Peptidomic analysis of Chinese shrimp (Fenneropenaeus chinensis) hemolymph by magnetic bead-based MALDI-TOF MS

Peptides in shrimp hemolymph play an important role in the innate immune response.Analysis of hemolymph will help to detect and identify potential novel biomarkers of microbial infection.We used magnetic bead-based purification(ClinProt system) and matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry(MALDI-TOF MS) to characterize shrimp hemolymph peptides.Shrimp serum and plasma were used as the source of samples for comparative analysis,and it was found that serum was more suitable for shrimp hemolymph peptidomic analysis.To screen potential specific biomarkers in serum of immune-challenged shrimps,we applied magnetic bead-based MALDI-TOF MS to serum samples from 10 immune-challenged and 10 healthy shrimps.The spectra were analyzed using FlexAnalysis 3.0 and ClinProTools 2.1 software.Thirteen peptide peaks significantly different between the two groups were selected as candidate biomarkers of lipopolysaccharide(LPS)-infection.The diagnostic model established by genetic algorithm using five of these peaks was able to discriminate LPS-challenged shrimps from healthy control shrimps with a sensitivity of 90% and a specificity of 100%.Our approach in MALDITOF MS-based peptidomics is a powerful tool for screening bioactive peptides or biomarkers derived from hemolymph,and will help to enable a better understanding of the innate immune response of shrimps.     

锯缘青蟹Scylla serrata黄水病血液病理学分析

对惠"黄水病"锯缘青蟹(Scylla serrata)血液生理生化指标测定,结果表明:与健康蟹相比,病蟹的蛋白质和脂质代谢存在显著差异,尿素氮(BUN)和肌酐(GREA)含量极显著高于健康蟹,而甘油三酯(TG)和总胆固醇(CHO)极显著低于健康蟹.病蟹血清蛋白质含量和谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷酰转肽...     

凡纳滨对虾血淋巴、类淋巴细胞培养

以 ×L-15 培养基为基础,添加不同比例的胎牛血清和对虾肌肉提取液配制成不同的培养液,当 22×L-15培养基、胎牛血清和对虾肌肉提取液的比例分别为 60 %、20 %、20 %时,培养效果较好。培养液 pH 维持在7.0 ~ 7.2时血淋巴和类淋巴细胞生长最好,且类淋巴细胞迁出迅速。绝大部分血淋巴细胞贴壁迅速并伸展成多角样或披针形,一般存活 7 ~ 9 d,少部分呈悬浮状态的血淋巴细胞存活达 60 d 以上。培养中如未及时去除对虾血清,血淋巴细胞迅速衰老并死亡。类淋巴组织细胞 6 d可形成单层,迁出细胞主要有两种形态: 多角样和成纤维样,细胞可存活 16 d以上。     

应用蛋白质组学技术对寄生压力下缢蛏血淋巴的抗性研究

以闽、浙一带重要的海产养殖贝类缢蛏(Sinonovacula constricta Lamarck)为研究对象，应用蛋白质组学方法探求其在受寄生压力下血淋巴内40KDa以下小分子蛋白质组的变化，寻找缢蛏血淋巴的抗性机制，明确血淋巴在机体防御体系中的作用。在寄生压力下，缢蛏血淋巴内有多种蛋白发生变化，包括生长调节蛋白，金属硫蛋白-B．唾液酸结合凝集素，凝血因子IXA轻链等，涉及多种与炎症反应，神经营养，基因表达调控．蛋白质合成等有关的功能。说明血淋巴在缢蛏的防御体系中具有关键性作用。     

实验感染白斑杆状病毒(WSBV)的斑节对虾血液病理学研究

用光镜观察经人工感染白斑杆状病毒 (White Spot Baculovirus,WSBV) 后患典型白斑病的斑节对虾 Penaeus monodon 的血淋巴涂片,研究了WSBV导致的淋巴细胞数量及结构异常;通过检测感染WSBV后患病虾与健康虾的血清主要生化指标,首次揭示了两者的主要差异及WSBV在宿主体内增殖的时间过程.结果表明:患病虾淋巴细胞明显减少,无颗粒细胞难以找到,颗粒细胞和小颗粒细胞分别为健康虾的11.7%和4%;颗粒细胞内出现深染区、空白区或异样突起.血涂片上偶尔发现有大型固定性吞噬细胞.在患病虾血清主要生化指标中,Ca2+含量比健康虾显著升高,患病虾为15.93mmol·L-1,健康虾为10.71mmol·L-1;相反,患病虾血清中总蛋白(Tp)、总磷(PB)及乳酸脱氢酶(LDH)均比健康虾个体低,3者含量依次为:52.07g·L-1,0.34mmol·L-1和35.27IU·L-1,在健康虾个体血清中为:66.29g·L-1,0.66mmol·L-1及82.36IU·L-1;而K+,Mg2+含量无显著差异.血清中Ca2+,PB及TP的含量可以作为斑节对虾感染WSBV后出现白斑病的血清生化特征.斑节对虾感染WSBV后不同时间内血清主要生化指标显示其增殖的时间顺序可能为:24h内主要进行核酸复制,24-48h主要进行囊膜蛋白质的合成,病毒从入侵宿主细胞到从细胞内释放的过程约需48h.     

温度周期性波动对凡纳滨对虾稚虾蜕壳和蜕壳激素含量的影响

采用实验生态学方法,以温度25℃为对照,研究了四种温度波动幅度(25±1、25±2、25±3、25±4℃)对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)稚虾蜕壳率争蜕壳激素滴度的影响.主要实验结果如下:(1)25±3℃和25±4℃组对虾的蜕壳率显著高于其他各处理组(P＜0.05).(2)5种温度处理下,对虾血...     

Agglutinin activity in hemolymph of Chinese shrimp and induction effect of Vibrio

ＡｇｇｌｕｔｉｎｉｎａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｈｅｍｏｌｙｍｐｈｏｆＣｈｉｎｅｓｅｓｈｒｉｍｐａｎｄｉｎｄｕｃｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｆＶｉｂｒｉｏＬｕｏＲｉｘｉａｎｇ（ＲｅｃｅｉｖｅｄＭａｙ３０,１９９７;ａｃｃｅｐｔｅｄＪｕｌｙ２０,１９９７）Ａｂｓｔｒ...     

双壳贝类血淋巴中儿茶酚胺的检测方法初步研究

研究的目的是探索一种检测双壳贝类血淋巴中儿茶酚胺含量的方法。以栉孔扇贝(Chlamysfarreri)和长牡蛎(Crassostreagigas)为实验对象,研究了取样、抗氧化剂、氧化铝用量以及Tris缓冲液用量等对实验结果的影响。结果表明,高效液相色谱电化学检测器法(HPLC-ECD)可以灵敏高效地对双壳贝类血淋巴中儿茶酚胺进行定性、定量检测。实验表明,取样时间最长不超过1.5min;还原性谷胱甘肽作抗氧化剂效果较好;前处理各试剂与血样量的最适配比为血样量1.5mL,Tris缓冲液(1.5mol/L,pH8.6)1mL和氧化铝25mg;水洗后离心并尽可能吸干氧化铝中的水分。去甲肾上腺素、肾上腺素和多巴胺的回收率分别为53%~69%、47%~73%和48%~56%。     

脂多糖和弧菌对中国对虾血清磷酸酶、超氧化物歧化酶和血蓝蛋白的影响

于2003年7～11月实验研究了中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)在注射脂多糖(LPS)和弧菌刺激后一定时间内血清磷酸酶、超氧化物歧化酶和血蓝蛋白的变化情况。在实验期内,注射弧菌后,中国对虾体内酸性磷酸酶(ACP)的活性显著上升。LPS和弧菌对超氧化物歧化酶的活性有一定的刺激作用。血蓝蛋白的含量,在注射弧菌后有一定程度的上升。碱性磷酸酶在中国对虾血清中活性较低。     

杂色鲍血淋巴双向电泳与质谱分析

以杂色鲍(Haliotisdiversicolor)血淋巴为材料进行了双向电泳研究。首先,确定了以丙酮沉淀法和RC DC 蛋白定量试剂盒为基础的蛋白制备与定量方法;其次,对样品前处理方法进行了摸索,通过500 r/min的低速离心方法分离了血细胞和血浆组分,通过35000 r/min超速离心2 h除掉了部分高丰度的血蓝蛋白,降低了高分子量区域的血蓝蛋白背景;进一步使用18 cm pH 3-10非线性胶条和标准化的电泳程序,对不同上样量的电泳银染结果进行了比较,获得了良好的双向电泳图谱;最终选取肌动蛋白、原肌球蛋白、胶原蛋白和血蓝蛋白4个蛋白点成功进行了质谱鉴定。