| 红笛鲷CD40和去除信号肽CD40的原核表达 |
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| 引用本文： | 樊云霞,简纪常,鲁义善,吴灶和.红笛鲷CD40和去除信号肽CD40的原核表达[J].广东海洋大学学报,2013(4). |
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| 作者姓名： | 樊云霞 简纪常 鲁义善 吴灶和 |
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| 作者单位： | 1. 广东海洋大学水产学院，广东 湛江 524088; 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，广东 湛江 524088; 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室，广东 湛江 524088
2. 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，广东 湛江 524088; 广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室，广东 湛江 524088; 仲恺农业工程学院，广东 广州 510225 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(41240041)；广东省科技厅国际合作项目 |
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| 摘 要： | 根据红笛鲷(Lutjanus sanguineus)CD40基因cDNA全长序列设计2对特异性引物,利用RT-PCR技术从红笛鲷头肾组织中扩增出CD40 ORF序列和去信号肽序列,分别与原核表达载体pET-32a(+)相连,构建原核重组表达质粒,命名为pET32-CD40和pET32-△CD40,并分别转化至大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,分别于54 ku和53 ku处有清晰的目的蛋白条带。融合蛋白的表达效率最佳的表达条件,pET32-CD40是诱导温度37℃,起始D(600nm)为0.4,IPTG浓度为0.08 mmol/L,诱导5 h;pET32-△CD40是诱导温度37℃,起始D(600nm)为0.6,IPTG浓度为0.10 mmol/L,诱导6 h。在各自优化的表达条件下,pET32-△CD40融合蛋白表达量较pET32-CD40融合蛋白高。RNAstructure软件分析发现,CD40的mRNA 5′端序列形成复杂且较为稳定的二级结构,不利于翻译的起始,表明信号肽序列的存在可能对CD40基因在原核细胞中的表达有一定的影响。
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| 关 键 词： | 红笛鲷 CD40基因 原核表达 |
Optimization of Prokaryotic Expression of CD40 and CD40 Gene without Signal Sequence in Red Snapper (Lutjanus sanguineus) |
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| FAN Yun-xia
,
JIAN Ji-chang
,
LU Yi-shan
,
WU Zao-he.Optimization of Prokaryotic Expression of CD40 and CD40 Gene without Signal Sequence in Red Snapper (Lutjanus sanguineus)[J].Journal of Zhanjiang Ocean University,2013(4). |
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| Authors: | FAN Yun-xia JIAN Ji-chang LU Yi-shan WU Zao-he |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Lutjanus sanguineus CD40 prokaryotic expression |
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