响应曲面分析法优化常用水解酶荧光测试法研究

土壤水解酶对森林生态系统的能量流动和养分循环具有重要作用,因此,正确测量土壤酶活性是酶学研究的基础,也有助于提高对地下生态循环的认识。所以,本实验选择常绿阔叶林与杉木针叶林这两种重要林分的土壤,基于综合实验设计和数学建模的优化方法-响应面分析法(RSM),对酸性磷酸酶(AP)、纤维素二糖水解酶(CBH)、β-葡糖苷酶(βG)、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)这4种常见的碳(C)、氮(N)、磷(P)水解酶的荧光测定方法进行优化。实验根据Box-Behnken设计原理,选取不同的搅拌时间、静置时间和培育时间,进行三因素三水平中心组合实验,通过回归方程确定了最优的组合条件。结果表明:土壤样品搅拌16.48 min,静置0 min,培育4 h后进行测定为最佳实验处理参数。本研究得到的实验方法可以提高酶活性测定的效率,而且简便易行,可为亚热带区域的森林土壤酶研究提供借鉴。