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| 草鱼出血病病毒VP7蛋白基因的人工合成与原核表达 | |
| 引用本文： | 韦先超,杨泽晓,王 印,裴腊梅,姚学萍,汪开毓,杨水仙. 草鱼出血病病毒VP7蛋白基因的人工合成与原核表达[J]. 海洋与湖沼, 2013, 44(3): 645-650 |
| 作者姓名： | 韦先超 杨泽晓 王 印 裴腊梅 姚学萍 汪开毓 杨水仙 |
| 作者单位： | 1. 四川农业大学动物医学院 雅安625014;四川省水产学校 成都611730 2. 四川农业大学动物医学院 雅安625014;动物疫病与人类健康四川省重点实验室 雅安625014 3. 四川农业大学动物医学院 雅安625014 |
| 基金项目： | 教育部《长江学者和创新团队发展计划》创新团队项目, IRT0848 号; 四川农业大学双支计划, 00270401 号 |
| 摘 要： | 根据GenBank已发表的GCRVVP7蛋白基因序列,设计合成2条特异性引物和19条搭桥引物,通过搭桥PCR人工合成带有3处变异碱基的GCRVVP7蛋白基因整个编码框,经过酶切、连接、PCR鉴定和测序鉴定克隆到原核表达载体pColdTF中,并转化大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达和表达产物的SDS-PAGE、Western-blotting分析、纯化以及反应原性的iELISA检测。结果表明,成功人工合成了长831bp的GCRV VP7蛋白基因编码框和构建了VP7蛋白基因的重组质粒pCold TF-VP7,pColdTF-VP7转化菌经IPTG(1mmol/L)诱导3—4h即可获得特异性蛋白VP7重组蛋白的高效表达,VP7重组蛋白相对分子量大小约为73.9ku,与预期大小相符,且与鼠抗GCRV血清有良好反应原性。 |
| 关 键 词： | 草鱼出血病病毒 VP7 搭桥PCR 原核表达 |
| 收稿时间： | 2012-05-06 |
| 修稿时间： | 2012-08-23 |
ARTIFICIAL SYNTHESIS AND PROKARYOTIC EXPRESSION OF GRASS CARP REOVIRUS VP7 PROTEIN GENE |
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| WEI Xian-Chao,YANG Ze-Xiao,WANG Yin,PEI La-Mei,YAO Xue-Ping,WANG Kai-Yu and YANG Shui-Xian. ARTIFICIAL SYNTHESIS AND PROKARYOTIC EXPRESSION OF GRASS CARP REOVIRUS VP7 PROTEIN GENE[J]. Oceanologia Et Limnologia Sinica, 2013, 44(3): 645-650 | |
| Authors: | WEI Xian-Chao YANG Ze-Xiao WANG Yin PEI La-Mei YAO Xue-Ping WANG Kai-Yu YANG Shui-Xian |
| Affiliation: | College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University; Aquatic Technology Vocational College of Sichuan Province;College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University; Key laboratory of Animal Disease and Human Health of Sichuan Province;College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University;College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University;College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University;College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University;College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University |
| Abstract: | |
| Keywords: | Grass Carp Hemorrhage Virus VP7 Overlap extension PCR Prokaryotic expression |
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