外源凝集素──水产动物御敌的有力兵器

外源凝集素是非免疫起源的热敏蛋白质或糖蛋白，由于其多价构型及对持定细胞多糖具结合亲和力，它们选择凝集某些细胞（包括脊椎动物血球及一些病原微生物）和沉淀某些复杂碳水化合物；其凝集活动常被单糖所抑制，有的却需某些二糖、三糖或多糖。外源凝集素分离自广泛的低等和较高等的生物。一些地区水产养殖业受挫，因素较多，但对发病机理认识之缺乏和调动养殖对象本身防病积极性之不足，是其重要原因。外源凝集素可在诸如凝集外来细胞，调理作用等的防御活动中扮演识别因子，协助一些生理活性物发挥作用，参与吞噬、胞囊、凝固、止血及创伤修复等作用。在生物学、细胞学、生物化学、医学和食品科技上有广泛用途。迄今外源凝集素的许多性能并未全清，在自然界中的精细生理作用仍是个谜。本文论述外源凝集素的定义、性能及用途，以提请有关人士重视。     

草鱼血清中一种新的凝集素免疫因子

于1998年5月－2000年3月，在浙江省杭州市采集草鱼，采用硫酸铵盐析和梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，从血清中分离出一种自然凝集素，对其理化和生物学性质进行研究。结果表明，该凝集素能够识别和凝集多种不同的红细胞、细菌和酵母，具有100000g离心不沉降，不被透析，耐热、耐酸、耐碱，抗DNase、RNase、SDS和乙醚，对胰蛋白酶、糖苷酶、糖氧化剂NaIO4和β－巯基乙醇敏感等特性，是一种分子量为67kD、等电点为6．2的糖蛋白分子。其活性能被半乳糖、乳糖、甘露糖和N－乙酰葡糖胺所抑制，其抗原特异性不同于草鱼凝集集抗IgM，表明两者是不同的物质。草鱼凝集素显著地促进巨噬细胞的吞噬、杀菌能力，说明是一种重要的免疫活性因子。     

Screening of Lectins in Crab and Shrimp from Fujian Coast of China

Twelve species of crustacean from Fujian coast were examined for lectins with different animal erythrocytes. Serum extracts fromall of 12 species showed agglutinating activity against at least two types of the erythrocytes used, which revealed the existence of lectins in these species. There were five species ( Penaeus japonicus, Lophosquilla costata, Charybdis feriatus, Portunus pelagicus, Scylla serrata ) whose serums could agglutinate all the erythrocytes tested. The lowest serum protein concentration required to produce erythrocytes agglutination varied remarkably, ranging from 0.7 μg/mL to 8 080 μg/mL. The strongest activity was shown in the agglutination of rabbit erythrocyte by serum of Penaeus vanaminas. Inhibition assays performed with seven mono- and bisaccharides showed that agglutination of quail erythrocytes by serums of three species (Portunus pelagicus, Scylla serrata and Sesarma sp. ) were not inhibited by any sugars, while others were inhibited by at least three types of sugars. The assay of temperature influence on agglutinating activity showed that only Penaeusjaponicus retained activity when the serum was heated to 90℃, and other serums lost their activity at 40 ℃, 50 ℃, 60 ℃, 70 ℃, 80 ℃ for 10 minutes, respectively.     

马氏珠母贝PmLec-8基因的克隆与表达分析

Lec-8(C-type lectin 8)属于C-型凝集素超家族,在机体抵抗微生物的感染过程起重要的作用。本研究采用RACE技术克隆出了PmLec-8基因cDNA全长序列,并且运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了PmLec-8基因在马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)不同组织中的表达模式。结果显示:PmLec-8基因序列全长737 bp,其中5′UTR长为36 bp,3′UTR长为113 bp,开放阅读框(ORF)为588 bp,编码195个氨基酸,预测其分子质量约为22.90 ku,等电点为5.17;PmLec-8具在一个糖类识别结构域(Carbonhydrate-recognition domain,CRD),符合典型的C型凝集素(C-type lectin)家族特征;多序列比对结果表明物种间Lec-8的同源性较低,4个半胱氨基酸残基高度保守;qRT-PCR数据分析表明,PmLec-8在马氏珠母贝肝胰腺、性腺、闭壳肌、鳃、血细胞和外套膜中均有表达,其中肝胰腺中表达量最高,其次是鳃,差异具统计学意义(P0.05)。     

文蛤(Meretrix meretrix)C-型凝集素基因的分子克隆及表达分析

C-型凝集素是一种重要的模式识别蛋白,本研究以文蛤为材料。利用PCR扩增和RACE技术首次获得了编码文蛤C-型凝集素的基因(Mm-CTL)c DNA序列,全长为1855bp,其开放阅读框为519bp,编码172个氨基酸。Smart软件预测Mm-CTL的糖识别结构域(CRD)从第34个氨基酸到第168个氨基酸。BLASTP序列相似性分析显示,Mm-CTL与大竹蛏氨基酸序列同源性最高,相似性为56.5%,与其它无脊椎动物的相似性为13.5%—23.9%。系统进化树分析与同源分析结果一致,其中Mm-CTL与双壳类C-型凝集素聚在一起,与大竹蛏亲缘性最近。环境胁迫实验显示,溶藻弧菌感染6h时Mm-CTL表达量明显上升,在12h时达到最高值,随后有所下降。盐度胁迫时Mm-CTL在盐度5时表达量相对较低,在盐度10—20中的表达量相对较高。温度胁迫时Mm-CTL在35°C时表达量相对最高,10°C时表达量明显较低。研究结果表明,文蛤应对环境因子影响可通过调节Mm-CTL的表达来应答免疫反应。本研究将为贝类先天性免疫因子研究以及病害的防控奠定基础。     

双壳贝类血清中凝集素凝集性能初步研究——对脊椎动物血细胞的凝集作用

在多种贝类血清中发现有可凝集脊椎动物血细胞的因子——凝集素。栉孔扇贝（Ｃｈｌａｍｙｓｆａｒｅｒｉ）血清中的凝集素可凝集鸡、鹌鹑、小鼠等多种动物血细胞,但对鳝鱼血细胞不发生作用。该凝集素具有较强的热稳定性,１００℃处理４５ｍｉｎ仍具活性;并具有广泛的ｐＨ范围,可在ｐＨ３～１１进行凝集作用。但其活性可被ＥＤＴＡ强烈抑制,Ｄ－甘露糖和Ｌ－鼠李糖对其活性有明显抑制作用,Ｄ－木糖和蕈糖也有轻微抑制作用。在栉孔扇贝血细胞的细胞膜上未发现有凝集鸡血细胞的活性物质。另外,用大肠杆菌和副溶血弧菌刺激栉孔扇贝后,血清的凝集作用不变。     

深海热液区管状蠕虫Ridgeia piscesae新型C型凝集素的克隆与表达

C型凝集素作为凝集素家族的主要成员之一,在无脊椎动物中有着丰富的多样性,其独特的生物学功能广泛应用于生物、医药等诸多领域。本研究从采集于东北太平洋深海热液区胡安·德富卡洋脊的管状蠕虫Ridgeia piscesae中克隆获得了一种新型C型凝集素基因RPCL。该基因与已报道的凝集素的相似性都很低,并且三维结构预测有异于传统凝集素,提示其可能具有一些特殊的功能性质。进一步的原核表达成功实现了 RPCL的异源重组表达,通过透析复性获得了大量可溶性蛋白,为其相关功能性质的研究打下了坚实的基础。     

泥蚶凝集素的抑菌作用和免疫学研究

分别从泥蚶血淋巴液和肌肉中提取出凝集素,采用全血微量培养法进行淋巴细胞转化和抑菌实验。结果表明:两种凝集素都具有促进小鼠淋巴细胞转化的免疫调节功能;两种凝集素对供试的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),甘薯薯瘟病原细菌(Fasarium oxyssporam),大肠杆菌(Escherichia coli),普通变形杆菌(Proteas valgaris),八叠球菌(Sarcina lutea)5种细菌和啤酒酵母(Saccharomyces carlsbergensis),玉米大斑病菌(Helminthos porium turcicum),稻瘟病菌(Piricularia oryzae)3种真菌都有不同程度的抑制作用,且对真菌的抑制作用大于对细菌的抑制作用;由二者分别制备的抗血清通过免疫双扩散法并不能与对方发生交叉沉淀反应,说明它们不具有同源性。     

两种微藻凝集素对几种不同类型细胞的凝集作用

经离子交换和分子筛层析从紫球藻（Porphyridium cruentum）和海水小球藻（Chlorella sp．）中分离纯化得到2种凝集素,研究它们对几种不同类型细胞即动物和人血红细胞、海洋和淡水微藻、细菌和真菌的凝集活性。研究结果表明,2种微藻凝集素对它们当中一些类型的细胞或种类具有不同程度的凝集活性,其中对水生聚胞藻（Synechocystis aquetilis）的凝集活性最强,最低质量浓度只需0．0313g／L。