平鲷♀与真鲷♂的杂交研究

研究了不同盐度，温度，ｐＨ对平鲷Ｒｈａｂｄｏｓａｒｇｕｓ ｓａｒｂａ♀和真鲷Ｐａｇｒｏｓｏｍｕｓ ｍａｊｏｒ♂清子活力的影响，确立了人工授精与孵化的条件参数。平鲷♀与真鲷♂杂交的受精率达９５％以上，胚胎发育与其亲本的相似。经过超低温保存的真鲷精子的激活率，活力与鲜精的接近，其杂产的受精率也可达９５％以上。实验获得了杂产仔鱼，但杂交的孵化率比对照组低。     

用包埋脱水法冰冻保存海洋饵料金藻

用包埋脱水法冰冻保存绿色巴夫藻(Pavlova uiridis)、湛江等鞭金藻(Isochrysis zhanjiangensis)和球等鞭金藻(Isochrysis galbana 3011)等三种海洋饵料金藻，探讨了脱水速率、胶球含水量以及化冻后恢复方法对冰冻保存存活率的影响。结果表明，三种藻都在-0．9％含水量／h的平均脱水速率下获得最高存活率：各种藻在冰冻前的胶球最佳含水量不同，绿色巴夫藻为35％，湛江等鞭金藻和球等鞭金藻都为30％。化冻后，含绿色巴夫藻的胶球在培养基中22℃暗放置48h存活率最高；另两种藻在相对湿度为75％的气相中22℃暗放置12h存活率最高。在本实验条件下，绿色巴夫藻、湛江等鞭金藻和球等鞭金藻的冰冻保存的存活率可分别达到74％、15％和17％。     

黑鲷精子的超低温保存研究

对黑鲷精子的超低温保存技术进行了初步探讨，黑鲷（Sparus macrocephalus)精子经过超低温保存后复苏率，存活率最高可以达到61．37％和61．4％，保存黑鲷精子时发生冷冻伤害的温度范围是－21－－60℃，适宜的降温速率为20度／min；使用抗冻剂DMSO的适宜浓度为20％，样品体积对保存效果有相关性；利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH值的溶液；使用20％DMSO和20℃/min降温速率处理，在液氮中保存黑鲷精子66d后解冻，其复苏率和存活率分别为59．81％和58．45％。     

用包埋脱水法冰冻保存牟氏角刺藻

采用包埋脱水法研究了牟氏角刺藻(Chaetaceros muelleri)的超低温保存，探讨了影响存活率的内、外因素：藻细胞年龄、蔗糖浓度、脱水速率、胶球含水量等。结果 表明，将处于静止初期的藻细胞包埋在含有0．5mol／L蔗糖的3％褐藻酸钙胶球中，以平均速率0．9％含水量／h脱水至胶球含水量为40％的条件下冰冻存活率较高，可达到30％左右。与常规的两步法冰冻保存相比。包埋脱水法可大大简化操作程序，是保存牟氏角刺藻的一种有潜力的方法。     

大黄鱼(Pseudosciaena crocea)精子冷冻前后的活力及超微结构变化

采用两步降温法超低温冷冻保存大黄鱼精子,并用透射电镜技术研究了精子的超微结构损伤.结果表明,大黄鱼冻精的激活率、运动时间及寿命与鲜精相比无显著差异.鲜精中28.5％的精子形态结构异常,冻精中37％的精子形态结构异常.形态结构正常的精子表现为质膜与核膜结构完整、无膨胀现象,袖套、轴丝及中心粒结构正常,线粒体形态完整、嵴较发达;形态结构异常的精子表现为质膜破裂、脱落,质膜膨胀,核膜破裂、脱落,核局部受损伤,线粒体膨胀、嵴退化或消失,线粒体移位或脱落.结果显示,以Cortland溶液为稀释液,10％ DMSO为抗冻剂,对大黄鱼精子具有较好的抗冻保护作用.     

单细胞凝胶电泳用于检测低温保存的真鲷(Pagrosomus major)精子DNA损伤

应用单细胞凝胶电泳(SCGE)方法,对超低温冷冻保存的真鲷精子DNA的损伤状况进行了检测研究。针对研究对象,在实验过程中对传统的碱性单细胞凝胶电泳在铺胶方法、电泳条件等进行了改进。对精子细胞进行预处理,在碱性电泳液中使核DNA双链解链变性后电泳,EB染色10min后,在荧光显微镜下观察,每次随机观察50个左右的核DNA。结果表明,对荧光显微镜下观察到的精子核按彗尾长度及荧光强度划分等级,出现损伤的精子核DNA的损伤程度主要为轻度损伤和中度损伤,很少见有完全损伤的真鲷精子核。对比真鲷冷冻精液与新鲜精液的精子DNA的损伤状况,表明仅用30%DMSO冷冻精子DNA损伤状况与鲜精差异显著(P>95%),其他冷冻方法保存的精子与鲜精差异不显著(P>95%)。     

栉孔扇贝胚胎超低温液氮保存

选用两种低温保护剂配方，Ａ：１０％甘油＋４％葡萄糖；Ｂ：１５％ＤＭＳＯ（二甲基亚铜）＋４％葡萄糖＋２％柠檬酸盐，利用微机控制生物降温仪，对栉孔扇贝胚胎进行液氮低温保存。似１℃／ｍｉｎ由室温降温至－２０℃，接着以２０℃／ｍｉｎ降温至－８０℃，然后样品直接入液氮保存（－１９６℃），１周后，经４５℃水浴解冻，栉孔扇贝胚胎（发育６ｄ）的存活率达６５．１％（Ａ配方）和５６．５％（Ｂ配方）；而采用６℃／ｍｉｎ     

真鲷精子的超低温保存研究

对真鲷精子超低温保存技术进行了初步探讨，在液氮中保存真鲷（Pagrosomus major)精子时发生冷冻伤害的温域为－30－60℃，适宜的降温速率为20℃／min；使用抗冻剂DMSO的适宜浓度为20％；采用低盐度或高pH值的溶液激活冻精的效果不如自然海水。真鲷冻精的复苏率和存活率最高可达到50．73％和62．5％；以20℃/min和20％DMSO处理真鲷精子，保存在液氮中46d徨冻精复苏率和存活率为50．63％和61．02％。     

中国对虾精子超低温保存的研究

于1991年11月-1993年5月对中国对虾纳精囊中精子进行超低温保存研究。结果表明，以自然海水或人工海水作基础液添加10％DMSO（V／V）及5％－10％的甘油配制成抗冻稀释液，稀释中国对虾精子进行超低温保存最有效，存活率在60％以上；保存94-138d，解冻后作人工授精，受精率最高达59％；稀释液中Mg2+，K+，Ca2+为超低温保存所必需，但Ca2+浓度过高则不利于精子的保存。光镜及电镜观察表明。冷冻对中国对虾精子的损伤主要表现为“棘突”的折断，严重时须体脱落仅剩精核；冻伤的精子不发生正常项体反应，不形成项体丝。