用改进的超声波-溶菌酶法制备钝顶螺旋藻原生质球

用改进的超声波-溶菌酶法制备钝顶螺旋藻原生质球。钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)经超声波破碎后,用1.5 mol/L NaCl的Zarrouk培养基洗去细胞外壁的胶质鞘,然后进行酶解。酶解条件为:pH7.2的0.2 mol/L磷酸钾缓冲液,0.8 mol/L KCl,0.5%溶菌酶,28~30℃水浴震荡酶解5~7 h,获得40%以上有活力的钝顶螺旋藻原生质球。     

转“全鱼”溶菌酶基因大菱鲆的研究

用大西洋条鳕(Macrozoarces americanus)抗冻蛋白启动子opAFP promoter和牙鲆(Paralichthys olivaceus)c型溶菌酶基因构建“全鱼”溶菌酶基因元件opAFP—ly，首次应用电脉冲精子介导法将该基因片段导入到大菱鲆(Scophthalmus maximus)受精卵内，获得原代转基因大菱鲆。先后采用单因子方法和正交实验方法，重复实验确定了最适导入条件：脉冲电压为400V／cm，脉冲次数为5，脉冲宽度为25ms，外源DNA浓度为50mg/L。利用最适导入条件，实现基因元件大规模转移。采用PCR技术对1月龄的原代转基因大菱鲆仔鱼的染色体DNA进行分析，结果表明外源基因的整合率可达28％。     

Antiangiogenic activity of low-temperature lysozyme from a marine bacterium <Emphasis Type="Italic">in vivo</Emphasis> and <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

We extracted marine low-temperature lysozyme (MLTL), a novel lysozyme, from a marine microorganism through fermentation. Our previous study suggested that a low molecular weight (16 kDa) may exert anti-tumor activity through antiangiogenesis. In this study, we extracted a high weight (39 kDa) and investigated its antiangiogenic activity in vivo and in vitro. Using zebrafish embryos as an in vivo study model, we found that treatment with MLTL significantly inhibited the growth of subintestinal vessels (SIVs) in a dose-dependent manner and that 400 μg/ml MLTL was sufficient to block the growth of SIVs. An in vitro study conducted using human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) revealed that MLTL suppressed the proliferation, migration and tube formation of HUVECs in a dose-dependent manner. Interestingly, assays by flow cytometry and DNA electrophoresis indicated that MLTL was able to induce apoptosis of HUVECs. Moreover, further study demonstrated that the disruption of intracellular Ca²⁺ homeostasis may play an important role in MLTL induced apoptosis of HUVECs. Taken together, the results of this study demonstrate for the first time that MLTL inhibits angiogenesis through its pleiotropic effects on vascular endothelial cells and induces apoptosis through regulation of cellular Ca²⁺ levels. The results of this study also revealed a possible mechanism underlying the antiangiogenic effect of MLTL and suggested that MLTL may be a promising new antiangiogenic agent for use in cancer therapy.     

青蛤(Cyclina sinensis)溶菌酶基因在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激下的表达

利用构建的SMART cDNA文库和高通量测序方法,得到了青蛤溶菌酶相关基因的全长,采用荧光定量RT-PCR方法分析了c型溶菌酶基因在鳗弧菌刺激下的表达变化。结果表明,青蛤有c型溶菌酶和i型溶菌酶基因,分别编码155和182个氨基酸,c型溶菌酶信号肽为21个氨基酸并具有典型的LYZ1结构域,i型溶菌酶信号肽为19个氨基酸,其结构域为Destabilase domain结构,用于识别和切断谷氨酰胺-甲酰胺与赖氨酸ε-氨基之间的肽键。荧光定量PCR结果显示,在鳗弧菌刺激后6—24h,青蛤血细胞中c型溶菌酶的表达量出现明显上调的趋势,与对照组有显著性差异(P0.05),说明c型溶菌酶基因在青蛤的免疫应答中起重要的作用。     

低盐胁迫对大黄鱼非特异性免疫酶活力的影响

以大黄鱼（Larimichthys crocea）为研究对象,研究急性、慢性低盐度胁迫对大黄鱼存活状况及非特异性免疫酶活力的影响。结果表明：急性低盐（15、8）胁迫下,在7 d的实验周期中,大黄鱼肝脏的超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活力呈先上升后下降的趋势,在第1天显著上升（p<0.05）后逐渐下降至显著低于对照组水平;肝脏的过氧化氢酶（catalase, CAT）活力整体呈先下降后上升再下降的趋势,在第1天显著下降后开始升高,第3天后开始下降,至第7天时CAT活力仍显著低于对照组水平;血清中的酸性磷酸酶（acid phosphatase, ACP）活力呈下降后逐渐升高的趋势,在第1 天时显著下降后逐步升高,至第7天时仍显著低于对照组;而血清中的碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）活力在实验开始的第1天到第3天逐渐升高,且均显著高于对照组,至第7天时开始下降至对照组水平;血清中的溶菌酶（lysozyme, LZM）含量呈波动变化,整体呈先上升后下降趋势。慢性低盐（8）养殖14 d后,大黄鱼的各项非特异性免疫酶活力均与对照组无显著性差异（p>0.05）。此外,实验周期内所有组别大黄鱼均未出现死亡,仅急性低盐胁迫组大黄鱼的活动和摄食受到有限影响。大黄鱼对慢性降盐度养殖有较高的耐受能力,而盐度骤降会显著影响大黄鱼的非特异性免疫,实际生产中应避免养殖环境盐度的剧烈变化。     

动物型溶菌酶研究新进展

溶菌酶可以分解连接N-乙酰胞壁酸(NAM)和N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)残基之间的β-1,4糖苷键。g型、c型和i型溶菌酶是3种动物型溶菌酶。近年来,越来越多的报道表明这3种类型的溶菌酶在动物界广泛存在,g型和c型溶菌酶主要存在于脊椎动物中,i型溶菌酶仅存在于无脊椎动物中,部分物种中同时存在2种动物型溶菌酶。本文简要概述了溶菌酶在动物各物种中的存在情况和组织分布情况、基因组结构与系统进化以及溶菌酶抑制剂的研究新进展。     

甲壳动物中的酚氧化酶原激活系统研究评价

依据８０－９０年代国际关于甲壳动物免疫机制的资料,对甲壳动物中的酚氧化酶原激活系统的研究进展予以综合评价,目的在于为中国科技工作者防治虾蟹类疾病提供参考。现有的研究表明,甲壳动物中的酚氧化酶原激活系统可被微生物多糖激尖,在激活过程中产生一系列活性物质,通过多种形式参与宿主防御反应。在甲壳动物中,与ｐｒｏＰＯ系统有关的因子正在被逐步纯化出来;ｐｒｏＰＯ可由内源蛋白酶转化成活性形式,存在调节因子调节ｐ     

Polar organic micropollutants in the coastal environment of different marine systems

Polar anthropogenic organic micropollutants are frequently detected in freshwater and discharged on large scale into marine systems. In this work the results of 153 samples collected from the shorelines of the Baltic Sea (Germany), Northern Adriatic Sea (Italy), Aegean Sea and Dardanelles (Greece & Turkey), San Francisco Bay (USA), Pacific Ocean (USA), Mediterranean Sea (Israel), and Balearic Sea (Spain) are presented. The samples were analyzed for various classes of micropollutants such as pharmaceuticals, corrosion inhibitors, biocides, and stimulants. Caffeine, paraxanthine, theobromine, tolyltriazole, 1H-benzotriazole, and atrazine were detected in >50% of all samples. The detection frequencies of carbamazepine, iopamidol, diuron, sulfamethoxazole, paracetamol, theophylline, and atenolol were between 20% and 32%. As caffeine is linked to untreated wastewater, the widespread occurrence of raw sewage in marine environments and thus potentially elevated nutrient concentrations and risk for the presence of wastewater-related pathogens is remarkable.     

盐度对日本鳗鲡生长及非特异性免疫酶活性的影响

利用实验生态学和酶学方法,在浙江省海洋水产养殖研究所清江试验场研究了盐度对平均体长为25．1±5．6cm的日本鳗鲡（Anguillajaponica）生长及其血清溶茵酶（LZM）、超氧化物歧化酶（SOD）及碱性磷酸酶（AKP）活性的影响,实验持续60d．实验设置了5个盐度梯度（盐度5、10、15、20、25）和对照组（盐度0）,每梯度设3个平行组,各组盐度和pH值保持一致．日本鳗鲡血清中免疫酶活力指标：碱性磷酸酶、溶茵酶、超氧化物歧化酶在实验的第7天和第14天测定．实验结果表明,盐度5组相对增重率最高（279．78％±28．37％）,其次是盐度10组（278．74％±22．25％）,盐度15、20、25组相对增重率分别为234．39％±21．28％、230．28％±26．31％、228．01％±29．29％．对照组相对增重率为233．20％-4-25．18％,盐度5和10组与对照组差异显著（P〈0．05）,其余各组与对照组差异不显著．第7天和第14天,盐度10组碱性磷酸酶活性最高,分别为225．05U／dm。和251．11U／dm’,其次是盐度5组,分别为221．76U／dm。和236．01U／dm。,显著高于对照组（P〈0．05）．第7天和第14天盐度20、25组溶菌酶活性显著高于对照组（P〈0．01）．超氧化物歧化酶随着盐度的升高呈逐步上升趋势．第14天,盐度20、25纽溶菌酶活性仍保持较高水平,SOD回落至对照组水平,而各组AKP较第7天略有上升．     

不同温度下长茎葡萄蕨藻无机碳利用

【目的】阐明长茎葡萄蕨藻对无机碳的利用方式。【方法】运用pH漂移技术,探索藻体质量、藻体部位、照度和海水体积对长茎葡萄蕨藻(Caulerpa lentillifera)的pH补偿点的影响,并研究在3种不同温度(20、25、30℃)下,乙酰唑胺(AZ)、乙氧苯丙噻唑磺胺(EZ)、4,4′-二异硫氰基芪2,2′-二磺酸(DIDS)、钒酸盐(Van)4种抑制剂对长茎葡萄蕨藻无机碳的利用影响。【结果】藻体质量、藻体部位、照度和海水体积对长茎葡萄蕨藻的pH补偿点均无显著性影响(P>0.05),在一定范围内藻体质量或照度越大,达到pH补偿点时间越短,且pH补偿点均大于9。20℃下各抑制剂的抑制作用最大,其次为30℃,25℃最小,但3种温度下各抑制剂的抑制率无显著差别(P> 0.05)。4种抑制剂中DIDS对长茎葡萄蕨藻pH补偿点和无机碳利用均无显著影响(P> 0.05),剩余3种抑制剂的抑制作用依次为EZ>AZ>Van。【结论】藻体质量、藻体部位、照度和海水体积对长茎葡萄蕨藻pH补偿点无影响。温度对长茎葡萄蕨藻吸收利用无机碳没有明显影响。长茎葡萄蕨藻能利用HCO_3^-作为无机碳源进行光合作用。