新加坡石斑鱼虹彩病毒ORF162蛋白的表达、纯化及抗体制备

将新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)的ORF162的开放式阅读框插入pET-32a表达载体T7启动子控制下的6-His·Tag编码基因上游,构建SGIVORF162原核表达质粒pET-ORF162。表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,成功表达SGIV ORF162融合蛋白。对IPTG浓度、诱导温度、诱导时间等诱导表达条件进行优化后,确定在0.7mmol/LIPTG、16℃条件下诱导14h时可溶性SGIV ORF162重组蛋白占重组蛋白总量的95%。经镍琼脂糖凝胶纯化,获得纯度为90%以上的SGIV ORF162蛋白。用纯化的SGIV ORF162蛋白免疫小鼠,获得高效特异的SGIV ORF162多克隆抗体。     

点带石斑鱼幼鱼配合饲料的适宜能量蛋白比

以鱼粉和酪蛋白为蛋白源,添加鱼油、豆油、α-马铃薯淀粉、纤维素以及适量的维生素和矿物质配制成实验饲料,蛋白质质量分数设置41%、47%、53%3个水平,能量设置12 561、14 655、16 748 kJ/kg 3个水平,饲养点带石斑鱼幼鱼59 d后,以增重率、蛋白质效率、饲料系数为评价指标,分析不同能量蛋白比的饲料对点带石斑鱼体内消化酶活性的影响。结果表明:当能量蛋白比分别为31.30、33.50、32.26 kJ/g时,点带石斑鱼增重率、蛋白质效率达到极大值,饲料系数达到极小值;能量蛋白比在31.62～35.54 kJ/g范围内,胃、肠道的蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性较强。点带石斑鱼幼鱼配合饲料中合适的能量蛋白比为31.62～33.50 kJ/g。     

第1期

论文与报告基于连续沥取的富钴结壳成凶机制的探讨………………………………………………………………………………蔡毅华,黄奕普,邢娜（1）饥饿对斜带石斑鱼稚鱼胃肠道内分泌细胞的形态、定位和分布密度的影响…………………………………………………翁幼竹,方永强（10）地芽孢杆菌属DYth03DNA聚合酶基因的克隆、表达及性质分析……………………………………………………罗淑娅,李侃,徐丽美（17）杂色鲍血蓝蛋白HtHI基因第16内含子SNP密度的分析…………………………………………梁翠,陈军,游伟伟,王德祥,柯才焕（21）大亚湾大鹏澳海域表层沉积物中浮游植物休眠体集群的季节变化…………………………………………付永虎,王朝晖,康伟,杨宇峰（27）     

4种石斑鱼染色体核型研究

以蜂巢石斑鱼(Epinephelus merra)、鲑点石斑鱼(Epinephelus fario)、点带石斑鱼(Epinephelus malabaricus)及黑边石斑鱼(Epinephelus fasciatus)为材料,胸腔注射PHA及秋水仙素溶液,取头肾细胞经空气干燥法制片。经核型分析,蜂巢石斑鱼与鲑点石斑鱼核型一样,2n=48=4m 6sm 4st 34t,NF=62;点带石斑鱼与黑边石斑鱼的核型一样,2n=48=48t,NF=48。由染色体数目2n=48可知,4种石斑鱼在鱼类系统中划分为高位类;由核型组成不同,可以将4种石斑鱼分为两大类：蜂巢石斑鱼与鲑点石斑鱼属于一大类;点带石斑鱼与黑边石斑鱼属于另一大类。此外,按总臂数多少来分,蜂巢石斑鱼与鲑点石斑鱼为特化类群：点带石斑鱼与黑边石斑鱼为原始类群。     

创伤弧菌疫苗对青石斑鱼的免疫学效应和安全性

弧菌病是海水网箱养殖石斑鱼Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ主要疾病之一。本文利用致病菌──创伤弧菌Ｖｉｂｒｉｏｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ强毒菌株制备出安全性很高的福尔马林灭活疫苗（ＦＶ）和热灭活疫苗（ＨＶ）。这两种疫苗无论使用佐剂与否，通过肌肉注射接种青石斑鱼Ｅ．ａｗｏａｒａ都能使鱼体在较短时间内产生较强的体液免疫应答，而且抗体效价能维持较长时期。免疫后的青石斑鱼获得了良好的免疫保护力。     

赤点石斑鱼脑垂体组织生理学的研究

本文采用多种染色法研究赤点石斑鱼脑垂体各叶不同细胞的形态特征,促性腺激素释放素对嗜碱性细胞的生理影响。讨论了脑垂体促性腺细胞的成熟过程与其性腺发育的关系。     

金虎石斑鱼和珍珠龙胆石斑鱼幼鱼胃排空特征及消化酶活性

【目的】比较金虎石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus tukula♂)(记作EFT)和珍珠龙胆石斑鱼(E.fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatus♂)(记作EFL)胃内容物质量的变化特征,并确定其最优数学模型。【方法】选取遗传背景相近、养殖条件相同的EFT和EFL幼鱼,在水温(24.04±1.87)℃条件下一次性饱食投喂颗粒饲料,在摄食后测定两者胃内容物湿质量,分析胃排空特征,比较线性模型、指数模型和平方根模型对胃排空曲线的拟合程度,分析胃和肠中消化酶活性变化规律。【结果】EFT、EFL幼鱼摄食后胃排空特征均呈典型的先慢后快再慢型,拟合效果最优的模型均为平方根模型,两种鱼类胃内容物(Y)与摄食后时间(t)的回归方程分别为Y^0.5=1.058 6-0.014 2 t(R²=0.901 8,P<0.000 1)、Y^0.5=0.969 0-0.018 7 t(R²=0.883 5,P<0.000 1);随着胃排...     

发酵浒苔对珍珠龙胆石斑鱼生长、非特异性免疫及消化酶活性的影响

浒苔经发酵后按添加比例（0%、1%、2%、3%、4%、5%）分别加入到珍珠龙胆石斑鱼（Epinephelus lanceolatus♂×Epinephelus fuscoguttatus♀）基础饲料中配制成6种饲料,用以探讨发酵浒苔对珍珠龙胆石斑鱼生长、肠消化酶活性及血清非特异性免疫力的影响。选用初始平均体质量为（19.16±0.25）g的珍珠龙胆石斑鱼为研究材料,试验周期28 d。结果表明:发酵浒苔能显著影响石斑鱼的增重率（WGR）和特定生长率（SGR）（P<0.05）,且随着发酵浒苔添加水平的升高呈现先升高后降低的趋势,在2%组添加量时显著高于对照组。同时,相比于对照组,各添加组饲料系数（FCR）均有下降,在2%组时显著降低（P<0.05）。添加发酵浒苔可以显著提高血清总超氧化物歧化酶（T-SOD）、碱性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）的活性（P<0.05）,但对溶菌酶（LZM）和酚氧化酶（PO）活性影响差异不显著（P>0.05）。在添加组中,淀粉酶、脂肪酶以及胰蛋白酶活性均得到了显著提高（P<0.05）,添加水平在2%~3%时效果最好。综合发酵浒苔对珍珠龙胆石斑鱼的作用效果可以看出,发酵浒苔可以明显促进其生长,提高非特异性免疫力及肠道中消化酶活力,建议发酵浒苔在饲料中添加量为2%左右。     

杂交石斑鱼和母本褐点石斑鱼转录组测序及差异表达基因分析

【目的】筛选褐点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)及其杂交子一代(E. fuscoguttatus♀×E. polyphekadion♂,F1)的差异表达基因,探讨褐点石斑鱼及F1代之间的生长差异性。【方法】采用Illumina HiSeq 2000测序平台对同龄的褐点石斑鱼及其杂交F1的脑、肝脏和肌肉组织进行转录组测序,通过edgeR软件包筛选差异表达基因,并对差异表达基因进行GO(Gene Ontology)功能注释和KOG注释,最后通过实时荧光定量PCR验证转录组数据。【结果】测序的原始数据经过质量控制和组装共得到54 610条unigenes。组装的unigenes共有28 832条unigenes得到注释,共获得20234条差异表达基因,其中有10218条上调,10016条下调。GO功能注释显示共34061条unigenes聚类到涉及生物过程、分子功能和细胞组分的53个功能类别,其中被较多基因聚类到的功能类别为细胞过程、结合、单一生物过程、代谢过程和催化活性等。KOG注释发现,42 753 unigenes被注释到25个功能类别中,其中较多涉及信号转导机制、基因功能预测、翻译后修饰,蛋白质周转和分子伴侣、转录等。进一步筛选到一批和生长相关的差异表达基因,如GH、GHRH、PRL、SLP、AVTp等,这些差异表达基因在F1中的表达水平均高于其亲本褐点石斑鱼,与杂交F1相较于褐点石斑鱼生长快速的性状相符。【结论】研究完成了对褐点石斑鱼及其杂交F1的转录组测序、组装,获得了测序数据在不同数据库的功能注释信息,同时筛选了一批生长相关差异表达基因,这些基因在F1中的表达水平均高于其亲本褐点石斑鱼,与现实生长性状相符。