扇贝的养殖环境及其体内的细菌学分析

自1992年9月～1994年11月，对青岛胶州湾养殖的扇贝及环境中的细菌组成和某些生态学特性进行了调查。养殖区表层海水中异养菌和弧菌平均数各波动于（21．2～39．7）×102／cm3和（7．3～19．2）×102／cm3之间。其中1号和4号站位的菌数比其它越位都高，这和它们靠近码头，受到附近的排水污染有关。在扇贝的消化盲囊和性腺内也分离到异养菌和弧菌，分别为103～105个g和103～105个／g。这些细菌可能因扇贝遇到环境改变防御能力下降时，扩散到其它器官并大量繁殖，因而造成感染而死亡。从对分离菌的药物敏感试验结果看，近年一些菌株对原来敏感的药物产生了抗药性，如四环索和链霉素，今后在育苗过程中避免滥用抗菌药物是十分重要的。     

栉孔扇贝(♀)×虾夷扇贝(♂)子一代杂种优势的SRAP分析

采用新型的分子标记技术(Sequence-related amplified polymorphism,简称SRAP)对栉孔扇贝(Chlamys farreri)(♀)×虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)(♂)子一代及其双亲的遗传变异进行分析.从不同的引物组合中筛选出9对条带清晰、多态性丰富的组合,9对引物共产生了121条扩增带,其中多态性条带107条,平均每对引物组合产生11.89条多态标记.Shannon信息指数I分别为0.299 9、0.218 9、0.334 3,Nei's基因多样性指数h分别是0.196 4、0.141 1、0.218 9,栉孔扇贝与杂交后代的遗传距离是0.107 4,虾夷扇贝与杂交后代的遗传距离是0.228 7,聚类分析也显示了这一特点.从变异贡献率来看,3个群体的总变异中,有37.31%的变异来源于群体间,62.69%的变异来源于个体间.     

栉孔扇贝大量死亡的流行病学调查研究

2001~2003年,对养殖的栉孔扇贝进行了较系统地流行病学调查研究.以栉孔扇贝养殖集中海区长岛县亚美扇贝养殖场为定点调查和样品采集点.调查内容主要包括栉孔扇贝各养殖期的死亡率和可疑病原生物检测,同时对pH、溶解氧、温度、盐度等环境理化因子进行连续监测.调查结果显示:栉孔扇贝在养殖初期幼贝阶段死亡率较低,随后死亡率逐渐升高,至8月24日月死亡率达最高点71%.9月份以后死亡率开始下降.至10月份累积死亡率达90%以上.对环境理化因子的调查显示,pH、溶解氧、盐度的变化幅度不大,与扇贝死亡率无明显相关性;温度变化与死亡率似有一定的相关性,即高温(月平均23℃以上)可能是养殖栉孔扇贝重要的环境胁迫因子.通过对可疑致病性生物因子的调查研究及病理学观察表明,栉孔扇贝在养殖过程中可感染多种微生物,其中原核微生物类立克次体(RLO)在养殖过程各生长阶段均可检出,其感染率和感染强度与扇贝死亡率呈现一致的趋势.在病原病理检测中,发现RLO的大量感染与组织细胞严重病理损伤密切相关.在病原生物检测过程中,除RLO以外还发现有类枝原体原核生物(MLO)和类病毒(VLP)寄生.RLO的人工感染实验结果说明RLO是栉孔扇贝重要的病原菌.结合感染率和死亡率、感染强度和组织病理学的相关性以及感染实验的结果分析,认为类立克次体(RLO)可能是栉孔扇贝养殖过程中大量死亡的主要致病因子.     

人工诱导栉孔扇贝雌核发育胚胎的SNP标记分析

利用紫外线照射灭活的同源精子,激活栉孔扇贝(Chlamys farreri)卵子分裂,获得雌核发育胚胎,流式细胞仪检测胚胎细胞平均单倍体率为82.5%。对获得的胚胎进行全基因组扩增,获得足量的基因分型模板,利用高分辨率溶解曲线(HRM)技术对其进行96个单核苷酸多态性(SNP)位点分型。结果显示,诱导雌核发育胚胎的位点检出率为96.27%,其中99.06%的位点分型结果与相应雌性亲本相符;单个胚胎中只表现一种等位形式的位点占91.67%~96.88%,平均为94.81%,较雌性亲本的纯合位点比例(64.25%)明显提高。本研究利用灭活同源精子诱导获得栉孔扇贝雌核发育胚胎,并利用单个胚胎的全基因组扩增产物进行基因位点分析,为扇贝人工诱导雌核发育个体的早期多基因位点检测和评价提供参考。     

栉孔扇贝升温育苗高产技术

在栉孔扇贝升温育苗中,主要改进了亲贝升温促熟培育、产卵与孵化、选幼、幼虫培育等主要技术措施,在105m~3水体中,培育出商品苗85,000,000多粒,取得了可喜的经济效益。     

免疫多糖对栉孔扇贝酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性的影响

在栉孔扇贝的血清、血细胞和肝脏提取液中均发现有酸性磷酸酶（ＡＣＰ）、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性,其中,ＡＣＰ和ＡＬＰ在肝脏中的活性最高。采用１．０％的虫草多糖或海藻多糖作为免疫药物,对栉孔扇贝进行注射刺激后,发现血清中的ＡＣＰ、ＡＬＰ和ＳＯＤ活性有显著提高,血细胞中的ＡＣＰ和ＳＯＤ活性也有所增加,而肝脏提取液的这三种酶活性的变化不很明显。研究认为这两种多糖具有增强栉孔扇贝免疫活性的作用,在水产养殖业中有一定的开发价值。     

扇贝多肽在体外对免疫细胞活性的影响及其抗紫外线的氧化损伤作用

采用噻唑盐（MTT）比色方法研究在紫外线辐射损伤条件下扇贝多肽对免疫细胞的保护作用，并探讨扇贝多肽对胸腺细胞和脾细胞活性的影响，结果表明，扇贝多肽具有抗紫外线氧化损伤的作用，可减轻或抑制紫外线对胸腺细胞和脾细胞的氧化损伤，并且呈剂量依赖性，扇贝多肽在0.5%-10.0%的浓度范围内，其抗氧化能力随浓度的增高而增强，在正常条件下可显著增强免疫细胞的活性，并且可拮抗雌激素对免疫细胞的抑制作用。提示扇贝多肽不仅具有抗氧化损伤作用，而且具有免疫增强使用。     

栉孔扇贝血细胞数量变化与生长的关系

于2009年3月至2010年1月期间,每月中旬分别从青岛和威海两地区采集人工养殖和野生的栉孔扇贝(Chla-mys farreri)。采集的扇贝经壳长测量后,于闭壳肌血窦中取血,离心,重悬,超声波破碎后制得血细胞破碎液。从抗栉孔扇贝血细胞的单克隆抗体库中筛选出1株与颗粒血细胞和透明血细胞均能结合,并能与血细胞多个蛋白结合的单克隆抗体作为酶联免疫吸附法(ELISA)中的第一抗体;第二抗体为碱性磷酸酶标记的羊抗鼠抗体。将血细胞破碎液包被于酶标板孔中,经一抗、二抗孵育后,显色读数,分析血细胞数量与生长的关系。结果表明:两地区人工养殖和野生扇贝的壳长均由3月的2 cm左右增长到了次年1月的7 cm以上,其中4～7月增长较快,而8～1月相对缓慢。两地区人工养殖和野生扇贝的血细胞数量于3～6月间均维持在较高的水平,6月达到最高峰,随后急剧下降,并于8或9月达到最低值,此后10～1月有所回升,但仍显著低于3～6月的水平。结论认为:栉孔扇贝血细胞数量与生长的关系在两地区、两扇贝品种间差别不大;但3～6月栉孔扇贝生长较快,血细胞数量相对高;而8～10月栉孔扇贝生长缓慢,其血细胞数量较低。     

栉孔扇贝(Chlamys farreri)自然群体遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD技术对栉孔扇贝(Chlamysfarreri)的四个自然群体(大连、烟台、青岛、韩国)的遗传多样性进行了分析。12个随机引物在四个群体中共检测到123个位点,其中多态位点109个,多态位点比例为88.62%;四个群体中均未检测到各群体特有的扩增带。韩国、烟台、大连、青岛四个群体的遗传多样性指数(Shannon指数)分别为0.2557、0.2557、0.2344和0.2249,以韩国和烟台群体遗传多样性较高,其次为大连群体,青岛群体最低,但它们之间无明显差异。不同群体的遗传多样性指数的平均数Hpop为0.2427,整个栉孔扇贝自然群体的遗传多样性指数Hsp为0.2503。遗传多样性剖分显示,绝大多数(97%)的遗传多样性是由群体内不同个体间的差异造成的,只有很小部分(3%)的遗传多样性与群体间的遗传分化有关。而采用基于单倍型(等位基因)之间的进化距离的AMOVA分析得到的这两个数据则分别为99%和1%,Φ值为0.010,且P=0.05,表明群体间遗传分化明显程度位于临界值。     

Immunotoxicity effect of benzo[α]pyrene on scallop Chlamys farreri

The toxic effects of benzo[α]pyrene (B[α]P) at different concentrations (0.1, 0.5, 1, 2.5 and 7.5 μgL⁻¹) on scallop (Chlamy farreri) immune system were studied. The results showed that B[α]P had significant toxic effects on the haemocyte counts, neutral red uptake, phagocytosis, bacteriolytic and antibacterial activity (P<0.05), while the seawater control and acetone control had no significant differences. The haemocyte counts, neutral red uptake, phagocytosis and bacteriolytic activity in all B[α]P treatment groups as well as antibacterial activity in groups of 0.5, 1, 2.5 and 7.5 μgL⁻¹ B[α]P decreased significantly (P<0.05). Some of these indices tended to be stable on the sixth day and others on the ninth day, and the indices showed clear time- and concentration-response to B[α]P. Bacteriolytic activity in 0.1μgL⁻¹ B[α]P treatment group and antibacterial activity in 0.1 μgL⁻¹ and 0.5 μgL- B[α]P treatment groups increased at the beginning of exposure and reached their peaks on day 1 and day 6, respectively. Following that, both activities decreased gradually and became stable after day 9. When all the indices reached stability, they were significantly lower than those in control group (P<0.05), except for antibacterial activity in 0.1 μgL⁻¹ B[α]P treatment group (P>0.05). Thus, B[α] has evident toxic effects on scallop immune system, which supports the view that a relationship exists between pollution and immunomodulation in aquatic organisms.