刺参呼吸树的超微结构观察与研究

用光镜、扫描电镜和透射电镜观察研究健康刺参（Apostichopus japonicus）呼吸树的形态结构,并观察研究濒死刺参呼吸树的异常,结果显示：刺参呼吸树由外向内依次为体腔上皮、肌层、血腔、内皮细胞和中央腔。体腔上皮细胞游离面有长而不规则的微绒毛,细胞上部吞饮小泡丰富,细胞中常见吞噬体。内皮细胞表面有各种形状的细胞突起,细胞顶浆分泌活跃,细胞内质膜小泡丰富。体腔上皮细胞和内皮细胞中丰富的吞饮小泡和质膜小泡提示这两种细胞具有吸收功能。体腔上皮和内皮下连续成层的基膜围戍呼吸树中封闭的血腔。内皮层与内皮基膜构成呼吸树的呼吸膜,由泄殖腔进入呼吸树中央腔的海水和呼吸树血腔中的血液经此气一血屏障进行气体交换,完成呼吸作用。体腔上皮与上皮下基膜构成体腔液一血液屏障,刺参的体腔液与呼吸树血腔中的血液经此屏障进行物质交换。呼吸树还在渗透压调节和代谢产物排泄中起作用。在濒死刺参的呼吸树中,纤毛虫大量积聚在中央腔中并附着在内皮层上,导致呼吸作用不能正常进行,这可能是当养殖水体恶化时造成刺参患病并死亡的重要原因之一。     

利用引物退火控制技术克隆日本囊对虾性腺差异表达基因

为了解日本囊对虾（Marsupenaeusjaponicus）性腺发育及分化的分子机制,本研究采用改良的引物退火控制技术克隆到了共8个精巢、卵巢的差异表达基因．其中4个为已知基因,分别为凝血酶敏感蛋白基因、皮质棒蛋白基因、增殖细胞核抗原基因和泛素缀合酶基因;4个为未知基因,分别命名为MjACP3-T、MjACP4一T、MjACPl5一T和MjACP4一O基因．采用实时定量PCR方法分析了4个未知基因在性腺发育过程的表达谱,结果表明：MjACP3一T、MjACP4．T和MjACPl5,T基因在日本囊对虾精巢和卵巢中的表达量有显著差异,且在各个时期精巢的表达量均高于卵巢,说明这3个基因可能在精巢的发育中起到某些重要作用．卵巢MjACP4一O基因的表达量变化较大,第5期卵巢的相对表达量达到最高（为1．38）,而其他各个阶段的变化较大,在第4期卵巢的相对表达量最低（为0．03）．在精巢中,MjACP4一O基因的表达量随着精巢逐渐发育成熟呈下降趋势．定量PCR结果与引物退火控制技术的结果有着很好的一致性．研究结果表明,引物退火控制技术是一种简单高效的克隆差异表达基因的技术．采用该技术所克隆到的8个精巢、卵巢的差异表达基因,为进一步了解日本囊对虾性腺发育分化的分子机制提供了基础材料．     

五种经济海水鱼类的染色体研究

采用PHA体内注射──空气干燥制片法初步研究了5种海水鱼类的染色体。核型公式分别为鲻鱼、鲈鱼和黄姑鱼2n＝48t，NF＝48，其中鲻鱼的t1染色体、鲈鱼的t12染色体及黄姑鱼的t3染色体均为具明显次缢痕染色体，矛尾复虎鱼2n＝44，2m＋42st、t，NF＝46，其t18染色体为具次缢痕染色体；绿鳍马面2n＝40t，NF＝40，其中t14染色体具次缢痕。     

不同组分底质改良剂对刺参生长和底质环境的影响

以过硫酸氢钾、沸石粉和膨润土为主要成分,分别添加0%(对照)、0.5%、1%、2%、4%和8%的过碳酰胺配成6种底质改良剂,分别标记为A、B、C、D、E和F,本实验研究了以上6种不同组分的底质改良剂对刺参生长和底质环境的影响。实验过程中,分别于第0、7、14、28、42和56天测定底泥氧化还原电位和营养盐变化,实验结束后测定刺参特定生长率。结果表明:E组底泥氧化还原电位最高,但与F组间无显著差异(P>0.05);底泥中NO_3--N含量同样在E组达到最大值,且与F组间差异不显著(P>0.05);底泥NH₄₊-N、NO_2--N、和TN含量均在D组达到最小值,但与E组和F组间无显著差异(P>0.05);D组刺参特定生长率最高,但与E组和F组间无显著差异(P>0.05)。综上所述,底质改良剂中添加过碳酰胺能够显著改善底质环境,以特定生长率为评价指标,当添加量为4.8%时最利于刺参的生长。     

日本对虾的营养需求

总结了近年来国内外关于日本对虾(Penaeus japonicus)的营养学研究成果，从蛋白质、氨基酸、脂类、维生素、矿质元素、外源激素及环境因子等方面论述了日本对虾的营养学研究现状，为今后的日本对虾养殖提供依据。     

几种卤素类消毒剂对刺参幼参的急性毒性作用

在水温18.5~20℃的静水条件下,用4种卤素类消毒剂对刺参幼参进行了急性毒性试验。结果表明,三氯异氰尿酸(trichloroisocyanuric acid,简称TCCA)对刺参幼参的24 h LC50、48 h LC50和安全质量浓度(Cs)分别为33.22、25.32、4.41 mg/L,二溴海因(dibromo dimethyl hydantoin,简称DBDMH)的24 h LC50、48 h LC50和Cs分别为371.17、339.65、85.32 mg/L,聚维酮碘(povidone-iodine,简称PVP-I)的24 h LC50、48 h LC50和Cs分别为3.14、1.450、.09 mg/L,季铵盐络合碘(quaternary ammonium salt-iodine,简称QASI)的24 h LC50、48 h LC50和Cs分别为4.24、2.02、0.14 mg/L。研究表明,4种消毒剂对幼参的毒性大小依次为聚维酮碘>季铵盐络合碘>三氯异氰尿酸>二溴海因。     

刺参体腔细胞的电镜制样技术研究

设计2种不同的固定方法,比较2种固定方法在刺参体腔细胞的扫描电镜制样和透射电镜制样中固定效果的优劣.选择能使体腔细胞充分分散的固定方法用于扫描电镜制样;而将能使体腔细胞凝聚成团的固定方法用于透射电镜制样.获得了令人满意的体腔细胞扫描和透射电镜照片.以多聚赖氨酸法、明胶法和聚乙烯醇缩甲醛法收集、黏附固定后的体腔细胞,实验结果显示：3种方法均可起到黏附体腔细胞的作用,通过探讨玻片黏附体腔细胞的有效方法,建立适用于海产无脊椎动物体腔细胞、血细胞、生殖细胞和原生动物、细菌等样品的扫描电镜制样方法.     

Individual Variation in Growth in Sea Cucumber Apostichopus japonicus （Selenck） Housed Individually

The exceptionally large individual growth variation has been previously recognized in several sea cucumber cohorts. However, there is a lack of information regarding the mechanism of such individual differences. In this study, the sea cucumber Apostichopus japonicus(Selenka)was reared individually in order to eliminate possible effects of social interaction, stocking density, etc. The results showed that there were substantial differences in growth among the sea cucumber individuals during the 100-day experiment. The special growth rate of the sea cucumber individuals differed by up to three folds(from 0. 40% to 1.01%), and the coefficient of variation in body weight increased from 12. 04% to 40. 51%. The final wet body weight, food intake and food conversion efficiency for each sea cucumber were generally positively correlated with their initial wet body weight(P<0. 05). Energy budget of the animals showed that the food energy spent on respiration was much greater(about four folds)but energy deposited for growth was much less for(initially)smaller than for larger A. Japonicus. The present result implies that there are obvious genetic differences among the sea cucumber individuals, largely accounting for the individual growth variation of the cohort sea cucumber. These results will provide some basic data for promoting selective breeding and farming of the sea cucumber.     

Bacterial diversity of gut content in sea cucumber (Apostichopus japonicus) and its habitat surface sediment

This study investigated the bacterial diversity of gut content of sea cucumber(Apostichopus japonicus) and its habitat surface sediment in a bottom enhancement area using PCR-based denaturing gradient gel electrophoresis(DGGE) technique. Bacterial diversity evaluation showed that the value of the Shannon-Wiener index of gut content in different intestinal segments of A. japonicus varied between 2.88 and 3.00, lower than that of the surrounding sediment(3.23). Phylogenetic analysis showed that bacterial phylotypes in gut content and the surrounding sediment of A. japonicus were closely related to Proteobacteria includingγ-, α-, δ-and ε-proteobacteria, Bacteroidetes, Firmicute, and Actinobacteria, of which γ-proteobacteria were predominant. These results suggested that the sea cucumber A. japonicus was capable of feeding selectively, and PCR-DGGE was applicable for characterizing the bacterial community composition in gut content and the surrounding sediment of sea cucumber. Further investigation targeting longer 16S rDNA gene fragments and/or functional genes was recommended for obtaining more information of the diversity and function of bacterial community in the gut content of sea cucumber.     

养殖刺参腐皮综合征两种致病菌Dot-ELISA快速检测

以养殖刺参(Apostichopus japonicus)腐皮综合征两种主要致病原灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)为抗原,分别制备兔抗血清,建立了两种病原菌的点酶ELISA(Dot-ELISA)检测方法。根据方正试验,确定检测用一抗、二抗最佳工作稀释度:灿烂弧菌抗血清稀释度320,酶标二抗稀释度3 000;假交替单胞菌抗血清稀释度160,酶标二抗稀释度2 000。阻断试验结果表明两种抗血清特异性均较高。灿烂弧菌抗血清在稀释度为40时与溶藻胶弧菌、河流弧菌、创伤弧菌等弧菌发生微弱交叉反应,提高稀释度到160时,不发生交叉反应。假交替单胞菌抗血清基本不与常见海水致病弧菌发生交叉反应。人工感染试验检测结果表明该方法能从患病海参溃烂组织、未发病海参组织和感染水体检测到相应致病菌,检测灵敏度为9.4×103个/mL。人工感染试验检测结果经直接凝集反应验证。该方法操作简便、灵敏度高,不需复杂仪器设备,适合在基层推广。