逐步添加法制备单链环状DNA的影响因素探究

单链环状DNA在纳米技术、分子生物学和医药学等领域具有广泛的应用前景,但难以大量制备一直是制约其研究和应用的难题之一。本文针对一种高效大量制备单链环状DNA的方法-逐步添加法,系统地探究了逐步添加法中各主要条件对制备单链环状DNA的影响,确定了逐步添加法中的主要关键条件为:T4DNA连接酶Buffer浓度、单链DNA浓度、添加间隔时间、温度和Splint GC含量。以72nt的核酸链为例,使用逐步添加法将单链环状DNA的制备得率提高至99%,产量与常用的一步法相比提高至4.9倍。本研究为高效、大量制备单链环状DNA提供了指导,为以单链环状DNA为基础的研究奠定了基础。