．83％，连翘组减少了46．88％，均差异极显著（P〈0．01）；甘草组减少了21．22％，差异显著（P〈0．05）。说明甘草，连翘对牙鲆CYP2E1的活性均具有明显的抑制作用，连翘的抑制作用高于甘草，SMZ对牙鲆CYP2E1的活性具有诱导作用，差异不显著。     

过氧化氢对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的抑制动力学

研究过氧化氢对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响及抑制动力学．其结果表明，过氧化氢对该酶有显著的抑制作用，随着过氧化氢浓度的增高，酶活力呈指数下降，测出可使酶活力下降50％的过氧化氢浓度（抑制半衰期，IC50）为115mmol／dm^3．低浓度过氧化氢对该酶的抑制过程显示为可逆效应．采用底物反应动力学方法研究过氧化氢对该酶的抑制作用动力学并建立动力学模型，测定游离酶（E）和酶．底物络合物（ES）的微观抑制速度常数k＋0和k＋0，并加以比较．实验结果（k＋0〉k＋0）表明底物对酶被过氧化氢的抑制作用有一定保护作用．过氧化氢可能是通过氧化酶活性中心功能基团而导致酶活性的丧失．     

悬浮物对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)幼鱼肝脏溶菌酶、超氧化物歧化酶和鳃丝Na+-K+-ATPase活力的影响

在实验室条件下构建不同的悬浮物浓度环境，采用试剂盒分析方法研究了不同浓度悬浮物对半滑舌鳎幼鱼肝脏溶菌酶（LSZ）、超氧化物歧化酶（SOD）和鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力的影响。养殖水体中悬浮物浓度添加量分别为0（对照）、50、100、200和400mg／L，每5天采样测定一次，实验周期为25天。结果表明，当悬浮物浓度添加量为50和100mg／L时，肝脏LSZ和SOD活力与对照组无显著差异（P〉0．05），当添加量为200和400mg／L时，肝脏LSZ和SOD活力与对照组有显著差异（P〈0．05）；实验后期各实验组鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力与对照组均有显著差异（P〈0．05）。在悬浮物效应的25天内，各实验组肝脏LSZ活力呈峰值变化，10天时除100mg／L浓度添加组外均达到最大值；而肝脏SOD活力在50和100mg／L浓度添加组略有升高，在200和400mg／L浓度添加组则基本呈下降趋势；鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力前10天各实验组较对照组无显著变化，之后则显著降低，后期基本趋于稳定，其活力低于初始水平；实验结束时，各实验组其肝脏LSZ、SOD和鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力相对于对照组都受到了不同程度的抑制，其中各实验组鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力抑制率分别达到了27．6％、65．2％、57．0％和71．1％。     

盐度和pH值对鮸鱼幼鱼耗氧率和氨氮排泄率的影响

利用实验生态学的方法研究了不同盐度及pH值对鮸鱼幼鱼的呼吸、排泄的影响．结果表明，不同盐度对鮸鱼幼鱼耗氧率、氨氮排泄率有显著影响（P〈0．05），盐度11～26，鮸鱼幼鱼耗氧率逐步上升，26时达到峰值后呈下降趋势；pH值对耗氧率无显著影响（P〉0．05），pH6．5～9．0鮸鱼幼鱼耗氧率变化幅度很小，在此范围内pH值的变化对鮸鱼幼鱼氨氮排泄率有显著影响（P〈0．05）．O：N比值也随着盐度升高而升高，26时达到峰值，随后下降；pH8．0时，O：N比值最低；不同盐度和pH下鮸鱼幼鱼平均O：N分别为24．258，22．378．鮸鱼幼鱼主要以蛋白质为能源，脂肪和碳水化合物其次．     

温度、光照和pH之间的相互关系对光合细菌生长的影响

我们于1996年3月至8月，在光合细菌培养期间，对光合细菌培养条件的最适温度、光照和pH进行较系统的研究与观察，发现了温度、光照和pH值同时影响着光合细菌的生长。而且温度、光照、pH值之间是相互制约的，温度与光照的强弱应是对立统一的。总结出光合细菌生长的最适条件应是互应的。经试验得出光合细菌生长的最适条件：（1）温度为15—20℃，光照度为30000—5000Lx，培养基pH为7．0。（2）温度为25—30℃时，光照为3000—500LX，其培养基pH为7．0。