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基于四种水产病原弧菌的简型芯片检测体系的优化
引用本文:朱鹏飞,李壹,王宗灵,曲凌云. 基于四种水产病原弧菌的简型芯片检测体系的优化[J]. 海洋科学进展, 2015, 33(2): 257-269
作者姓名:朱鹏飞  李壹  王宗灵  曲凌云
作者单位:1. 国家海洋局第一海洋研究所,山东青岛,266061
2. 国家海洋局第一海洋研究所,山东青岛266061; 中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛266003
基金项目:国家海洋局海洋公益性行业科研专项---重要鱼类增养区致病细菌基因芯片检测技术研究开发与示范(201105007-1);国家科技支撑计划---海洋水产病毒实用化检测及预警技术的建立与应用
摘    要:基因芯片技术在病原菌检测领域展现出良好的前景,本文依托水产病原菌基因检测芯片的检测体系,以水产常见病原弧菌的hsp60、toxR基因检测探针为研究对象,系统研究不同点样液配方、寡核苷酸探针浓度、荧光标记物质浓度、杂交温度、杂交时长对芯片杂交效果的影响,并进行相应优化。结果表明,杂交温度为60℃、杂交时长为2h、探针浓度为1μmol/L、Cy3标记的随机引物的用量为150pmol时,芯片的经济性、灵敏度、检测效率达到均衡;以0.1mol/L磷酸氢二钠和25%二甲基亚砜混合溶液作为点样液,效果较好。优化后的芯片对4种弧菌的检测没有出现交叉杂交现象,探针特异性达到100%;对溶藻弧菌全基因组DNA检测灵敏度为10fg,高出PCR方法约2个数量级。

关 键 词:弧菌  基因芯片  点样液  优化

Optimization of DNA Microarray Detection System for Aquaculture Pathogenic Vibrios
ZHU Peng-fei,LI Yi,WANG Zong-ling,QU Ling-yun. Optimization of DNA Microarray Detection System for Aquaculture Pathogenic Vibrios[J]. Advances in Marine Science, 2015, 33(2): 257-269
Authors:ZHU Peng-fei  LI Yi  WANG Zong-ling  QU Ling-yun
Affiliation:ZHU Peng-fei;LI Yi;WANG Zong-ling;QU Ling-yun;The First Institute of Oceanography,SOA;College of Marine Life Sciences,Ocean University of China;
Abstract:
Keywords:vibrio  DNA microarray  spotting buffer  optimization
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