引进印尼种大珠母贝繁育F1母贝植核育珠研究

以印度尼西亚引进大珠母贝亲本繁育的子代F1群体进行植核育珠,育珠贝数量8086只,在海区休养20d后,统计育珠母贝的成活率与留核率,比较3月与4月植核手术育珠贝的育珠性状差异。结果表明：休养期结束后,育珠贝的成活率与留核率分别为97.57％和90.69％;育珠期3个月时（6月17日）育珠贝的成活率为81.22％;4月植核育珠母贝的留核率与成活率明显高于在3月的植核育珠母贝,但两者之间差异不具统计学意义（P〉0.05）。     

马氏珠母贝家系遗传结构的微卫星分析

利用6个微卫星位点研究了9个马氏珠母贝(Pinctada fucata)养殖家系的遗传结构,为后续育种工作提供了指导。从60对引物中筛选出6对能够稳定扩增且多态性较好的引物。6个微卫星位点在9个家系中共检测到17个等位基因,每个位点等位基因数(A)为2~4个,平均2.833个。6个位点在9个家系上的有效等位基因数(Ne)平均值为2.030~2.632,平均杂合度观测值(Ho)为0.4306~0.6354,平均杂合度期望值(He)为0.4380~0.5962。家系间遗传分化系数(FST)为0.0749。采用NJ法进行聚类分析显示,9个家系分为明显的两支,根据遗传距离计算结果, F7和F9家系之间的遗传距离最近, F11与F12家系遗传距离最远。结果表明,9个家系的遗传多样性和遗传分化处于中等水平,可以考虑F11与F12家系杂交,以期获得较好的杂种优势, F11自交培育出遗传稳定的优良家系。     

热带海洋珍珠贝类立克次体病研究 Ⅳ.组织细胞病理学研究

类立克次体（RLO）对大珠母贝和合浦珠母贝具有强烈的致病性,引起基本一致的病理变化．在急性坏死破坏期内,RLO导致外套膜、鳃、消化管、肝胰腺、生殖腺腺管及全身血管内皮系统等多器官组织的变性坏死,使器官组织结构的完整性遭到破坏,破坏程度与RLO包涵体的数目密切相关,而细胞的破坏与细胞内RLO的生长发育及繁殖到大量数目密切相关．鉴于此,将RLO引起的珍珠贝病称为类立克次体病（RLO病）．RLO病呈急性变质性炎症和慢性增生性炎症病理,在前者细胞呈现崩解性坏死、溶解性坏死和退变性坏死;在后者存在实质细胞增生和纤维母细胞增生为纤维细胞并形成纤维化．根据炎症病理的发展过程,RLO病可分为急性坏死破坏期和慢性增生修复期．     

合浦珠母贝碱性磷酸酶的分离纯化与性质研究

以合浦珠母贝（Ｐｉｎｃｔａｄａ ｆｕｃａｔａ）为提取酶的原料,经Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液（ｐＨ７．５）抽提,正丁醇处理,硫酸铵分级沉淀分离,ＤＥＡＥ－纤维素离子交换树脂支析,ＤＥＡＥ－Ａ２５离子交换分子筛柱层析纯化,得到一定纯度的碱性磷酸酶,比活力达到１４４４Ｕ／ｍｇ。酶学性质和动力学性质研究表明,该酶催化对硝基苯磷酸（ｐＮＰＰ）的水解反应,最适ｐＨ值为９．７２,最适温度为４５℃,水解反应的活化能为     

马氏珠母贝DNA快速一步法(ROSE)提取及ISSR-PCR应用

以马氏珠母贝(Pinctada martensii)为材料，采用一步法(ROSE)提取DNA，并将提取的DNA应用于ISSR扩增。结果表明：ROSE法提取DNA比常用的SDS法简易，快捷，无污染物产生，节省费用99％，DNA提取效率相当。ROSE法和常用的SDS法提取的DNA分别用于ISSR分析．可以获得一致性很好的扩增效果。因此，ROSE法提取DNA是一种适合于海洋贝类大规模提取DNA的有效方法。     

合浦珠母贝基因组微卫星富集文库的构建与分析

采用生物素标记的(AC)_(15)探针和磁珠富集法构建合浦珠母贝(Pinctada fucata)基因组DNA微卫星富集文库。随机挑选2097个克隆进行筛选,得到483个候选克隆(23.03%),对其中135个阳性克隆测序分析发现122个克隆含有微卫星重复单元(90.37%)。进一步通过序列比对,最终得到65个具有特异微卫星序列的阳性克隆(53.28%),其中包含85个微卫星DNA结构域,其中完美型(perfect)70个,占82.36%;非完美型(imperfect)7个,占8.24%;混合型(compound)8个,占9.41%,重复次数主要分布在5~20(95.74%),平均重复次数为7.83,(AC/GT)n重复所占比例最高(75.53%)。基于微卫星两端的侧翼序列,利用Primer Premier 5.0设计引物,获得11对具有多态性的微卫星引物。本研究为开展合浦珠母贝分子育种及资源评价分析提供了基础资料。     

马氏珠母贝PmFAMeT基因的克隆及表达

【目的】克隆马氏珠母贝(Pinctada martensii)法尼酸甲基转移酶(FAMe T)基因,并分析其在各组织中的表达。【方法】利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆获得马氏珠母贝FAMeT(PmFAMeT)基因的cDNA全长序列,利用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析PmFAMeT在马氏珠母贝不同组织中的表达模式。【结果与结论】PmFAMeT包含5′非编码区120 bp,3′非编码区968 bp和开放阅读框(ORF)1 536 bp,编码511个氨基酸。序列分析表明,PmFAMeT含有信号肽序列和跨膜结构域,并有WSC结构域、TSP1结构域和2个Methyltransf_FA结构域。将推导的PmFAMeT氨基酸序列与其他物种的FAMeT序列进行比对发现,不同物种的Methyltransf_FA序列同源性较高。PmFAMeT在马氏珠母贝的各个组织中均有表达,且在边缘膜、肝胰腺和性腺中的表达量显著高于其他组织。     

马氏珠母贝水通道蛋白基因AQP4 cDNA克隆和表达分析

水通道蛋白4(aquaporin4, AQP4)是一类被动运输水的通道蛋白。本研究根据转录组测序获得的马氏珠母贝AQP4片段, 采用RACE技术获得了AQP4的全长cDNA, 命名为PfAQP4, 其5′非翻译区(untranslated region, UTR)为114bp, 3′UTR为839bp, 开放阅读框(open reading frame, ORF)为858bp, 编码285个氨基酸。PfAQP4含有6个α螺旋跨膜区、5个环、1个主要内嵌蛋白(major intrinsic protein, MIP)结构域、2个NPA(Asn-Pro-Ala)基序, 属于AQP1-like型。利用qPCR技术分析PfAQP4在不同组织、不同发育时期以及盐度胁迫条件下的mRNA表达模式。结果显示: (1) PfAQP4在所有被检测组织中均表达, 其中在闭壳肌、足和鳃中表达量较高; (2) PfAQP4在不同的发育时期均有表达, 其表达量整体呈现先升高后降低的趋势, 其中在2—4细胞期表达量最高, 在眼点幼虫期表达量最低; (3) 在高盐度组(36‰)盐度胁迫24、72、120h后, PfAQP4表达量显著上升, 在168h降至对照组水平; 在低盐(16‰)组, PfAQP4表达量在24h显著上调, 在72h恢复至对照组水平, 说明盐度影响鳃组织中PfAQP4的表达量, 也表明PfAQP4在马氏珠母贝渗透压调节中起着非常重要的作用。     

马氏珍珠贝肉风味食品开发研究

研究了马氏珍珠贝肉制作五香、蒜香、姜汁三种风味即食制品的加工工艺技术。采用幅照保鲜技术对风味制品进行灭菌防霉处理,产品的保质期达到 １８０ ｄ 以上。对风味制品进行营养成分分析,结果表明：马氏珍珠贝肉风味制品是一种高蛋白、低脂肪、营养价值丰富的海产品,并富含牛磺酸（３．９ ｍ ｇ／ｇ）、多不饱和脂肪酸（ＥＰＡ＋ ＤＨＡ 占脂肪总量 ３４．７％ ）和多种无机质、微量元素和维生素     

养殖密度、水层和养殖地点对马氏珠母贝选育群体生长存活的影响

用通过壳高定向选择培育的第三代马氏珠母贝Pinctada martensii为实验材料,研究不同的养殖密度、养殖水层和地点对生长和存活的影响。实验结果表明在一定试验范围内养殖密度对体重增长有显著影响（p<0.05）,高密度组（200只/笼）的生长较低密度组慢,密度与水层对生长无明显的交互作用。水层对生长的影响不显著（p>0.05）,但对存活率的影响明显,2m水位的存活率较高,且水层与养殖密度间有交互作用。不同地点的贝的生长无显著性差异（p>0.05）。该研究结果将为珍珠贝优良品种（系）养殖技术的优化和品种推广体系的建立提供指导。