中国对虾人工诱导雌核发育的研究 Ⅱ.紫外线辐射对精子顶体反应和受精能力的影响

研究了 36 5 nm波长紫外线辐射中国对虾精子对其顶体反应和受精能力的影响。结果表明 ,低剂量紫外线辐射促进精子发生顶体反应 ,大剂量辐射使精子丧失发生顶体反应的生理机能并死亡。 36 5 nm波长紫外线能够透过精荚和纳精囊盖 ,对其内精子起到杀伤作用。精液稀释液在紫外线下辐射 5～ 8s,仍有部分精子具有受精能力 ,但胚胎在早期阶段即死亡。人工诱导雌核发育的过程中 ,紫外线辐射精液稀释液 5～ 8s,可获得遗传物质失活的精子 (激活源 )。经透射电镜观察分析 ,紫外线对精子遗传物质的损伤是一种使染色质变性的化学作用。     

中国对虾精子和卵子受精能力的初步研究

１９７３年，Ｃｌａｒｋ等以褐对虾（Ｐｕｎａｅｕｕｓ　ａｚｔｅｃｕｓ）为实验材料，将解剖的卵子和精子混合，首次在非鞭毛型不动精子的人工授精研究中获得受精卵，受精率为１０％［２］。１９８６年，Ｍｉｎ－ＮａｎＬｉｎ等在雌虾产卵时，将精子滴入产卵池中使卵子受精，孵化率高达６３．１１［４］。关于中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）精子和卵子受精能力的研究还未见报道。精卵的受精能力直接决定受精率，而受精率的高低影响苗种生产。因此．进行对虾精子和卵子受精能力的研究有利于对受精过程的进一步了解，以使更好…     

中国对虾受精生物学的研究

于１９８８－１９９１年在青岛对中国对虾进行受精能力和受精生物学的研究。对虾采用加温和不加温培育，然后用人工授精法－－水域法和滴管法授精研究精卵受精能力；应用扫描和透射电以及石蜡切片技术，精卵的形态结构和受精过程的变化。结果表明，水域法授精，精子入水后３ｈ仍具有受精能力；卵子入水后１ｍｉｎ之内受精率最高只达６２．７％。而滴客法授精，受精率最高可达到９８％。平均值也在６０－８０％之间。保持在低温的亲虾     

皱纹盘鲍人工诱导雌核发育精子遗传失活的初步研究

用波长253．7nm，光照强度1．108mW/cm^2的不同剂量紫外线照射皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai Ino)精子，然后与皱纹盘鲍的正常卵受精。在0－120s的照射范围内，受精作用都仍能正常发生，从早期胚胎存活率上可观察到“Hertwig”效应的存在，单倍体和非整倍体胚胎在孵化前死亡。在150000个精子／cm^2的条件下，精液厚度5mm左右，经70s以上紫外线照射后，精子染色体可完全失活。     

紫外线-B辐射对海洋微藻的生长效应

２０世纪以来 ,由于氯氟烃等的大量使用和航空航天飞行器数量的急剧增加 ,导致了平流层臭氧层的减薄 ,使到达地球表面ＵＶ -辐射呈增强趋势。由于臭氧层侵蚀和破坏的日渐加重，使得到达地面的紫外线，尤其是对生物ＤＮＡ具损伤作用的紫外线Ｂ波段(波长范围为２８０～３２０ｎｍ)的辐射增强。紫外线Ｂ的增强已影响整个地面生态系统的变化 ,这是最引人注目的全球变化现象之一。杨志敏等１９９４年指出 ,紫外线Ｂ的增强影响到植物的许多生理生化过程。大量的模拟试验结果表明 :在增强的ＵＶ Ｂ辐射下 ,许多植物(在检测的近３００种植物中有２／…     

光合细菌在对虾育苗生产中的应用

１９９５年４月２４日～５月８日，在文登高岛盐场育苗场５０ｍ３水体育苗池，进行了用几株光合细菌（ＲｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓＳ．Ｐ．）混合菌液作为中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）苗期水质净化剂及辅助饵料，取得了明显效果。育苗池水透明度提高约２０ｃｍ，幼体挂脏率下降５０％，变态提早１ｄ左右，且多产仔虾百万尾     

长毛对虾酸性磷酸酶功能基团的研究（II）

用化学修饰剂ｐＣＭＢ、ＮＢＳ、Ｋ试剂修饰长毛对虾Ｐｅｎａｅｕｓ ｐｅｎｉｃｉｌｌａｔｕｓ Ａｌｃｏｃｋ酸性磷酸酶（ＡＣＰａｓｅ，ＥＣ３．１．３．２），在修饰剂作用下，酶活力明显下降，健康虾酶对修饰剂的敏感性（ＮＢＳ除外）大都在于病虾酶。修饰酶的紫外２８０ｎｍ吸收光谱以及荧光３４０ｎｍ发射光谱的变化，表明酶活力下降的同时酶构象也产生相应的变化。结果表明，酶分子的半胱氨酸残基、色氨酸残基以及门冬氨酸、     

紫外辐射诱发三角褐指藻自由基伤害的研究

研究了ＵＶ－Ｂ对海洋微藻的影响。研究结果显示紫外辐射（ＵＶ－Ｂ,２８０－３２０ｎｍ）能抑制三角褶指藻的生长,藻细胞经紫外辐射处理后,自由基含量上升,超氧化物歧化酶（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ,ＳＯＤ）活性下降,而过氧化物酶（Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ,ＰＯＤ）活性变化不明显。作者认为,紫外辐射诱发自由基对藻细胞形成伤害是紫外线抑制藻细胞生长的主要原因之一）。     

中国对虾(Penaeus chinensis)的白点综合征病毒(WSSV)的提纯和核酸提取

作者从发生白点综合征的中国对虾中,提取了一株白点综合征病毒,用电镜对纯化的病毒进行了形态学观察,并对病毒纯化过程中蛋白酶抑制剂的使用及离心速度的选择进行了探讨。经蔗糖密度梯度离心,分取各带负染后电镜观察,病毒条带位于４０％～５０％蔗糖梯度之间,其完整毒粒长２２５～２７０ｎｍ,直径７５～８８ｎｍ,有的完整毒粒带有很长的尾,病毒衣壳长２５０～３２０ｎｍ,直径６０～８０ｎｍ。在匀浆使用的缓冲液中加入蛋白酶抑制剂ＰＭＳＦ,可得到完整的带包膜的病毒颗粒,比不使用ＰＭＳＦ的提纯效果要好。经３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ,５０００ｒ／ｍｉｎ离心２５ｍｉｎ,去除大部分的组织碎片,经１００００ｒ／ｍｉｎ离心１ｈ,可使大部分病毒沉淀。并采用传统的方法对病毒核酸进行了提取,其基因组经初步分析为ｄｓＤＮＡ。     

中国对虾(Penaeus chinensis)病害爆发流行期间杆状病毒亚微形态的电镜观察

对１９９４～１９９５年中国对虾病害爆发期间病虾肝胰脏、鳃、胃及肠组织进 行了透射电镜观察。结果表明，多亚群杆状病毒感染是病害发生的主要原因。杆状 病毒以无包涵体１００～１３０ｎｍ×５００～５２０ｎｍ、１１０～１３０ｎｍ×３００～３３０ｎｍ及有包涵 体的 １００～１３０×３００～３３０ｎｍ ３种形态存在。     

中国对虾精子超温保存的研究

于１９９１年１１月－１９９３年５月对中国对虾纳精囊中精子进行超低温保存研究。结果表明，以自然海水或人工海水作基础液添加１０％ＤＭＳＯ（Ｖ／Ｖ）及５％－１０％的甘油配制成抗冻稀释液，稀释中国对虾精子进行超低温保存最有效，存尖率在６０％以上；保存９４－１３８ｄ，解冻后作人工授精，受精率最高达５９％；稀释液中Ｍｇ＾２＋，Ｋ＾＋，Ｃａ＾２＋为超低温保存所必需，但Ｃａ＾２＋浓度过高则不利于精子的保存。光镜及     

中国对虾气泡病的初步研究

气泡病一般发生在幼鱼和仔虾消化道及鳃丝中，导致鱼虾部分死亡。自Ｍａｒｓｈ和Ｇｏｒｉｈａｍ于１９０５年报道了鱼的气泡病后已有许多报道，但对于虾的气泡病报道较少。Ｌｉｇｈｔｎｅｒ，Ｄ．Ｖ．等报道过褐对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ　ａｚｔｅｃｕｓ）蚤ＩＩ期幼体及稚虾的气泡病［６～９］。１９７９年著者进行中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）摄饵量实验［４］过程中曾遇到仔虾消化道气泡病，致使仔虾漂浮在水面，死亡率较高（＞３０％）导致实验不能进行。为此笔者对中国对虾气泡病的成因及防治方法进行了初步研究并于１…     

锯缘青蟹纳精囊精子顶体酶活力研究

顶体酶是精子顶体部特有的胰蛋白酶,其在顶体反应、精子和透明带的结合及穿透中起重要作用.本文采用测定精子顶体氨基化酶活力方法来测定锯缘青蟹（Scylla serrata）精子的顶体酶活力.据测定,青蟹纳精囊精子项体酶活力分别为3.566 μIU/10^6和4.248 μIU/10^6.青蟹精子顶体酶活力和用同样方法测定的其它物种（如猪、人、马）相比较低.这反应了不同物种之间的精子顶体酶活力存在着较显著的差异,也反应青蟹纳精囊中精子处于一种抑制状态.这种精子活力抑制方式可能有利于精子在纳精囊中的长期存活.本实验结果也说明,临床应用的顶体酶测定方法也可以用于蟹类精液质量的评价.     

保存液中Ca2+、Mg2+、K+对中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）精子体外保存存活率的影响

提要以伊红染色法检测样品精子存活率为依据,研究了4℃下5种保存液及Ca2 、Mg2 离子对中华绒螯蟹精子体外保存效果的影响。5种保存液分别为人工海水(ASW)、2倍钙离子人工海水(2×Ca2 -ASW)、无镁离子人工海水(Mg2 -FASW)、无钾离子人工海水(K -FASW)、无钙离子人工海水(Ca2 -FASW),经4天保存后,各保存液中精子样品的存活率和精子密度均出现明显差异,K -FASW、ASW及2×Ca2 -ASW三种保存液中的精子因发生顶体反应而大量死亡,而Mg2 -FASW、Ca2 -FASW的保存效果较好。在此基础上,进一步探讨了不同Mg2 和Ca2 浓度对精子存活率的影响,结果发现,经24h保存后各实验组精子存活率均随着两种离子浓度的增加而明显下降。上述结果表明:K -FASW、ASW及2×Ca2 -ASW不适合精子保存,而Mg2 -FASW和Ca2 -FASW均可作为该蟹精子的保存液;Ca2 因可引起精子顶体反应而造成保存液中精子的大量死亡,其浓度与存活率呈明显的负相关;无K 的保存液中,Ca2 、Mg2 的存在与否对精子的保存效果起关键作用;无Mg2 人工海水之所以具有较好的保存效果,可能与Mg2 的缺乏而导致Ca2 逆浓度差转运受阻,避免了因Ca2 进入而诱发顶体反应有关。     

盐度及保存时间对牙鲆精子活力的影响

人工授精是鱼类养殖过程中的一项重要技术,获取具有受精能力的精子是这一活动中的重要步骤。环境因子对于海产鱼类精子生理状态的影响国内已有初步研究［１,２］,但环境因子对牙鲆精子的作用还需进一步研究。本实验着重研究了牙鲆精子于室温条件下贮存不同时间后,这些精子在不同盐度条件下的活力,以及室温条件下,于精液中保存了不同时期后的精子在天然海水中（盐度为３２）使卵子受精的能力。１材料与方法１．１精、卵的获取实验中所用的牙鲆亲鱼取自山东荣成市寻山养鱼场的亲鱼池。卵子和精子系采用人工挤压的方法获得。挤压过程中防…     

中国对虾人工诱导雌核发育的研究Ⅰ──四步诱导法

１９９０～１９９３年于青岛采用研究鱼类人工诱导雌核发育相类似的方法 ──紫外线照射精子、受精、温度或细胞松胞素Ｂ处理卵子方法，对中国对虾进行 人工雌核发育的研究。实验结果，有三批材料获得较好的效果：二批培育到蚤状幼 体，另一批培育到３～３．５ｃｍ幼虾。经受精细胞学观察，被照射的精子经受精，其核 有的不能原核化，有的虽能原核化，且能向中央迁移，但都不能与卵原核结合。实验 表明，这三批育出的个体是雌核发育的个体。     

天津地区对虾暴发性流行病的病因、病理及传播途径的初步研究

本文对１９９３年天津地区对虾暴发性流行病的病因、病理及传播途径进行了初步研究。１材料和方法试验材料取自塘沽区、汉沽区、宁河县和大港区发病和未发病虾池的可疑濒死活虾（体长４～７ｃｍ），固定前快速将肝胰腺连同中肠取出，或将头胸甲剪开，将虾体切成背部相连的数段，浸入Ｄａｖｉｄｓｏｎ固定液中固定［２］，组织病理观察用石蜡切片，厚８μｍ，Ｈ－Ｅ染色。电镜材料是将肝胰腺切成小块浸入２．５％戊二醛液固定，放入冰桶中带回试验室，常规超切，透射电镜观察，细菌调查用无菌瓶采水，用异养菌培养基（ＰＧＹ）和ＴＣＢＳ选择…     

中国对虾卵细胞中病毒及其发生基质超微结构研究

用电匀是对中国对虾卵细胞进行病毒检测，在胞质中发现一种杆状病毒和一种球形病毒及其病毒发生基质；杆状病毒为３５－４０＊１１０－１２０ｎｍ，球形病毒直径为６０－７０ｎｍ，均具包涵体和囊膜；     

光度法测定低含量有机硫化合物

提出用氧瓶燃烧－光度法来测定有机物中硫含量的定量分析方法，在低硫酸根浓度范围内（４～２５ｍｇ／ｌ），在浓碱条件下ＭＴＢ（甲基百里酚蓝）的吸光度与硫酸根浓度在４６０ｎｍ波长处呈正相关，而在６００ｎｍ（或６１０ｎｍ）处Ｂａ－ＭＴＢ络合物的吸光度与硫酸根浓度呈负相关。该方法标准偏差低于０．５ｍｇ，／ｌ．变异系数低于３％，回收率为９５－１０７％。     

人工诱发合浦珠母贝雌核二倍体发生及“Hertwig效应”的初步研究

用中心波长为254nm、光照强度为4μW/cm~2的紫外线,照射合浦珠母贝[Pinctada ma-tensil(D_o)]和长耳珠母贝[Pinctada chemnitzi(P_o)]的精子,然后与合浦珠母贝的正常卵授精,在0-150s的照射范围内,从早期胚胎存活率上可以观察到“Hertwig效应”的存在,由此得到的单倍体和非整倍体胚胎在孵化前死亡。精子经120s紫外线照射后,染色体完全失活,但受精作用仍能正常发生。长耳珠母贝精子经 120s照射,异种授精(♀合×♂长)后21min,用浓度为0.4mg/l的细胞松弛素B处理15min,抑制受精卵的第二极体排放,可以诱发合浦珠母贝产生74.0％雌核二倍体胚胎,其孵化率为2.1％。