| 刺参GPR54-like受体基因克隆及特征分析 |
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| 引用本文： | 于秋寒,平洪领,闫允君,史会来,吕振明,杨静文.刺参GPR54-like受体基因克隆及特征分析[J].海洋科学,2018,42(3):92-100. |
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| 作者姓名： | 于秋寒 平洪领 闫允君 史会来 吕振明 杨静文 |
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| 作者单位： | 浙江海洋大学海洋科学与技术学院国家海洋设施养殖工程与技术研究中心;浙江省海洋水产研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(41606150); 浙江省公益技术研究项目(2017C32074) |
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| 摘 要： | 采用c DNA末端快速扩增技术(rapid amplification of c DNA ends,RACE)克隆了刺参GPR54-like(Apostichopus japonicus,Aj GPR54-like,简称Aj GPR54L)基因c DNA全长,对Aj GPR54L全长c DNA序列进行了生物信息学分析;通过绿色荧光蛋白(GFP)融合表达,对其在HEK293细胞中进行了亚细胞定位分析;采用实时荧光定量PCR技术(q RT-PCR)检测Aj GPR54L在组织中的表达。结果表明:该基因全长1454 bp,包含993 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码330个氨基酸,191 bp的5′非翻译区(UTR)和270 bp的3′-UTR.预测蛋白质的相对分子质量为37.83 ku、等电点(p I)为9.81;预测蛋白序列分析显示Aj GPR54L具有GPCR家族蛋白典型的七次跨膜结构,包含1个预测的N-连接糖基化位点、5个Asn-Xaa-Ser/Thr序列子和34个磷酸化位点,无信号肽酶切位点;与已鉴定的GPR54s氨基酸序列同源性分析表明,Aj GPR54L与斑马鱼GPR54序列相似性最高,为30.0%;共聚焦显微镜检测显示Aj GPR54L-EGFP可定位于细胞膜表面;基因表达定量分析结果显示,Aj GPR54L在刺参呼吸树、消化道、体壁、肌肉、神经环中均有表达分布,且神经环中表达量显著高于其他组织。
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| 关 键 词： | 刺参(Apostichopus japonicus) GPR54 基因克隆 亚细胞定位 组织表达 |
| 收稿时间： | 2017/12/2 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2018/1/14 0:00:00 |
Molecular cloning and characterization of GPR54-like receptor in the sea cucumber Apostichopus japonicus |
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