cDNA cloning and expression of a collectin from red-spotted grouper （Epinephelus akaara）

Lectins play a crucial role in the innate immunity of invertebrates and vertebrates by recognizing and disposing of pathogens.We obtained the complete cDNA of a C-type lectin(EALec1) from Epinephelus akaara using RACE.The complete EALec1 cDNA sequence was 827 bp.The 5-UTR and 3-UTR were 28 bp and 151 bp,respectively,in length.The sequence also contained a polyadenylation signal AATAAA and a poly(A) tail.The EALec1 cDNA encodes polypeptides with 215 amino acids,including a signal peptide of 31 amino acids.Th...     

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)半乳糖凝集素PtGAL的基因克隆与原核重组表达

半乳糖凝集素(Galectin)是动物凝集素家族的一员,在脊椎动物和无脊椎动物中都参与了重要的免疫防御反应,是一种重要的免疫因子。通过RT-PCR和RACE技术克隆获得了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)半乳糖凝集素基因全长,并命名为PtGal。该基因全长875bp,开放阅读框为669bp,编码222个氨基酸,包含一个糖识别结构域CRD(位于16—142位氨基酸),预测蛋白的分子量(Mw)为23529.4Da,理论等电点(p I)为5.21。同源性比对结果显示,PtGal编码的氨基酸序列与中华绒螯蟹、南美白对虾、日本囊对虾galectin的同源性分别为77%、66%、58%。实时荧光定量PCR(qRT-RCR)结果表明,PtGal在三疣梭子蟹肝胰腺、肌肉、肠、胃、鳃、心脏、性腺中都有表达,其中在性腺中的表达量最高,在肝胰腺中的表达量最低,但人工感染溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)后,肝胰腺的表达呈先升高后降低的趋势。利用原核表达系统对三疣梭子蟹PtGal进行了重组表达,并通过纯化复性获得了重组目的蛋白rPtGal,ELISA检测rPtGal与不同细菌及真菌的结合活性,结果表明,该重组蛋白与革兰氏阳性菌、阴性菌和真菌均有较强的结合。本研究为进一步深入研究三疣梭子蟹半乳糖凝集素的功能奠定了基础。     

文蛤C型凝集素基因(Mm-Lec1)的克隆与表达分析

文蛤(Meretrix meretrix)是我国重要的滩涂养殖贝类,病害严重影响文蛤增养殖业,研究文蛤的免疫机制有助于解决文蛤的病害问题。C型凝集素(C-type lectin)参与先天免疫,在识别病原相关分子模式和激活体液免疫因子等方面发挥重要作用。本研究检索已构建的文蛤全长cDNA 文库,经过Blast比对得到了文蛤C型凝集素1(Mm-Lec1)基因的全长cDNA序列。Mm-Lec1序列全长586 bp,5'和3'非翻译区(UTR)的长度分别为21 bp和79 bp,开放阅读框长度为486 bp,编码161个氨基酸,分子量为18.65 kD,理论等电点为4.98。预测的氨基酸序列中含有信号肽(Met1-Ser19)、糖识别结构域(CRD)和糖结合位点(QPN)。Mm-Lec1的三级结构是紧凑型,含有β片层结构。同源性分析结果表明,Mm-Lec1与其他物种C型凝集素相似度在20%~32%;邻接法(Neighbor-Joining, NJ)进化树分析结果表明,Mm-Lec1与紫贻贝CTL 6和栉孔扇贝CTL A聚为一支。实时荧光定量分析结果显示,Mm-Lec1在文蛤鳃、肝胰腺、闭壳肌、外套膜、性腺和血细胞中均表达,其中鳃表达量最高,血细胞次之,性腺中表达量最少;在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激实验中,6 h时Mm-Lec1在血细胞中的表达量最低,48 h表达量最高,暗示Mm-Lec1参与文蛤抵御细菌入侵的免疫过程。     

花尾胡椒鲷染色体组型分析

以花尾胡胡椒鲷为材料，胸腔注射PHA及秋水仙素溶液，取头肾细胞经空气干燥法制片，姬姆萨染液梁色，分析染色体组型，分析结果是，梁色体数目2n=46,46t，染色体总臂数（NF）为46。     

脊条褶虾蛄血清及肌肉提取液凝集活性的比较

利用血凝试验及糖抑制试验测定脊条褶虾蛄的血清及肌肉提取液的凝血活性及糖抑制专一性，同时进行热稳定性、pH及Ca^2 影响试验。结果显示：其血清能凝集12种红细胞，且其凝集效价高于肌肉提取液（兔、蛇、鲫鱼除外）。血清对鹌鹑红细胞的凝集可被D－果糖、D－半乳糖和蔗糖所抑制，最小抑制浓度均为200mmol/dm^3，其凝集活性均依赖于Ca^2 ，在pH值为5.0-9.0范围内较稳定，经40℃保温10min后活性完全消失；肌肉提取液不被7种糖抑制，在pH值为4.0-10.0、温度为40－90℃范围内均具活性，说明有很强的耐热性，其凝集性不依赖于Ca^2 。以上结果表明：脊条褶虾蛄血清与肌肉提取液均含有凝集素，且凝集素的种类不同。     

唾液酸专一性凝集素的研究进展

人们是在近３０ａ来对凝集素进行广泛的研究的 ,在我国 ,则是在８０年代中期以后。而由于人们对无脊椎动物免疫学的认识普遍肤浅 ,制约了对其凝集素的研究 ,但是作为一种重要的体液免疫因子人们又迫切需要了解和利用它的功能。例如 :人们在进行重要的水产经济动物中国对虾的免疫功能研究时发现 :用弧菌诱导过的中国对虾 ,凝集素凝集活力明显增高 ,而在已发病的病虾体中的凝集素活力下降 ［１ ,２］。这一升一降说明凝集素在对虾开始受感染时 ,发挥着免疫防御作用 ,而当对虾已发病时 ,会随着整个免疫系统功能的下降而下降。这都说明凝集素与…     

甲壳动物血清中凝集素对微生物细胞的凝集性能

用12种甲壳动物血清凝集素提取液，对10种微生物细胞进行凝集试验，发现每种甲壳动物血清至少能凝集3种微生物细胞，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞对凝集素反应最为敏感。7种甲壳动物血清凝集素对酿酒酵母细胞的凝集可被2种以上的糖所抑制，12种甲壳动物血清凝集素的温度和pH适应范围表现不一，但它们的凝集活性都被EDTA所抑制。     

经酶修饰和未经酶修饰的鹌鹑红细胞对甲壳动物血清凝集素凝集活性的差异研究

为寻找凝集素作为分子探针提供基础资料,用12种甲壳动物血清抽提液对天然的或经酶修饰的鹌鹑红细胞进行凝集试验。实验结果表明,经蜗牛酶修饰后的鹌鹑红细胞的凝集作用发生了变化,与未经酶处理的鹌鹑红细胞相比,凝集活性提高的有日本沼虾（Macrobrachium nipponense）等7种,凝集活性下降的有罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergi）等2种。凝集素对动物红细胞的凝集可看作是与这些细胞表面的多糖或糖蛋白——即受体的识别性鲒合,这表明鹌鹑红细胞表面具有12种凝集素的受体,且大多数受体都受到酶修饰的影响,从而在凝集活性上表现出差异。     

丽文蛤血清中外源凝集素的凝集性能

丽丽文文蛤蛤（（ＭＭｅｅｒｒｅｅｔｔｒｒｉｉｘｘｌｌｕｕｓｓｏｏｒｒｉｉａａ））属属瓣瓣鳃鳃纲纲 ,,帘帘蛤蛤科科 ,,文文蛤蛤属属。。是是沿沿海海滩滩涂涂养养殖殖的的主主要要品品种种之之一一 ,,内内含含丰丰富富的的蛋蛋白白质质。。具具有有高高营营养养、、易易养养殖殖的的优优势势。。但但随随着着丽丽文文蛤蛤养养殖殖的的连连年年持持续续 ,,其其病病害害的的发发生生率率正正逐逐年年提提高高。。而而凝凝集集素素作作为为软软体体动动物物体体内内参参与与体体液液免免疫疫的的重重要要免免疫疫因因子子 ,,其其在在免免…     

深海热液区管状蠕虫Ridgeia piscesae中Ricin B-lectin型结构域基因的克隆与表达

作为一种重要的模式识别因子,凝集素在多个领域中均有着广泛的应用价值,因此,开发和利用新型凝集素将具有重要意义.本研究以生活在深海热液区极端环境条件下的管状蠕虫Ridgeia piscesae为材料,首次从管状蠕虫中克隆获得Ricin B-lectin基因rgal.序列分析表明,RGAL与已知序列的相似性较低,其含有2个Ricin B-lectin型结构域,并且该结构域具有该家族所特有的β-三叶草形三维结构.多方面的分析结果显示RGAL可能是一个新颖的凝集素蛋白.对RGAL进行了原核重组表达,并对其复性条件进行了摸索优化,成功获得了其可溶性表达产物,为后续RGAL的生物活性分析奠定了坚实的基础.