一种新的中国对虾弧菌病原菌──产气弧菌

于１９９３年８月，从山东省昌邑县下营镇患败血病的中国对虾血淋巴内分离到多株细菌，其中２株人工感染证实为病原菌；经５０多项形态，生理，生化特性测试鉴定为产气弧菌Ｖｉｂｉｏｇａｚｏｇｅｎｅｓ。其主要特性为：革兰氏阴性，弧状，极生单鞭毛，产生红色素，氧化酶呈阳性，精氨酸双水解酶，赖氨酸脱羧酶，鸟氨酸脱羧酶均为阴性，淀粉酶，明胶酶为阳性，硝酸盐还原阴性，利用木糖，水杨苷，山梨醇发酵葡萄糖产气，利用柠檬酸盐     

欧洲鳗鲡肝肾病病原菌的分离与鉴定

患肝肾病的养殖欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)出现肝、肾肿大,且肝脏具白色溃疡灶的症状。从肝脏中分离、纯化到优势细菌,定名AL60306NA1。人工感染试验证实:向欧洲鳗鲡腹腔内注射1.0×108cfu/mL菌株悬液,实验鱼死亡率达100.0%;注射1.0×107cfu/mL,死亡率为60.0%;形态学观察、API20E细菌鉴定试剂盒鉴定实验证明菌株AL60306NA1有动力、拥有革兰氏反应阴性、氧化酶阴性、H2O2酶阳性、兼性厌氧、发酵葡萄糖产酸产气、不发酵蔗糖和蜜二糖及L一阿拉伯糖、赖氨酸脱羧酶阳性、柠檬酸盐弱阳性、产生硫化氢和吲哚、MR阳性和典型的β-溶血等特征;16S rRNA特异性基因分析鉴定实验说明克隆的AL60306NA1 16S rRNA基因部份序列为1507bp、与迟缓爱德华氏菌(AB050829.1)的同源性达99.7%。综合上述结果,确定该菌株为养殖欧洲鳗鲡肝肾病的病原菌,并鉴定为迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)野生型。用菌株AL60306NA1感染小白鼠实验测定该菌对小白鼠的LD50为7.1×105cfu/mL,同时自该菌株PCR扩增到长度约1000bp的溶血素基因特异性片段,结果表明菌株AL60306NA1有一定的致病力。     

中华鳖腐皮病致病菌的研究

中华鳖腐皮病以病鳖背甲、腹甲、四肢和头颈溃烂，腹甲发红为主要特征。从患病中华鳖病灶上分离到七株菌，其中一株菌为强毒菌株，用该株菌进行人工感染，死亡率均为１００％，症状与自然发病相似。该株菌特征是：Ｇ－短杆菌，极生单鞭毛，对弧菌抑制剂不敏感；在ＴＣＢＳ上生长，产Ｈ２Ｓ，Ｖ．Ｐ反应阳性，存在细胞色素氧化酶过氧化氢酶等酶类；不存在脲酶过氧化氢酶等酶、氨酸脱羧酶等酶类。     

养殖大菱鲆腹水病病原的研究

从患腹水病的大菱鲆(Scophthalmus maximus)肝和腹水中分离得到优势菌株CW-7,人工感染证实该菌株对大菱鲆幼苗有较强的致病性,腹腔注射1.4×103cfu/尾,即可引起感染鱼100%的死亡,症状与自然发病鱼相似;病原菌为革兰氏染色阴性,直杆状(0.4~0.8)×(0.6~2.0)μm,周生鞭毛运动,氧化酶阴性,兼性厌氧菌,兼具葡萄糖氧化和发酵(O/F)2种代谢途径,其生理生化特征与迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)一致;对该菌的16SrDNA序列克隆、测序后在GenBank中进行了序列对比分析,结果与迟缓爱德华氏菌的序列高度一致(99.92%),进化树分析表明属于同一类群,确定该菌株为迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)。该菌株对庆大霉素、卡那霉素、多粘菌素B等14种抗生素敏感,而对青霉素、萘啶酸、复方新诺明等14种药物均具有抗性。     

大黄鱼皮肤溃烂病病原的研究

从福建省厦门西海域某渔排养殖大黄鱼(Pseudosciaena cyogga)患皮肤溃烂病的肝脏、肌肉分离到2株优势菌。人工感染试验证实其中1株为致病菌。该菌的主要生理生化特性为革兰氏阴性，短杆状，极生单鞭毛，发酵葡萄糖，氧化酶阳性，赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸脱羧酶、水杨素、枸橼酸盐阴性，不产生H2S，利用葡萄糖、甘露醇产酸，对O／129(10μg)不敏感。在含0％，10％NaCl的普通培养基上不生长；在含2％，4％，6％，8％NaCl的普通培养基中生长；在温度30，35，40℃下生长良好，但4℃不生长。初步鉴定该病原菌为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)。药敏试验表明，该菌对卡那霉素、复方新诺明、链霉素等10种药物敏感，对青霉素G、氨苄青霉素、利福平等6种药物不敏感。     

斑节对虾弧菌的病原生物学研究

对患弧茵病的养殖斑节对虾作作了细菌学分析，取典型症状的淑死对虾的血淋巴和肝胰腺组织进行细菌分离，纯化，保种，并将分离菌进行回接感染，发现有很强的致病作用，且产生与自然发病相拟的症状，从感染弧菌病的病虾体内进行细菌的分离，纯化和保种，经栓验发现，分离菌和回接感染后的再分离菌均为革兰氏阴性短杆菌，极生单鞭毛，有动力，对O／129弧菌抑制剂敏感，发酵葡萄糖产酸不产气，氧化酶和过氧化氢酶反应呈阳性，不利用乳糖，蔗糖，蜜二糖，能利用柠檬酸盐，甘露醇，果糖和半乳糖，在无盐的蛋白胨水和10％NaCl的蛋白砾水中不生长，在3％，6％，8％NaCl的蛋白砾水中生长良好，吲哚反应呈阳性，V－P反应呈阴性，赖氨酸脱酸酶，鸟氨酸脱羧酶，明胶酶和淀粉酶试验呈阳性，β－半乳糖苷酶，色氨酸脱氨酶，苯丙氨酸脱氨酶和精氨酸双水解酶反应呈阴性，可还原硝酸盐，经鉴定，该病原菌为副溶血弧菌Vibria parahaemolyticus.     

香鱼(Plecoglossus altivelis)致病性类志贺邻单胞菌的分离与生化药敏鉴定

香鱼(Plecoglossus altivelis)是名贵洄游性鱼类,由于高密度养殖等因素导致病害频发。2021年7月强台风"烟花"过境后浙江省宁海县养殖香鱼暴发体表溃烂病,死亡严重。病鱼皮肤、肌肉溃烂并伴有周围皮肤充血。组织切片观察显示病鱼患处肌纤维断裂,周围红细胞、炎性细胞浸润;鳃丝和鳃小片中红细胞增多;肝细胞核呈空泡,部分细胞核染色质边集;脾脏内红细胞数量减少,部分白细胞聚集;肠黏膜上皮细胞脱落。从患病香鱼肠中分离到一株菌(编号NH21),其菌落低突、边缘光滑表面湿润,该菌株为革兰氏阴性菌,菌体呈短杆状、端圆。经生化特性和16S rDNA序列分析鉴定NH21菌株为类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)。用该菌株对健康香鱼进行回归感染后,人工感染香鱼呈现与本次体表溃烂病香鱼相似的症状,经计算NH21菌株对香鱼的半致死剂量(LD₅₀)为2.51×10⁷ CFU/mL。25种抗生素的药敏试验显示NH21菌株对阿奇霉素、头孢氨苄、新生霉素、多黏菌素B、头孢西丁、呋喃唑酮6种抗生素敏感。从NH21菌株中检出了毒力基因9个、耐药基因8个。综合分析表明,分离得到的类志贺邻单胞菌NH21菌株是本次宁海县香鱼体表溃烂病的病原菌,研究结果为香鱼出现类似病症的预防和治疗提供了基础资料。     

杜氏鰤的一种细菌病病原菌研究

从患病的杜氏（鱼师）肾脏分离出Y-1菌.人工感染试验,当注射9.0×107CFU/尾时,Y-1菌可致试验鱼100%死亡;注射9.0×106CFU/尾时,死亡率为50%,症状与自然发病相似,结果表明该分离菌为致病菌.Y-1菌为革兰氏阴性,有动力,杆状,极生单鞭毛;发酵葡萄糖,还原硝酸盐,氧化酶、触酶阳性,赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶阴性.根据形态及生理生化特性,Y-1菌应为弧菌Vibriosp..药敏试验结果表明,该菌对氨基糖甙类、呋喃类、喹诺酮类及大环内脂类药物敏感.     

杂色鲍Haliotis diversicolor溃疡症病原菌的研究

从患病杂色鲍Haliotisdiversicolor病灶上以TCBS及 2 2 1 6E平板划线各分离到两株致病性细菌 ,经人工感染实验可出现与自然发病相同的症状 ,并从感染鲍分离到同一菌株 ,证明该两株菌为杂色鲍溃疡症的病原菌。这两株菌的特征具明显一致性 :革兰氏阴性 ,短杆状 ,极生单鞭毛。氧化酶和过氧化氢酶阳性 ,淀粉酶、明胶酶阳性及脲酶阴性 ,可还原硝酸盐 ,不能利用柠檬酸 ,不产生吲哚和硫化氢 ,MR阳性、V .P实验阴性 ,发酵葡萄糖产酸不产气 ,O/ 1 2 9敏感 ,0 %和 1 0 %胰胨水中不生长。经鉴定该病原菌为亮弧菌ⅡVib riosplendidus-Ⅱ。还对亮弧菌进行了药敏试验 ,该菌对氨苄青霉素、氯霉素、复方新诺明等药物非常敏感 ,这些药物可作为防治该病的首选药物     

黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)“红头病”病原菌迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的分离及鉴定

用ATB微生物自动鉴定系统对分离自湖南湘潭地区人工养殖的患“红头病”的黄颡鱼体内的2株细菌（即HN004和HN005）进行了鉴定，发现它们的生理生化特征完全相同，均为革兰氏阴性短杆菌、接触酶阳性、吲哚阳性、H2S阳性；氧化酶阴性、V．P测定为阴性，与迟钝爱德华氏菌的表型特征非常相似。为进一步确定2株菌的分类学地位，测定了其16S rRNA基因序列，分析了相关细菌相应序列的同源性，构建分子系统发育树。结果表明，2菌株的序列完全一致，与迟钝爱德华氏菌的亲缘关系最近，相似性为99．0％。综合上述结果，2菌株可鉴定为迟钝爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）。