固定标本的DNA提取及PCR扩增

报道福尔马林、酒精固定的日本绒螯蟹标本的 DNA提取及 PCR扩增 ,并与冷冻、煮沸标本进行了比较。结果表明 ,福尔马林固定标本与酒精固定标本一样可以提取 DNA,加入的蛋白酶 K量越多 ,DNA的回收率越高。以提取的 DNA为模板 ,进行了线粒体 DNA12 S r RNA和 D- loop基因片段的 PCR扩增 ,经琼脂糖凝胶电泳 PCR扩增产物后均得到了与期待的碱基长度相一致的清晰谱带。     

Characterization of ribulose-1, 5-bisphosphate carboxylase/oxygenase and transcriptional analysis of its related genes in Saccharina japonica (Laminariales,Phaeophyta)

Saccharina japonica is a common macroalga in sublittoral communities of cold seawater environments,and consequently may have highly effi cient ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase(Rubisco)activity for carbon assimilation.In our study,we cloned the full-length Rubisco gene from S.japonica(SJ-rbc).It contained an open reading frame for a large subunit gene(SJ-rbcL)of 1 467 bp,a small subunit gene(SJ-rbcS)of 420 bp,and a SJ-rbcL /S intergenic spacer of 269 bp.The deduced peptides of SJ-rbcL and SJ-rbcS were 488 and 139 amino acids with theoretical molecular weights and isoelectric points of 53.97 kDa,5.81 and 15.84 kDa,4.71,respectively.After induction with 1 mmol/L isopropyl-β-Dthiogalactopyranoside for 5 h and purifi cation by Ni 2+ affi nity chromatography,electrophoresis and western blot detection demonstrated successful expression of the 55 kDa SJ-rbcL protein.Real-time quantitative PCR showed that the mRNA levels of SJ-rbcL in gametophytes increased when transferred into normal growth conditions and exhibited diurnal variations: increased expression during the day but suppressed expression at night.This observation implied that Rubisco played a role in normal gametophytic growth and development.In juvenile sporophytes,mRNA levels of SJ-rbcL,carbonic anhydrase,Calvin-BensonBassham cycle-related enzyme,and chloroplast light-harvesting protein were remarkably increased under continuous light irradiance.Similarly,expression of these genes was up-regulated under blue light irradiance at 350 μmol/(m 2·s).Our results indicate that long-term white light and short-term blue light irradiance enhances juvenile sporophytic growth by synergistic effects of various photosynthetic elements.     

2个重组海带α-碳酸酐酶(CA)的酶活性比较研究

为了探究海带(Saccharina japonica)α-CA1和α-CA2是否具有催化CO₂的可逆水合反应和酯酶活性,作者通过原核表达得到这两种α-CA的可溶性的异源重组蛋白。分别用电极法和酯酶活性检测法来检测重组α-CA1(rα-CA1)和rα-CA2的水合酶活性和酯酶活性,结果发现,rα-CA1的水合酶活性(1.52±0.120 U/mg)几乎是rα-CA2(0.54±0.046 U/mg)的3倍,表明rα-CA1催化CO₂的水合能力明显大于rα-CA2。而两者的酯酶活性并没有显著的差别(rα-CA1比活力:0.697±0.176 U/g,rα-CA2比活力:0.743±0.129 U/g),说明催化乙酸对硝基苯酯(p-NPA)生成对硝基苯酚(p-NP)的能力是没有显著差别的。实验结果证实这2个α-CA为功能蛋白,可能参与海带无机碳吸收和储存过程,因此,本研究为海带无机碳吸收和储存机制的解析提供了生物化学依据。     

海带中岩藻聚糖硫酸酯提取工艺评价模型的建立与探讨

采用均匀设计从海带中热水提取岩藻聚糖硫酸酯,以粗多糖提取率(Yw)、岩藻糖提取率(Yf)和硫酸根提取率(Ys)为评价指标,并采用综合加权评分法综合考虑各试验因素对以上三个指标的影响.利用Minitab软件分析加权值Y与各因素的相关性,再通过回归方程优化岩藻聚糖硫酸酯的工艺参数.建立了加权值Y与提取温度(X1)、提取时间(X2)和液料比(X3)之间的二次回归模型,即Y=65.2+0.555x1+1.73x2+0.587x3+0.0236x12+0.0939x32-0.110x1x2.优化后获得最佳提取工艺参数.     

日本凋毛藻(Griffithsia japonica)硫氧还蛋白基因及其编码的蛋白特征

从日本凋毛藻的表达序列标记EST库中筛选到2条全长的编码硫氧还蛋白的cDNA序列,分别命名为GjTRX1和GjTRX2。将这2条基因编码的蛋白序列与其它藻类(包括酵母)进行比较,结果表明不同物种及同一物种间TRX的相似性都较差,除GjTRX2编码的蛋白序列外,所有蛋白在活性位点序列WCGPC处都完全保守。推测GjTRX1属于细胞质内分布的硫氧还蛋白。GjTRX1序列推导的蛋白二级结构单元与以往报道的传统上保守的TRX的二级结构单元类型一致,但是顺序有所不同。     

北方用维尼纶苗帘培育海带夏苗的实验研究

根据南方和北方海带夏苗培育采用苗帘苗绳差异,在山东烟台国家级海带良种场海带育苗基地进行两种夏苗培育工艺的实验研究。在同一个育苗车间内,利用种海带采集游孢子并附苗,跟踪观测维尼纶苗帘和棕绳苗帘对海带育苗期间配子体发育、孢子体(幼苗)生长的影响,并比较两种不同苗帘育苗成本差异。结果显示:相同育苗条件下,维尼纶苗帘采苗后,配子体发育速度、孢子体形成速度显著优于棕绳苗帘上的配子体和孢子体;转化孢子体后,在育苗第15~31天时间内,维尼纶苗帘海带幼苗相对生长速率(RGR)显著大于棕绳苗帘幼苗(P0.05);维尼纶苗帘幼苗经55天培育,幼苗平均长度长至1.53 cm±0.13 cm,达到出库下海暂养规格,此时棕绳帘幼苗平均长度约0.47 cm±0.03cm。至70天,棕绳苗帘幼苗平均长度约1.78 cm±0.19 cm,维尼纶绳苗帘幼苗平均长度达7.87 cm±1.35cm,显著大于棕绳苗帘幼苗。采用维尼纶苗帘育苗,每1m3育苗水体育苗量约为60万株,综合育苗成本约为23元/万株,采用棕绳苗帘育苗,每1m~3育苗水体育苗量约40万株,综合育苗成本约为31元/万株。综上所述,北方采用维尼纶帘进行海带育苗在生产上具有可行性,并且可降低生产成本约25.8%。     

三十烷醇对海带三个品系雌配子体克隆生长和发育的影响

以海带雌配子休克隆为实验材料,通过施用三十烷醇处理。结果表明,三个品系在供试条件下,LH36生长最好,LH30发育率最高。它们对TA的反应为浓度在0．5～1．0×10-5mg／L时,都有促生长作用,其中LH30反应最敏感,LH10次之。浓度在1．0×10-5mg／L时,发育率最高,其中LH30发育率为51．5％,LH10为18．0％。LH36对各浓度处理的发育反应,差异都不明显。     

日本刺沙蚕摄食沉积物的实验研究

日本刺沙蚕为典型的沉积食性底栖动物,通过大量吞食沉积物来获得能量,以维持自身的营养需求。作者于１９９６年１０月在山东省丁字湾北部泥滩潮间带采集日本刺沙蚕,利用肠道内含物分析方法测定了日本刺沙蚕对自然沉积物的摄食率,其结果为５．７１±２．７６ｍｇ．ｍｇ－１．ｄ－１,并估算出日本刺沙蚕饱食沉积物所需时间约为６．５８ｈ。日本刺沙蚕在摄食沉积物时偏向于选择较大的颗粒,这与最适觅食模型的结论相反。这一结果可用底栖生物对其栖居环境适应方式的特殊性来解释。     

氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因在海带中的表达

于１９９４年１２月－１９９５年４月,在山东荣城海带育苗场采集海带幼孢子体,用基因枪法将氯氯素乙酰转移酶基因导入海幼孢子体中,４８ｈ后检测到瞬间表达,转化后恢复培养一周,以致死剂量氯霉素筛选,两周后对照组全部死亡,转化组７５株海带中有１１株存活,转化三个月后经ＣＡＴ酶联免疫（ＣＡＴＥＬＩＳＡ）分析,在１１株存活海带中有２株检测到ＣＡＴ基因的表达,结果初步证明了ＣＡＴ基因是海带基因工程的有效选择标记,