大黄鱼EBI3基因的克隆与表达分析

通过克隆大黄鱼(Larimichthys crocea)的EBI3(Epstein-Barr virus-induced gene 3)基因并对其进行了序列分析.大黄鱼EBI3(Lyc EBI3)基因开放阅读框长747bp,编码248个氨基酸,存在1个信号肽序列和2个FN3结构域(37~130,145~230).多序列比对发现Lyc EBI3分子与其他已知EBI3氨基酸水平一致性为27.68%~57.53%.Real-time PCR结果表明,Lyc EBI3基因在脾脏和血液中表达量最高,且溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)刺激后,大黄鱼头肾和脾脏中Lyc EBI3基因的转录水平会显著升高,说明Lyc EBI3基因可能参与了抑制由细菌引起的炎症反应.     

墨吉明对虾c型溶菌酶基因的克隆及表达

克隆并鉴定墨吉明对虾(Fenneropenaeus merguiensis)的一种c型溶菌酶基因(Fm-Lyz),其cDNA全长为770 bp,包括71 bp的5′非编码区(UTR)、222 bp的3′UTR和477 bp完整开放阅读框,编码158个氨基酸。SMART分析显示,Fm-Lyz氨基酸序列包含1个LYZ1结构域和1个含18个氨基酸的信号肽。同源性分析发现,Fm-Lyz与斑节对虾(Penaeus monodon)溶菌酶同源性最高;进化树结果显示,Fm-Lyz与不同对虾的c型溶菌酶聚为一类。实时荧光定量PCR结果显示,Fm-Lyz在所测组织中均有表达,其中在血细胞中表达量最高。副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)感染后,Fm-Lyz表达量比对照组明显上调(P0.05),最高表达量时间分别为感染后24、12 h,暗示Fm-Lyz参与了墨吉明对虾的抗菌免疫防御。     

Construction of a muscle cDNA library of Chinese shrimp <Emphasis Type="Italic">Fenneropenaeus chinensis</Emphasis> and sequence analysis of the troponin I gene

A muscle cDNA library of Chinese shrimp (Fenneropenaeus chinensis) was constructed with the SMART™ cDNA Library Construction Kit. The titer of optimal primary library was 7.7×10⁵ pfu mL⁻¹ and that of the amplified library was 3.0×10⁹ pfu mL⁻¹. The percentages of the recombinant clones of primary and amplified libraries were over 98%. The insert sizes were longer than 400 bp with an average of 1000 bp. A positive clone containing a 794 bp insert was sequenced and identified encoding fast skeletal troponin I gene. This library provided a useful resource for the functional genomic research of F. chinensis.     

虚拟技术在地震前兆技术系统中的应用

地震前兆技术系统长期稳定和可靠运行对管理人员来说至关重要,本文以山西前兆台网为例,基于VMware虚拟机搭建了地震前兆技术系统,并利用其快闪及克隆功能实现了地震前兆技术系统的快速备份及恢复,提升了地震前兆技术系统故障应急处置能力。     

三十烷醇对海带三个品系雌配子体克隆生长和发育的影响

以海带雌配子休克隆为实验材料,通过施用三十烷醇处理。结果表明,三个品系在供试条件下,LH36生长最好,LH30发育率最高。它们对TA的反应为浓度在0．5～1．0×10-5mg／L时,都有促生长作用,其中LH30反应最敏感,LH10次之。浓度在1．0×10-5mg／L时,发育率最高,其中LH30发育率为51．5％,LH10为18．0％。LH36对各浓度处理的发育反应,差异都不明显。     

链霉菌FR—008大线性质粒PHZ227末端的克隆

采用中性溶菌结合超速离心的方法,从链霉菌ＦＲ－００８中直接提取了完整的１３０ｋｂ的大一质粒ＰＨＺ２２７,经蛋白酶Ｋ和限制性内切酶处理后,进行强迫克隆,生内切酶酶解和杂交实验证实已克隆到大线性质粒ＰＨＺ２２７的末端。     

基因组研究的关键平台———大片段文库

大片段基因组文库由于其较大的容量、遗传的稳定性和易操作性等特点而被广泛应用于人类、动植物和微生物的基因组研究中,在物理图谱构建、全基因组测序、基因图位克隆、基因结构功能和进化等研究中起到了重要作用.近年来新技术、新设备的发明和应用使得克隆载体的结构不断优化,稳定性和转化效率显著提高,大片段文库逐渐成为基因组研究的关键平台.     

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(福建株)基因组的克隆

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)是世界各地养殖和野生对虾的重要病原之一.目前,GenBank已收录了分离自夏威夷、加利福尼亚、泰国、中国台湾等地的IHHNV全长或部分基因组序列.虽然中国大陆在养殖对虾中也普遍检测到了IHHNV,但未见其基因组序列报道.本文首先利用DNA末端加尾和嵌套PCR克隆了IHHNV基因组两末端序列,并根据测定的末端序列设计引物,PCR扩增出中国福建株IHHNV基因组序列.     

凡纳滨对虾G蛋白Gαq基因的克隆和功能鉴定

为了寻找并克隆凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)G蛋白α亚基,为研究对虾的生理调控提供理论基础,通过简并PCR和RACE反应获得目的基因的全长cDNA序列;用Blast, DNAstar和Genedoc软件对所得序列进行分析,确定所得序列为凡纳滨对虾G蛋白Gαq基因,命名为pvGαq.将该基因的编码序列克隆到表达载体,通过免疫共沉淀实验和胞内Ca2 , IP3浓度的测定鉴定该Gαq亚基的功能,发现该亚基的序列和功能与其他Gαq家族成员具有高度保守性.用Western blotting分析发现pvGαq在对虾身体各部位存在普遍分布,尤其在脑神经、眼柄、腮和颚片中有大量表达,在嗅觉器官触角也有适量分布.说明了pvGαq在对虾生命活动中的重要性,为研究对虾的生理调控奠定了理论基础.     

对虾血淋巴脂蛋白的生化特征及分子克隆研究进展

脂类是海洋无脊椎动物包括对虾能量的主要来源,脂类在其生长发育的很多重要过程中起作用,如蜕皮和繁殖。虾蟹及鱼类优先使用脂类作为能源,因此,它们的血淋巴脂蛋白水平较高。脂蛋白是对虾体内一种重要的蛋白质,其主要作用是：参与组织或细胞间脂类的运输和重分配;参与免疫防御反应过程;能与细胞膜上的特异受体结合,影响脂类摄取。