三疣梭子蟹几丁质酶基因(PtCht6)的克隆及其在免疫中的功能分析

几丁质酶(chitinase)在甲壳动物的蜕皮、消化和免疫等很多生物学过程中发挥重要功能,为深入探讨几丁质酶的免疫防御机制,本实验利用RACE技术克隆了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)PtCht6基因。该基因cDNA全长2736bp,开放阅读框(ORF)2103bp,编码700个氨基酸,具有几丁质酶GH18家族典型特征。利用实时荧光定量技术分析PtCht6在三疣梭子蟹不同组织、不同蜕皮阶段、不同病原感染以及低盐胁迫(11)下的表达特征,结果显示:PtCht6在各组织中均有表达且在肝胰腺中的表达量最高;在不同蜕皮时期的肝胰腺中,其表达量由蜕皮后期(A/B)、蜕皮间期(C)、蜕皮前期(D)依次递减(P0.05);人工感染WSSV和副溶血弧菌后.PtCht6的表达量在肝胰腺中分别于12h、72h达到最大值,在血细胞中均于12h达到最大值,且相较于对照组,整体显著上调表达(P0.05);低盐胁迫能够显著抑制该基因的表达,最高抑制73倍(P0.05)。同时发现,低盐环境下感染WSSV后,该基因达到峰值的时间明显延迟(至少延迟12h.P0.05)。该研究结果预示PtCht6作为免疫因子参与三疣梭子蟹的病原防御,且低盐胁迫在一定程度上抑制了该基因的免疫功能。     

热液区管状蠕虫几丁质结合蛋白的克隆表达及功能鉴定

本文应用PCR技术对四种管状蠕虫几丁质结合蛋白进行了扩增,进而连接到pIZ-FLAG构建了重组表达载体,并在昆虫细胞中实现了几丁质结合蛋白的异源重组表达.我们对几丁质结合蛋白的功能进行了初步研究,亲和活性实验结果表明这四种几丁质结合蛋白对α-chitin具有亲和活性,并且可以辅助几丁质酶,对降解α-chitin和β-chitin均有不同程度的促进作用,且作用效果明显.结果表明,这四种几丁质结合蛋白均为α型,且可以促进几丁质酶的活性,对降解几丁质多糖具有巨大的应用潜力和应用价值.     

高效几丁质降解菌CB101的分离、鉴定及其几丁质酶系的研究

几丁质是海洋中居首位的多糖物质,它是虾、蟹壳的主要成分,同时广泛存在于昆虫外骨骼及真菌的细胞壁中.许多生物包括植物、细菌、真菌和一些无脊椎动物与脊椎动物都能够产生几丁质酶降解几丁质,其中细菌利用几丁质酶降解几丁质作为生活所需碳源和氮源.从生态角度来看,几丁质酶在自然界几丁质循环过程中扮演了重要角色,作为对环境的适应,多种微生物都带有完整的几丁质酶系.     

Comparison of the defluoridation efficiency of calcium phosphate and chitin in the exoskeleton of Antarctic krill

Calcium （Ca）, phosphorus （P）, and chitin are the main components of the exoskeleton of krill. Defluoridation of a solution of sodium fluoride （NaF） using calcium phosphate （Ca3（PO4）2） and chitin as defluoridation agents was studied. Orthogonal experiments were designed to find the optimum reaction conditions for defluoridation, to obtain the maximum defluoridation efficiency and fluoride removal capacity of calcium phosphate and chitin. At the same time, a comparison of the capacity of the two defluoridation agents was made. The results suggest that calcium phosphate has a far greater capability than chitin for the removal of fluoride （F） from water under similar reaction conditions. It is also suggested that Antarctic krill is likely to adsorb fluoride via compounds such as calcium phosphate, hydroxyapatite, and other compounds of Ca and P with the general form （Ca, X）x（PO4, HPO4, Y）y（OH, Z）z, in addition to chitin.     

厚壳贻贝几丁质提取及几丁质相关基因筛查

几丁质是贝类贝壳的重要组成成分,在贝壳形成和生物矿化中具有重要作用。本研究通过对厚壳贻贝的贝壳和外套膜边缘三层褶皱进行形态和组织学观察,发现贻贝角质层壳膜是从外褶皱和中褶皱之间的壳膜沟中分泌,而外套膜三层褶皱间组织形态、细胞类型都存在较大差异。此外,本研究还从厚壳贻贝的角质层和贝壳层中提取并鉴定到β-几丁质成分,并构建了外套膜内褶皱（IF）、中褶皱（MF）、外褶皱（OF）的转录组文库,筛查出几丁质合成、降解、结合相关功能的三类几丁质相关基因,对其结构域和表达模式进行进一步分析,发现几丁质合成酶基因以及β氨基己糖苷酶、二-N-乙酰壳二糖酶等几丁质酶基因主要在内、中褶皱表达,而壳三糖苷酶类的几丁质酶基因和几丁质结合蛋白基因则主要在外褶皱表达。在三褶皱差异表达基因的GO富集分析中,进一步发现内、中褶皱主要参与几丁质的生物合成,而外褶皱则主要参与调控几丁质结合、代谢、角质层色素沉着等过程。本研究揭示了外套膜三褶皱在几丁质合成、代谢、结合等功能方面的差异,其中外褶皱可能在厚壳贻贝的贝壳角质层的形成和色素沉着中发挥更重要的作用。本研究有助于了解贻贝贝壳中的几丁质成分以及几丁质相关基因,为软体动物贝...     

生物降解甲壳质的研究

介绍了利用生物 (主要是微生物 )降解甲壳质的一些研究进展 ,着重讨论了在甲壳质降解中起重要作用的几丁质酶的基本性质和分子生物学特征。指出了生物处理海洋资源 ,开发有用活性物质的应用前景。     

罗氏沼虾肝胰腺几丁质酶的亲和-消化纯化方法初探

世界上对几丁质资源的开发和利用方兴未艾 ,本世纪可能成为一个非常有前途的产业 ,对几丁质水解酶的研究 ,将是一项非常有意义的工作。对微生物几丁质酶的研究较早 ,也不深入 ,对动物几丁质酶的研究也有限。对甲壳动物几丁质酶的研究更晚。从开始注意到虾的周期性蜕皮过程中几丁质酶的生理相关性起到证明这种酶并非是由消化道中的细菌所产生 ,而是虾自身合成的[1] ,至最后从虾中分离并鉴定几丁质酶已是最近之事 [2 ] 。而对虾几丁质酶的纯化也没有多大突破 ,目前国外仅有的几份文献报导虾几丁质酶的纯化方案 ,要求的仪器设备、提纯步骤都太…     

几丁质和脱乙酰几丁质的吸附特性及其用于水中痕量铜的测定

THEUTILIZATIONOFCHITINANDCHITOSANINDETERMINGTHECONTENTOFTRACECUPRICION测定铜含量的方法有多种,如二乙氨基二硫代甲酸钠,原子吸收分光光度法等。几丁质（缩写为CT）广泛地存在于动植物中,它是一种天然的大分子含氮多糖化合物,是β-1,4连接的乙酰氨基葡聚糖,它具有吸附离子的能力,能富集金属离子,故对水的净化具有应用潜力[1]。近年来国人对CT的研究日渐增多,在食品、医药、环保、农业、造纸、印染、日用化工以及酶制剂等方面,已陆续见诸报道。自然界甲壳质产量达100×108t,但实际用量仅2000t…     

有机溶剂及变性剂对南美白对虾体壁几丁质酶的影响

从南美白对虾体壁提取几丁质酶,测定了几丁质酶(EC3.2.1.14)催化胶体几丁质水解反应的动力学参数,研究了几种有机溶剂及其变性剂对对虾体壁几丁质酶的影响,以探讨养殖环境与对虾的生长发育过程的相关性。结果是对虾体壁几丁质酶米氏常数Km=2.09mg/mL,最大反应速度Vm=0.93μmol/mL·min;甲醇、乙醇、正丙醇、乙二醇、丙三醇及脲对几丁质酶有抑制作用;二氧六环、二甲亚砜和SDS在低浓度时对酶有激活作用,随着浓度的升高表现出抑制作用;丙酮对酶有激活作用;戊二醛和甲醛对酶的抑制强度不大,最大的抑制程度分别达8.0%和9.8%。表明养殖环境的变化可引起与对虾蜕皮直接相关的几丁质酶生理生化的改变。