6种鱼类肌肉组织肌苷酸的检测分析

采用高效液相色谱技术,在国内首次测定了条纹斑竹鲨(Chilocsyllium plagiosum)、大黄鱼(Pseudosci-aena crocea)、鳜(Siniperca chuatsi)、青石斑鱼(Epinephelus awoara)、牙鲆(Paralichthys olivaceus)和乌塘鳢(Bostrichthys sinensis)等6种鱼类新鲜和冻存肌肉组织中肌苷酸含量。结果表明:(1)不同鱼类肌肉组织中肌苷酸质量比不同,牙鲆新鲜肌肉组织中肌苷酸质量比最高,为4.214 mg/g,其余5种鱼类为2.365~3.634 mg/g。(2)10 d冻存试验中,经-70℃超低温冻存,6种鱼类冻存肌肉组织中肌苷酸质量比均高于新鲜肌肉组织,大黄鱼肌肉组织冻存1 d肌苷酸质量比达最大值,鳜肌肉组织冻存10 d肌苷酸质量比呈上升态势未出现最大值,其余5种鱼类肌肉组织肌苷酸质量比均在冻存第5天达到最大值。长时间的冻存将会降低食用鱼肉中肌苷酸质量比,导致鲜味下降,但经1周左右短时间的冻存后可明显提高鱼肉中肌苷酸质量比,增加鲜味,提高食用价值。     

大黄鱼肌肉组织cDNA全长文库的构建及EST分析

以大黄鱼肌肉组织为材料,利用Creator Smart cDNA Library Construction Kit构建了大黄鱼肌肉组织的全长cDNA文库.文库质量分析表明：cDNA文库容量不低于1.68×106cfu/mm3,重组率达96%,插入片断的平均长度大于1 000bp.随机挑取512个cDNA克隆进行5’端测序,其中430条ESTs的长度大于100bp;并初步拼接得到了230个单基因簇（unigene）,其中包括58个重叠群（contigs）,172个单拷贝ESTs（singletons）,冗余度为46.51%.经检索,35个ESTs在BLASTx上无明显的同源性（E值≤1.00×10-10）,为新基因.195个ESTs与已报道的基因有较高的同源性;其中与能量相关基因的ESTs丰度最高,占总数的20.00%.蛋白质合成、细胞骨架和信号传导次之,比例分别为13.48%、12.17%、10.00%,其中包括高迁移率族蛋白B1、瘦素受体、β1-热激蛋白等.这些EST数据为进一步筛选和克隆大黄鱼肌肉特异性表达基因提供了平台.     

不同虾种间肌肉组织蛋白质的比较

采用薄层等电聚焦凝胶电泳方法对罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii)、绿须虾（Aristeus virilis)、长毛对虾（Penaeus penicillatus)、日本对（P.japonicus)、斑节对虾（P.monodon)和周氏新对虾（Metapenaeus joyneri）的肌肉组织蛋白质进行分离，检测各蛋白质组份及其等电点。根据蛋白质区带的共享度计算共相互间的遗传距离指数，然后用聚类方法处理数据，构建系统树，分析其间的差异程度，最后确定6种虾的亲缘关系。结果表明，每种虾可获得6－11条 蛋白质区带，等电点范围在4－6．95之间。虾类肌肉组织蛋白质组份及其电泳行为，可为虾类在分类学上的定位提供生化依据。     

曼氏无针乌贼肌肉cDNA文库的构建和表达序列标签分析

以曼氏无针乌贼（Sepiellamaindroni）肌肉组织为研究材料,利用Clontech公司的cDNA文库构建试剂盒构建了曼氏无针乌贼肌肉cDNA文库．对文库质量的分析结果表明：cDNA文库的库容量约为1．2×10。克隆（cfu／dm^3）,重组率达96％,插入片段平均长度大于l000bp．挑取568个阳性克隆进行5’末端测序,其中475条ESTs长度大于100bp,初步拼接后得到200个单基因簇,包括41个重叠群和159个单拷贝EST,冗余度为57．89％．经检索,53条ESTs（占比为26．5％）在BLASTx上无明显的同源性（E值≥1．00×10^-10）,为新基因．147条ESTs（占比为73．5％）与已报道的基因有较高的同源性;其中与能量相关基因的ESTs丰度最高,占总数的23．0％．细胞信号传导、细胞骨架和蛋白质代谢的次之,比例分别为17．5％、12．5％、9．5％,其中包括热激蛋白70、转铁蛋白等．这些EST数据有助于进一步筛选和克隆曼氏无针乌贼和其他头足动物的肌肉特异性表达基因．     

孔雀石绿在青石斑鱼肌肉组织中的残留与消除规律

为了解运输和疾病防治过程非法使用孔雀石绿后,青石斑鱼(Epinephelus awoara)对孔雀石绿的蓄积及消除规律,以指导对孔雀石绿的禁用监管,采用3种浓度的孔雀石绿分别连续药浴5 h,以及分3次间断药浴15 min,再转移至水泥池中用海水养殖,采用液相色谱—串联质谱法(LC/MS/MS)测定青石斑鱼肌肉组织中孔雀石绿的残留。结果表明:模拟运输过程用药后,残留量依次为247、102、113 g/kg,模拟疾病防治用药后,最大残留量依次为14.3、10.2、8.62 g/kg;两种用药方式下,用药浓度为0.15 mg/L时,其残留峰值均出现在清水养殖一个月后;模拟运输过程用药后,青石斑鱼肌肉组织孔雀石绿需245 d方可降至检测限以下,模拟疾病防治需122 d。种苗阶段的非法用药也可能成为水产品孔雀石绿残留的来源。     

海南岛3种石磺肌肉组织营养成分分析

参照国家食品营养成分分析相关标准,结合液相色谱仪,元素分析仪,电感耦合等离子光谱仪等测定海南岛采集的瘤背石磺(Onchidium struma),紫色疣石磺(Peronia verruculata),平疣桑葚石磺(Platevindex mortoni)3种石磺肌肉组织中营养成分。结果表明:海南岛3种石磺均属于高蛋白质低脂肪的海产品,蛋白质含量达65.0%以上,其中以平疣桑葚石磺蛋白质含量最高;瘤背石磺肌肉组织多糖含量高达30.96%±1.48%,显著高于其他2种石磺;3种石磺肌肉组织中氨基酸组成全面,且以呈味氨基酸含量最高,均达5.60%以上;3种石磺肌肉组织均含有丰富的矿质元素,其中以钙和镁元素含量最高,含量达20~30 g/kg,同时钠和钾元素含量达3.0~6.5 g/kg。海南岛3种石磺均具有丰富的营养价值,其中以高蛋白高多糖低脂肪的瘤背石磺最具有开发前景。     

一会儿笑，一会儿哭，有助于长寿吗？

我们每个人都能笑，也会哭，毫无医学上的禁忌。而且，与一些怀疑主义的意见相反，它们可以称为感情药物，能治愈不少疾患。     

刺参肌肉组织cDNA文库的构建

用RNA提取试剂--TRIZOL Reagent提取刺参(Apostichopus japonicus)肌肉组织总RNA,用SMART cDNA Library Construction Kit构建cDNA文库.经测定原始文库滴度达到 3.2×10~6,扩增后文库滴度达到 5.1×10~9,重组率达到96.7%,从扩增文库随机挑取12 个克隆进行PCR 扩增鉴定,结果显示,插入片段大小为0.5～2.5 kb.通过各项指标验证成功构建了刺参肌肉组织cDNA 文库.     

泥蚶肌肉组织蛋白质双向电泳体系的建立

本研究建立了泥蚶肌肉组织蛋白质的双向电泳体系.提取泥蚶肌肉组织全蛋白,进行了双向电泳分离的初步尝试,并对各个关键因素和环节进行了优化比较.优化的裂解液配方是8mol/dm3 Urea,1.5mol/dm3 Thioruea,4% CHAPS,10mmol/dm3 Tris,2mmol/dm3 TBP,0.2%Bio-Lyte3/10ampholyte,1mmol/dm3 PMSF以及1mmol/dm3 EDTA.使用pH值为4～7的IPG胶条进行被动水化上样,等电聚焦采用缓慢升压模式,电泳参数设置和染色方法等根据Bio-rad公司推荐的进行调整.最终获得了较满意的双向电泳图谱,具有较高的分辨率和重复性,成功建立了泥蚶肌肉组织蛋白质双向电泳分离体系.