条斑紫菜丝状孢子体cDNA文库构建及抗病相关基因鉴定

经过微量总 RNA抽提、c DNA合成、c DNA扩增和克隆等步骤 ,构建了微量条斑紫菜丝状孢子体 c DNA文库 ,并进行了小规模表达序列标签分析。从 1 70条标签序列中鉴定出 6条抗病相关基因序列。这些序列可用于研制抗病单核苷酸多态性标记 ,辅助紫菜抗性遗传改良。     

短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因的克隆和序列分析

采用RT-PER原理和长片段扩增技术克隆短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因。设计合成特异引物、提取血细胞总RNA，反转录后扩增获得的特异片段回收并克隆到pGEM-TEasyVector系统的T载体上，重组子进行碱基序列测定。结果表明，所克隆的短沟对虾酚氧化酶原基因含起始密码子A1B到终止密码子TGA的2055bp，编码684个氨基酸。斑节对虾酚氧化酶原基因含ATG到TGA的2061bp，编码686个氨基酸。短沟对虾酚氧化酶原推算分子量为78153Da，等电点pI为6．25；斑节对虾则为78581Da，pI为5．83，用DNA分析软件分析显示两种对虾酚氧化酶原基因具有高度的同源性，二者的碱基和推测的氨基酸序列同源性分别为93％和92％；对虾与其他节肢动物酚氧化酶原基因的同源性的高低与种类间亲缘关系相关；不同种类间酚氧化酶活性中心重要组成部分的2个铜结合位点、位于铜结合位点内的6个组氨酸以及与铜结合位点相邻的氨基酸序列高度保守。     

Construction of full length cDNA expression library of hepatopancreas of Penaeus monodon

mRNA was isolated from the hepatopancrease of shrimp Penaeus monodon with a PolyAT-tract System 1000 Kit. By using mRNA as template, double - strand cDNA with EcoR I/Xho I ends was synthesized by using a ZAP Express cDNA Synthesis Kit. The cDNA was inserted into the lambda ZAP Express vector predigested with EcoR I/Xho I, and the recombinant DNA was in vitro packaged into lambda phage with GigapackIII Gold packaging extracts. These recombinant phages were then used to transfect E. coli XL1 - Blue MRF', and finally a cDNA expression library was constructed. The library is 7.2 × 10~5 pfu in capacity and its recombination ratio is higher than 99 % . The size of the inserted cDNAs was determined by EcoR I/Xho I digestion of 9 phagemids prepared by in vivo excision of plaques selected randomly from amplified cDNA library . The longest inserted cDNA is about 1.6 kb in length. The complete sequence (about 1.2 kb) of actin cDNA was amplified from the library by PCR reveals that this library contains full-length     

皱纹盘鲍(Haliotis discushannai Ino)胚胎RNA分离和cDNA文库构建

从皱纹盘鲍胚胎样本中分离RNA并构建了cDNA文库。分别收集孵化8、10和12h的皱纹盘鲍胚胎,用抽滤除菌的海水反复悬浮胚胎,将这3个发育阶段的胚胎样本等量混合后用TRIZOL试剂提取总RNA,将提取物用酚氯仿异戊醇再抽提2次,分离获得高质量的总RNA。从总RNA中分离mRNA,构建了皱纹盘鲍混合胚胎的cDNA文库,未扩增胚胎文库的滴度为5.0×106pfu/ml,重组率为94.12%,插入片段均大于400bp,70.6%克隆的插入片段分布在1000—1500bp之间,扩增后的文库滴度为3.06×109pfu/ml。     

HDS技术在古建文物测量中的应用

一、引言HDS(High Definition Survey)技术是徕卡公司对地面3维激光扫描技术的重新定义。HDS技术包括硬件和软件两方面的内容。硬件主要是指以徕卡HDS ScanStation/HDS6000为代表的地面型3维激光扫描仪,硬件系统负责外业数据的采集和存储任务;软件系统有徕卡“赛克隆-Cyclone”模块化软件和CloudWorx插件,软件系统完成数据的管理、点云拼接、建模、制图和CAD系统的通讯协同等任务。HDS作为一种全新的3维激光测量技术,一经推出便引起了行业内的广泛关注。现在徕卡测量系统的HDS技术已经在国内成功地应用于工厂管道测量、船舶形体和容积测量、桥梁高速公路测量、事故现场调查测量、普通地形测量、文物及古建筑测量等领域。中国作为古建筑和文物资源大国,为HDS技术提供了广阔的应用空间,从近几年的工程实践来看,HDS技术作为一项全新的3维测量技术在国内的文物保护和古建筑测量方面已经取得了相当数量的成功应用案例。比如:故宫数字化测量、佛光寺保护方案制定、兵马俑2号坑考古现场记录、长城资源调查、乐山大佛保护性数字化存档等等,这些大型文化遗产的保护调查工作都采用HDS作为核心的测量技术来...     

四种植物生长激素对海带雌配子体克隆生长发育的影响

以海带（Ｌａｍｉｎａｒｉａｊａｐｏｎｉｃａ）雌配子体克隆ＬＨ１０品系为材料,用４种植物生长激素：三十烷醇（ＴＡ）、２,４－二氯苯氧乙酸（２,４－Ｄ）、吲哚乙酸（ＩＡＡ）和腐植酸钠加以处理,对其生长发育进行了研究。结果表明,它们的最佳生长浓度分别为：ＴＡ,０．０１ｍｇ／Ｌ;２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ;ＩＡＡ,０．５ｍｇ／Ｌ;腐植酸钠,０．５ｍｇ／Ｌ;最佳发育浓度分别为：ＴＡ,０．０１ｍｇ／Ｌ;２,４－Ｄ,１ｍｇ／Ｌ;ＩＡＡ,０．１ｍｇＬ－１;腐植酸钠,０．０５ｍｇ／Ｌ。该研究为加速配子体克隆的生长发育和育苗应用提供了实验依据     

Cloning of the cDNA encoding adenosine 5′-monophosphate deaminase 1 and its mRNA expression in Japanese flounder Paralichthys olivaceus

AMP deaminase catalyzes the conversion of AMP into IMP and ammonia. In the present study, a full-length cDNA of AMPD1 from skeletal muscle of Japanese flounder Paralichthys olivaceus was cloned and characterized. The 2 526 bp cDNA contains a 5’-UTR of 78 bp, a 3’-UTR of 237 bp and an open reading frame (ORF) of 2 211 bp, which encodes a protein of 736 amino acids. The predicted protein contains a highly conserved AMP deaminase motif (SLSTDDP) and an ATP-binding site sequence (EPLMEEYAIAAQVFK). Phylogenetic analysis showed that the AMPD1 and AMPD3 genes originate from the same branch, but are evolutionarily distant from the AMPD2 gene. RT-PCR showed that the flounder AMPD1 gene was expressed only in skeletal muscle. QRT-PCR analysis revealed a statistically significant 2.54 fold higher level of AMPD1 mRNA in adult muscle (750±40 g) compared with juvenile muscle (7.5±2 g) (P<0.05). HPLC analysis showed that the IMP content in adult muscle (3.35±0.21 mg/g) was also statistically significantly higher than in juvenile muscle (1.08±0.04 mg/g) (P<0.05). There is a direct relationship between the AMPD1 gene expression level and IMP content in the skeletal muscle of juvenile and adult flounders. These results may provide useful information for quality improvement and molecular breeding of aquatic animals.     

杭州湾底泥得克隆污染状况及来源的初步研究

随着含溴阻燃剂的进一步限用或禁用,氯代阻燃剂得克隆(Dechlorane Plus, DP)以其良好的热稳定性和电化学性能成为推荐的替代品之一。作为添加型氯代阻燃剂,DP很容易从产品中脱落而成为环境中广泛存在的污染物,但相关的研究仍十分匮乏。本研究测定了杭州湾海域4个底泥柱状样品中DP的残留及异构体特征,并对DP在该海域底泥中的时空分布和可能来源进行了初步分析。结果表明,syn-DP和anti-DP在底泥样品中的含量分别为BDL~17.7 pg/g干质量(平均为2.9±3.2 pg/g干质量)和1.4~38.1 pg/g 干质量(平均为8.0±8.5 pg/g干质量),其污染程度相对全球范围处于较低水平。空间分布表明金山工业区可能对杭州湾DP的污染有一定贡献,DP在柱状底泥中的垂直分布未发现明显变化趋势。本研究中DP的f_syn平均值为0.25~0.28,表明研究海域底泥中的DP可能来自于远距离传输。     

微泡菌QZHA1褐藻胶裂解酶MAAL1的酶学性质研究

为探究Microbulbifer sp. QZHA1褐藻胶裂解(Escherichia coli)酶MAAL1的酶学性质,将褐藻胶裂解酶基因maal1构建至pET-28a表达载体并利用大肠杆菌BL21(DE3)进行异源表达。研究发现：重组酶MAAL1与来源于Microbulbifer sp. ALW1菌株的褐藻胶裂解酶(WP＿23625014.1)同源性最高,为93.69%,且与PL7家族蛋白聚为一支;重组酶MAAL1最适温度为35℃,最适pH为7.5,在pH为5.5～10.5范围内保存24 h仍能保持60%以上的酶活力;MAAL1具备良好的耐有机溶剂特性,在测试的9种有机溶剂中,除异丙醇外,其他有机溶剂在添加量达到30%(体积分数)后,酶活力依然保持在59%以上;重组酶MAAL1最适条件下酶活力为4.3 U/mg,米氏常数(K_m)值为1.08 mg/mL,最大反应速率(V_max)为4.75 mg/(mL·min),催化常数(K_cat)值为4.52 s^-1;重组酶MAAL1对聚β-D-甘露糖醛酸(p...     

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)I 型Crustin抗菌肽的基因克隆与真核重组表达

Crustin 是目前报道广泛存在于甲壳类中的一类具有广谱抗菌活性的抗菌肽, 主要由甲壳类血淋巴细胞合成。本研究采用RACE 技术和真核表达技术, 进行了三疣梭子蟹Crustin 基因的克隆和重组表达研究。结果表明, 在三疣梭子蟹血细胞Crustin 基因cDNA 全序列中, 开放阅读框编码110个氨基酸残基的Crustin 前体, Crustin 前体由N 端21 个氨基酸残基的信号肽、富含Cys 结构域和C端WAP 结构域三部分组成, 属于I 型Crustin, 构建的分泌型真核表达质粒pVT102U/α-crustin 转化酿酒酵母S78, 经RT-PCR 和SDS-PAGE 电泳验证, 表明重组Crustin 表达成功。