贻贝超氧化物歧化酶的分离纯化和部分性质

采用热变性－硫酸铵分级沉淀－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００和ＤＥ５２柱层析的方法从贻贝中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶,并对其部分性质进行分析鉴定。结果该酶的比活力为９４５３．３Ｕ／ｍｇ（ｐｒｏｔｅｉｎ）,提纯倍数为６０９．９,对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ敏感,Ｔ氏液和ＳＤＳ对酶活性没影响,对热较稳定。     

三丁基锡对牡蛎吞噬细胞和保护酶系统活力的影响

检测了受三丁基锡(tributyltin,TBT)污染的牡蛎的吞噬细胞活力、超氧化物歧化酶活性、过氧化氢酶活性、脂质过氧化作用等生理生化指标。实验结果表明,牡蛎血细胞的吞噬活力随着TBT浓度的增加而下降;对不同TBT浓度下牡蛎的超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性测定发现,在较低浓度下(TBT质量浓度<10μg/L),SOD和CAT的酶活力被抑制,随着TBT浓度的增大,SOD和CAT的比活力也随着增大,但当TBT达到较高浓度时,SOD和CAT的比活力开始下降,而过氧化脂质(LPO)却随着TBT的浓度的增加而增大。     

免疫多糖对栉孔扇贝酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性的影响

在栉孔扇贝的血清、血细胞和肝脏提取液中均发现有酸性磷酸酶（ＡＣＰ）、碱性磷酸酶（ＡＬＰ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性,其中,ＡＣＰ和ＡＬＰ在肝脏中的活性最高。采用１．０％的虫草多糖或海藻多糖作为免疫药物,对栉孔扇贝进行注射刺激后,发现血清中的ＡＣＰ、ＡＬＰ和ＳＯＤ活性有显著提高,血细胞中的ＡＣＰ和ＳＯＤ活性也有所增加,而肝脏提取液的这三种酶活性的变化不很明显。研究认为这两种多糖具有增强栉孔扇贝免疫活性的作用,在水产养殖业中有一定的开发价值。     

斑节对虾 弧菌病的病理学研究

对患有典型弧菌病症状的养殖斑节对虾进行了病理学研究，取病虾血淋巴制作血涂片，并取鳃、肝胰腺、肌肉等组织作组织病理和超微病理观察，同时取肌注感染后的患病对虾测定血淋巴中超氧化物歧化酶（SOD）的活力，结果显示，患病对虾的血细胞数目急剧减少，胞质浓染，透明细胞很难找到，血细胞形态多样，有的伸出伪足或形成异样突起，患病对虾锶、肝胰腺、心脏、肌肉以及胃肠等组织内均出现程度不同的炎症反应，以肝胰腺最为严重，组织中充满大量的浓染血细胞，细胞肿胀，细胞核核质边聚，线粒体肿胀，变性、严重时整个细胞呈溶解状态，此外，在鳃和肝胰腺组织中还发现溶酶体增多的现象，肌注感染2h后，感染对虾的SOD活力即开始显著下降，之后缓慢回升，至48h恢复大部分活力。     

近海温泉中嗜热菌Geobacillus sp. ZH1锰超氧化物歧化酶的克隆与表达

将嗜热菌Geobacillus sp. ZH1的超氧化物歧化酶(supseroxide dismutase,SOD)基因插入表达载体pET-32α(+),在Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达,并利用亲和层析纯化重组超氧化物歧化酶.将制备的脱辅SOD进行Mn2+和Fe2+金属重构后,得到的Mn2+重构SOD的比活力达668U/mg,Fe2+重构Fe-SOD没有活性,说明ZH1菌株的超氧化物歧化酶为Mn-SOD.凝胶过滤及SDS-PAGE分析显示,Mn2+重构SOD为同聚二聚体,亚基分子量为71.7 kDa.这些研究结果为进一步研究该酶的生化特性及酶的定向进化研究奠定了良好的基础.     

盐度对日本鳗鲡生长及非特异性免疫酶活性的影响

利用实验生态学和酶学方法,在浙江省海洋水产养殖研究所清江试验场研究了盐度对平均体长为25．1±5．6cm的日本鳗鲡（Anguillajaponica）生长及其血清溶茵酶（LZM）、超氧化物歧化酶（SOD）及碱性磷酸酶（AKP）活性的影响,实验持续60d．实验设置了5个盐度梯度（盐度5、10、15、20、25）和对照组（盐度0）,每梯度设3个平行组,各组盐度和pH值保持一致．日本鳗鲡血清中免疫酶活力指标：碱性磷酸酶、溶茵酶、超氧化物歧化酶在实验的第7天和第14天测定．实验结果表明,盐度5组相对增重率最高（279．78％±28．37％）,其次是盐度10组（278．74％±22．25％）,盐度15、20、25组相对增重率分别为234．39％±21．28％、230．28％±26．31％、228．01％±29．29％．对照组相对增重率为233．20％-4-25．18％,盐度5和10组与对照组差异显著（P〈0．05）,其余各组与对照组差异不显著．第7天和第14天,盐度10组碱性磷酸酶活性最高,分别为225．05U／dm。和251．11U／dm’,其次是盐度5组,分别为221．76U／dm。和236．01U／dm。,显著高于对照组（P〈0．05）．第7天和第14天盐度20、25组溶菌酶活性显著高于对照组（P〈0．01）．超氧化物歧化酶随着盐度的升高呈逐步上升趋势．第14天,盐度20、25纽溶菌酶活性仍保持较高水平,SOD回落至对照组水平,而各组AKP较第7天略有上升．     

悬浮物对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)幼鱼肝脏溶菌酶、超氧化物歧化酶和鳃丝Na+-K+-ATPase活力的影响

在实验室条件下构建不同的悬浮物浓度环境,采用试剂盒分析方法研究了不同浓度悬浮物对半滑舌鳎幼鱼肝脏溶菌酶（LSZ）、超氧化物歧化酶（SOD）和鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力的影响。养殖水体中悬浮物浓度添加量分别为0（对照）、50、100、200和400mg／L,每5天采样测定一次,实验周期为25天。结果表明,当悬浮物浓度添加量为50和100mg／L时,肝脏LSZ和SOD活力与对照组无显著差异（P〉0．05）,当添加量为200和400mg／L时,肝脏LSZ和SOD活力与对照组有显著差异（P〈0．05）;实验后期各实验组鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力与对照组均有显著差异（P〈0．05）。在悬浮物效应的25天内,各实验组肝脏LSZ活力呈峰值变化,10天时除100mg／L浓度添加组外均达到最大值;而肝脏SOD活力在50和100mg／L浓度添加组略有升高,在200和400mg／L浓度添加组则基本呈下降趋势;鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力前10天各实验组较对照组无显著变化,之后则显著降低,后期基本趋于稳定,其活力低于初始水平;实验结束时,各实验组其肝脏LSZ、SOD和鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力相对于对照组都受到了不同程度的抑制,其中各实验组鳃丝Na^＋-K^＋-ATPase活力抑制率分别达到了27．6％、65．2％、57．0％和71．1％。     

嗜热栖热菌重组锰超氧化物歧化酶的性质

嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)wl的超氧化物歧化酶基因在Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达,采用Ni-NTA agarose亲和层析获得重组超氧化物歧化酶,比活力达565 U/mg.重组酶的相对分子质量为110.9 kDa,亚基相对分子质量为28.3 kDa,该酶为同聚四聚体蛋白.重组酶对氯仿-乙醇和SDS敏感,对H2O2不敏感,并且它的紫外最大吸收波长位于279 nm,判断其属于锰超氧化物歧化酶类型.1.0 mmol/dm3Mn2+对重组酶有激活作用,同浓度的其他金属离子Mg2+、Ca2+、Ba2+、Co2+、Cu2+、Zn2+和Fe2+对重组酶活力都有抑制作用,其中以Co2+的作用最强,抑制了约64%的酶活性.重组酶在70℃下处理1 h,保持原有活力的60%,即使在90℃下处理1 h,仍保持原有活力的35%.在pH值为4.0～11.0的缓冲液中25℃下处理1 h,保持65%以上的原始活力.由此可见,重组锰超氧化物歧化酶具有高的热稳定性和宽pH稳定性,在工业上具有巨大的应用潜力.     

栉孔扇贝不同组织SOD、CAT和MPO活力的比较分析

对2龄和3龄栉孔扇贝外套膜、鳃、消化盲囊、肾、闭壳肌、性腺组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和髓过氧化物酶(MPO)活力分析表明,检测组织均存在这三种酶,且在不同组织中活力表现存在明显差别,其中肾组织SOD、CAT活力最高,而MPO在消化盲囊中表现最高活力,与其它组织相比均呈显著性差异(P＜0.05).不同贝龄的栉孔扇贝酶活力比较表明,三龄贝各组织SOD、CAT和MPO活力均高于二龄贝.     

L-精氨酸对凡纳滨对虾体液免疫因子的影响

用添加不同剂量L-精氨酸(L-arg)的饲料投喂凡纳滨对虾(Litopenaeus vannanei),测定其血淋巴液中一氧化氮(NO)含量以及一氧化氮合成酶(NOS)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)和超氧化物歧化酶(SOD)活力,并检测其对病原体的抗病力.结果显示:L-arg显著提高血淋巴液中NO含量,且变化趋势与NOS、AKP活性升高趋势相一致;中等剂量(质量分数为1%)L-arg显著提高血淋巴液中SOD和ACP活性,但高剂量(质量分数为1.5%)、低剂量(质量分数为0.5%)L-arg对血淋巴液中SOD(高剂量除外)和ACP活性影响不显著.副溶血弧菌人工感染后,中剂量L-arg组(1%)对虾死亡率最低,高剂量(1.5%)、低剂量组(0.5%)次之,对照组死亡率最高,各剂量L-arg组死亡率与对照组相比差异显著.表明饲料中添加适量L-精氨酸可使对虾体液免疫因子总体活力达到较高水平,L-精氨酸含量过高对对虾非特异免疫力的作用效果反而不佳.