低分子量壳聚糖及其衍生物的制备与溶菌酶对其降解的实验研究

将大分子质量壳聚糖用壳聚糖酶法降解成分子质量为3ku左右的低分子质量壳聚糖,再将其分别化学修饰成低分子质量的羧甲基壳聚糖和羧甲基甲壳素,并进行结构表征。在最适条件下,用溶菌酶分别对3种多糖进行降解实验,并进行酶解前后多糖的还原糖浓度测定和HPLC分析,确定溶菌酶对不同结构多糖的水解能力。结果表明,溶菌酶对羧甲基甲壳素水解作用最快,羧甲基壳聚糖次之,壳聚糖最慢。该研究为甲壳素衍生物在生物医用材料中的应用和降解速率调控提供了依据。     

细胞破碎方法对Bacillus sp.DL-2胞内蛋白酶拆分乙酸苏合香酯的影响

(R)-1-苯乙醇是手性药物合成的关键手性砌块, 在多种手性化合物的合成及医药、香料的工业生产中具有重要的作用。对筛选自西太平洋深海沉积物的Bacillus sp. DL-2进行破碎, 获取的胞内蛋白酶能有效拆分(±)-乙酸苏合香酯, 制备高光学纯的(R)-1-苯乙醇。为使拆分效果最优化, 本试验对比了表面活性剂、溶菌酶和超声法3种不同的破碎细胞方式, 并对表面活性剂和溶菌酶破碎法进行了单因素条件优化。最优方法及优化的反应条件为: 使用体积分数0.5%的表面活性剂曲拉通X-100在35℃和pH7.0条件下破碎细胞2h。经过优化后, (R)-1-苯乙醇的对映体过量值为96%, 转化率为23%, 为利用胞内蛋白酶生产手性化学品提供了参考。     

法螺G型溶菌酶重组蛋白的原核表达及抑菌活性探究

G型溶菌酶(G-type lysozyme,G.lys)是一种富含半胱氨酸的天然免疫因子,在无脊椎动物的免疫防御过程中起重要作用。本研究旨在通过揭示法螺(Charonia tritonis)G型溶菌酶(CtG.lys)重组蛋白的抑菌功能,为进一步认识法螺的分子免疫机理及病害防治提供新思路。首先对CtG.lys序列进行了分析,利用实时荧光定量PCR检测CtG.lys的组织分布,然后以pGEX-4T-1为表达载体,构建重组质粒pGEX-4T-1-CtG.lys,进行重组蛋白表达,并检测了重组蛋白的抑菌活性。结果显示:1)CtG.lys cDNA的5''非翻译区(UTR)为66bp,3''UTR为186bp,开放阅读框为789bp,编码262个氨基酸,有1个可溶性转糖苷酶(SLT)结构域(72~255aa),包含6个半胱氨酸残基和3个酶活性催化位点(Glu⁷²、Asp⁸⁵、Asp⁹⁶);2)多序列比对及系统发育分析表明,CtG.lys与亲缘关系较近的福寿螺G型溶菌酶氨基酸的同源性最高;3)CtG.lys在所有被检测组织中均表达,其中在肝脏、外套膜表达量较高;4)16℃,0.5mmol/L IPTG诱导表达10h后,重组蛋白在上清液和包涵体均表达分子量约为51.91kDa,纯化后得到浓度为1.2mg/mL的重组蛋白;5)抑菌实验表明,重组蛋白pGEX-4T-1-CtG.lys具有抗金黄色葡萄球菌Staphyloccocus aureus、藤黄微球菌Micrococcus luteus、施罗氏弧菌Vibrio shilonii的活性,对革兰氏阳性细菌的抑菌作用大于革兰氏阴性细菌。研究结果为进一步解析法螺免疫防御的分子机理提供了参考数据和科学依据。     

Macroalage as a source of alpha-glucosidase inhibitors

Alpha-glucosidase inhibitors were screened from organic solvent extracts of macroalgae by a spectrophotometrical method with p-nitrophenyl-D-glucopyranosidase as the substrate. The result indicates that orgarlic crude extracts from some macroalgae such as Rhodomela confervoides (Huds.) Silva, Gracilaria textorii(Suringar) DeToni, Plocamium telfairiae Harv., Dictyopteris divaricata (Okam.) Okam, Ulval pertusa and Enteromorpha intestinalis (L.) Link et al. show strong inhibitory activity of alpha-glucosidase at concentration of 79.6 μg/ml.     

三种致病弧菌感染对大黄鱼非特异性免疫功能的影响

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolytic-us)是引起大黄鱼(Pseudosciaena crocea)溃疡病的3种主要致病菌.将试验大黄鱼随机分成4组,分别腹腔注射哈维氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和灭菌生理盐水,在感染后的不同时间采样,通过白细胞数量、白细胞分类计数、NBT阳性细胞数量以及溶菌酶活力的变化趋势来探讨3种致病弧菌感染对大黄鱼非特异性免疫功能的影响.结果表明,大黄鱼各项血液指标的变化主要发生在感染后的1～7 d.在人工感染的初期,各实验组大黄鱼外周血的白细胞数量、NBT阳性细胞数量呈现先增加后降低的趋势,淋巴细胞、嗜中性粒细胞百分比显著降低(p<0.05),单核细胞百分比显著提高(p<0.05);随着时间的延长,白细胞数量开始下降;淋巴细胞、嗜中性粒细胞百分比有所上升,7 d以后各类血细胞数量变化不显著.其中哈氏弧菌感染组在白细胞数量、NBT阳性细胞数量等多个指标上的变化最为明显.血清中溶菌酶活性显著高于脾组织,鱼体受感染后两者溶菌酶活性均较对照组有显著提高,不同致病菌与大黄鱼非特异性免疫功能之间呈现一定的时效差异.研究认为反映鱼体受感染后从应激反应发生至非特异性免疫功能的发挥主要发生在病原菌感染前期,不同致病菌与大黄鱼非特异性免疫功能之间呈现一定的时效差异.     

凡纳滨对虾溶菌酶基因在大肠杆菌中的表达和活性检测

将凡纳滨对虾(litopenaeus vannamei)血淋巴细胞中提取的总RNA,经RT-PCR扩增溶菌酶基因(LvLys 基因)的开放阅读框,将其克隆至pMD18-T并测序.用限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切取目的基因并与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组质粒pET-28(a+)/LvLys,转移到BL21(DE3)中诱导表达.经亲和纯化得到凡纳滨对虾重组溶菌酶.抑菌活性检测表明重组溶菌酶对大肠杆菌TOP10有一定抑制作用.     

6-O-羧甲基氨基葡萄糖的制备及其结构分析

采用酶降解和酸降解相结合的工艺,将大分子量的6-O-羧甲基甲壳素降解成单分子的6-O-羧甲基氨基葡萄糖,经906型弱碱性阴离子交换树脂柱吸附层析分离,制得羧甲基化氨基糖。对该单糖进行了HPLC、高效薄层、比旋光度、熔点和红外光谱等方面的分析研究。结果表明,该单糖在C6连有羧基,C2连有氨基,具有特定的比旋光度和熔点特征,与报道的结果相一致。     

氨氮胁迫对马氏珠母贝免疫活性的影响

在实验室条件下探讨氨氮胁迫对马氏珠母贝(Pinctada martensii)血细胞密度、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)活性的影响。结果表明:1)不同浓度氨氮(1.25~40 mg/L)胁迫3 d后,马氏珠母贝血细胞密度随氨氮浓度的增加呈下降趋势,当氨氮浓度超过5 mg/L时血细胞密度较对照组明显下降,差异极显著(P<0.01);2)血清SOD活性随实验氨氮浓度(1.25~40 mg/L)的增加而明显下降,在较低氨氮浓度(1.25~5 mg/L)时,SOD活性高于对照组,氨氮浓度超过10 mg/L时,SOD活性低于对照组,各实验组SOD活性与对照组均存在极显著差异(P<0.01);3)当氨氮浓度为1.25~20 mg/L时,马氏珠母贝血清CAT活性随氨氮浓度的增加而升高,除氨氮1.25 mg/L组外,其余各实验组血清CAT活性较对照组极显著升高(P<0.01),当氨氮浓度为30~40 mg/L时,血清CAT活性呈急剧下降趋势,且低于对照组(P<0.01);4)马氏珠母贝血清LSZ活性随实验氨氮浓度的增加而降低,当氨氮浓度为10 mg/L以下时,血清LSZ活性高于对照组,当氨氮浓度为20 mg/L以上时,血清LSZ活性较对照组极显著降低(P<0.01);5)氨氮浓度为1.25~10 mg/L时,马氏珠母贝血清ACP活性随氨氮浓度的增加而升高,且高于对照组(P<0.01),当氨氮浓度超高20 mg/L时,马氏珠母贝血清ACP活性随氨氮浓度的增加急剧降低,且低于对照组(P<0.01)。     

The distribution of rare phenolic type compounds in wild and cultivated wheats

In 14 species of Aegilops, four species of Triticum and two species of Hordeum, a complex of rare phenolic compounds was found and showed quantitative differences between the wild and domestic species. There was a dramatic reduction in the cultivars to about 5% of the amount of these phenolic constituents. In the wild species these phenolic compounds may act as important germination regulators, such as water-dissolving germination inhibitors which may act as 'rain gauges'. This is especially important for the germination at the appropriate time in species inhabiting arid regions or deserts.     

鳗弧菌感染对斑节对虾免疫相关指标的影响

为了研究鳗弧菌(Vibrio anguillarum)对斑节对虾(Penaeus monodon)免疫相关指标的影响,分别对斑节对虾注射生理盐水和鳗弧菌,测定了不同时间点肝胰腺和鳃中总抗氧化能力(T-AOC)、溶菌酶(LSZ)和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)活性以及一氧化氮(NO)含量的变化。结果显示,与对照组相比,感染鳗弧菌后,肝胰腺和鳃中T-AOC活性分别于6和12 h达到最大值(P0.05),随后逐渐降低;肝胰腺和鳃中LSZ活性分别于6和12 h升高至最大值,随后均于24 h显著低于对照组(P0.05);肝胰腺和鳃中NO含量分别于6和3 h达到最大值,随后肝胰腺中NO含量于24 h降低至最小值,而鳃中NO含量于6和24 h虽有降低,但仍显著高于对照组;肝胰腺中i NOS对感染反应较为敏感,活性于3 h达到最大值,而鳃中i NOS活性于6 h开始显著上升,并于12 h达到最大值(P0.05)。研究表明,长时间的鳗弧菌感染对斑节对虾免疫相关指标有显著影响;T-AOC、LSZ、NO和i NOS对鳗弧菌感染均反应敏感,可以作为弧菌病诱发的监测指标。