印尼热泉中产嗜热碱性蛋白酶菌株筛选及酶学性质研究

采用MSM寡营养培养基从印度尼西亚Pantai cermin,Kalianda和Banyuwedang三个地区的热泉水样、泥样以及沉积物样品中分离获得细菌菌株,通过检测蛋白酶产生透明圈和福林酚蛋白酶活性测定相结合的方法,从中筛选出1株产嗜热蛋白酶的菌株PBI,该菌株经初步鉴定为短杆菌属(Brevibacillus),并对其酶学性质进行了研究。结果表明,菌株PBI产蛋白酶的最适酶活温度为60℃,最适pH值为8.0～9.0,具有较好的热稳定性和pH稳定性,60℃时酶的半衰期为30min,70℃条件下20min仍保持46.1%的酶活,该酶在pH值为5.0～9.0范围的缓冲液中酶活相对稳定。其产嗜热蛋白酶的酶活力最高可达到60.53U/mL,在100℃条件下仍能保留26.37%的相对酶活。Fe2+,Fe3+,Cu2+和Zn2+对嗜热蛋白酶活性具有明显的抑制作用。该嗜热蛋白酶对EDTA敏感,苯甲基磺酰氟(PMSF)、亮抑酶肽(Leupeptin)、苄眯(Benzamidine)和胃蛋白酶抑制剂(Pepstain A)对该嗜热蛋白酶都有一定的抑制作用,说明其酶活性受到丝氨酸、半胱氨酸残基的影响。结果表明,该菌株是1株具有进一步改造利用价值的产蛋白酶菌株。     

金雀异黄素对金鱼消化酶活性的影响

本文研究了0.2、2、20μg/g金雀异黄素腹腔注射金鱼(Carassius auratus) 7d后,金鱼肝胰脏和肠蛋白酶、淀粉酶和碱性磷酸酶活性的变化.结果表明:随金雀异黄素浓度的升高,金鱼肝胰脏和肠蛋白酶、淀粉酶及肠碱性磷酸酶活性都有所降低.0.2μg/g金雀异黄素处理组,金鱼蛋白酶和淀粉酶活力降低并不显著,而肠碱性磷酸酶活力显著下降(P＜0.05);2μg/g金雀异黄素处理组,金鱼蛋白酶和淀粉酶活力显著下降,碱性磷酸酶活力表现极显著下降(P＜0.01),仅为对照组的44％;20μg/g金雀异黄素处理组,金鱼蛋白酶和淀粉酶活力极显著下降,其中肠蛋白酶活性降了90％以上.本文证实了较高浓度的金雀异黄素能显著降低金鱼主要消化酶的活性,进而影响金鱼正常生长,但较低浓度的金雀异黄素对金鱼消化酶无显著影响.研究结果为大豆蛋白在水产养殖中的适量应用提供了参考数据.     

Optimum production and characterization of an acid protease from marine yeast <Emphasis Type="Italic">Metschnikowia reukaufii</Emphasis> W6b

The marine yeast strain W6b isolated from sediment of the South China Sea was found to produce a cell-bound acid protease. The crude acid protease produced by this marine yeast showed the highest activity at pH 3.5 and 40 °C. The optimal pH and temperature for the crude acid protease were in agreement with those for acid protease produced by the terrestrial yeasts. The optimal medium of the acid protease production was seawater containing 1.0% glucose, 1.5% casein, and 0.5% yeast extract, and the optimal cultivation conditions of the acid protease production were pH 4.0, a temperature of 25 °C and a shaking speed of 140 rmin⁻¹. Under the optimal conditions, 72.5 UmL⁻¹ of acid protease activity could be obtained in cell suspension within 48 h of fermentation at shake flask level. The acid protease production was induced by high-molecular-weight nitrogen sources and repressed by low-molecular-weight nitrogen sources. Skimmed-milk-clotting test showed that the crude acid protease from the cell suspension of the yeast W6b had high skimmed milk coagulability. The acid protease produced by M. reukaufii W6b may have highly potential applications in cheese, food and fermentation industries.     

温度和pH值对广西泥蚶蛋白酶活性的影响

应用751-GW分光光度计比色法测定了广西自然种群泥蚶蛋白酶活性与pH值和温度的关系,所有数据都检验其正态性和方差同质性,并用Statistica软件包分析处理,得到如下主要结果:在温度为40℃的条件下,最适pH值为2.6和4.6,两者对应的蛋白酶活力分别为(0.68±0.03)u/g和(0.59±0.03)u/g,pH值为6.6以后的酶活力迅速减弱且变化趋缓;在pH值为6.6的条件下,随着温度(4～38℃)升高酶活力逐渐增强,最适温度为38℃,其对应的酶活力为(0.40±0.01)u/g,38℃以后酶活力逐渐减弱。这些结果表明,不同pH值和不同温度的蛋白酶活力经单因素方差分析均差异显著。广西自然种群泥蚶蛋白酶与皱纹盘鲍最适pH值的对比分析表明,该泥蚶存在胃蛋白酶。     

生物采油解堵剂中产蛋白酶菌株的筛选及培养条件优化

为研究生物酶采油解堵剂中产蛋白酶菌株的初、复筛选及培养条件优化,从大庆原油样品中筛选菌种,通过水解酪素的透明圈实验及福林酚测蛋白酶酶活的方法进行菌株的初、复筛选;以蛋白酶酶活为优化指标,采用单因素实验对筛选的产蛋白酶菌株的培养基及培养条件进行优化,优化最适培养基:可溶性淀粉为15g/L,蛋白胨为20g/L,酵母膏为20g/L,NaCl为1.0g/L,CaCl2为0.02g/L,Na2HPO4为0.2g/L,NaH2PO4为0.1g/L;在初始pH为6.0、接种量为5%(体积分数)、温度为31℃、摇床转速为160r/min的条件下,培养72h后,菌株的蛋白酶酶活为551.0U/mL,为复筛选菌株的蛋白酶酶活的22.92倍,即为菌株生长繁殖及代谢的最佳条件,能够获得更高的蛋白酶酶活,有利于后续实验的进行.结果表明:菌株产蛋白酶对原油作用效果为发酵液表面张力从作用前的56.2mN/m降低到作用后的30.5mN/m,表面张力显著降低,还有降解降黏原油等效果,具有一定的研究价值.     

温度、pH和金属离子对仿刺参蛋白酶活力影响的研究

利用分光光度计比色法测定了温度、pH值和Hg2 等9种金属离子对体长24.2cm±0.7cm仿刺参(Apostichopusjaponicus)消化道中蛋白酶活性的影响。结果表明,蛋白酶的最适温度为40℃,对热不稳定,最适pH为7.2。Hg2 ,Mn2 ,Ag ,Pb2 ,Ba2 ,Ca2 对蛋白酶的活性有抑制作用,抑制作用由强至弱依次为Hg2 >Ag >Mn2 >Pb2 >Ca2 >Ba2 ,其中Hg2 和Ag 与对照差异极显著(P﹤0.01),表现出极强的抑制作用;Cu2 ,Zn2 ,Mg2 则对酶活有一定的促进作用,其促进作用大小依次为Mg2 >Zn2 >Cu2 ,Mg2 与对照差异显著(P﹤0.05)。     

常压室温等离子体技术诱变选育鲅鱼抗氧化肽发酵菌株

鲅鱼(Spanish mackerel)加工后的废弃物富含蛋白质,为了提高蛋白质的利用率并减少环境污染,可以采用微生物发酵的方法酶解这部分蛋白质制取抗氧化活性肽。本实验室已经筛选出一株芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Hy-2,以其发酵水产加工废弃物得到了具有较高抗氧化性的产物。为了进一步提高产物的抗氧化性,作者以该株产蛋白酶芽孢杆菌Hy-2为出发菌,采用常压室温等离子体(ARTP)诱变的方法筛选出1株突变菌Hy-23,以鲅鱼加工后的废弃物为原料,接种该突变菌株进行发酵,得到了具有一定抗氧化活性的发酵产物,酶解物总抗氧化活性提高了12.4%。经遗传稳定性测定,该芽孢杆菌突变株在传代8次之后其遗传稳定性仍然良好。     

米曲霉中性蛋白酶特性的研究

研究了米曲霉中性蛋白酶的特性。结果表明,米曲霉中性蛋白酶的最佳提取方法为加入pH 7.2的缓冲液研匀,置恒温(30℃)培养箱中提取30 min,每10 min搅动1次,最后用4层纱布过滤。酶反应最适温度为55℃,最适pH值为7.2。NaCl和EDTA对其有一定的抑制作用。酶的热稳定性好,在45℃的温度下处理24 h后,酶活力仍有45.5%。米曲霉中性蛋白酶与培养物一起保存时,稳定性也较好,在4℃保存一个月后,酶活力几乎无变化。     

饥饿和再投喂对尼罗罗非鱼蛋白酶活性的影响

测定了饥饿和再投喂的尼罗罗非鱼胃、肠、肝胰脏蛋白酶活性。结果表明:(1)尼罗罗非鱼蛋白酶的活性以胃为最高,肠为最低,且胃蛋白酶的活性极显著高于肠、肝胰脏(P<0.01),肠和肝胰脏之间差异不显著(P>0.05);(2)饥饿后,蛋白酶活性呈降低的趋势,饥饿处理25d后,胃、肠、肝胰脏的蛋白酶活力分别降低到饥饿处理前的42.7%、41.0%、61.5%,均与对照组差异极显著(P<0.01);(3)再投喂后,饥俄15d以内的鱼蛋白酶活性上升迅速,经过15d恢复投喂,基本上就恢复到了正常水平,且消化酶活性甚至高于一直投喂对照组,而饥饿20、25d的鱼蛋白酶活性虽缓慢上升,但仍无法恢复到正常水平,与对照组差异显著(P<0.05)。