Effect of temperature on gene expression in the pearl oyster Pinctada fucata

In this study, we examined the effect of elevated temperature on the expression patterns of genes, i.e., nacrein, irr, n16, n19, and hsp70 in the pearl oyster Pinctada fucata. The experiment was carried out at 4 temperatures, i.e., 20℃(ambient, control), 24, 28℃, and 32℃. The expression levels of target genes in P. fucata were assayed at 0, 6, 24, 48, and 96 h via real-time polymerase chain reaction. Results showed that the expression levels of nacrein and irr had no significant variations among different time points below 28℃, but significantly increased over time at 32℃. The expression levels of n16 and n19 did not change markedly at 20℃. The former increased significantly at 6 h and 24 h while the latter substantially decreased during 6–96 h at 24, 28 and 32℃. Among different temperatures, the level of n16 was significantly lower at 20℃ than at other temperatures during 6–96 h, and the level of n19 significantly varied among different temperatures at 48 h and 96 h. The expression level of hsp70 was significantly higher at 32℃ than at 20, 24 and 28℃ at 24 h. These results demonstrated that elevated temperature impacted the physiological processes of P. fucata and potentially influenced its adaptability to thermal stress.     

罗非鱼源无乳链球菌（Streptococcusagalactiae）Sip基因的克隆、鉴定及分子特性分析

利用设计的特异性引物,扩增出了分离自患病罗非鱼无乳链球菌强毒株Sip基因,并将其克隆到pMD19-T载体上,之后对重组质粒进行了PCR和双酶切（BamHⅠ＋HindⅢ）鉴定,并利用多种生物信息学软件对Sip基因进行分子特性分析。结果显示,罗非鱼源无乳链球菌Sip编码氨基酸序列具有极高保守性,与人源、哺乳动物源无乳链球菌...     

杜氏盐藻磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的克隆和分析

为研究杜氏盐藻（Dunaliella salina）磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC）基因的功能, 根据莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）、拟南芥（Arabidopsis thaliana）、花生（Arachis hypogae...     

中国15种海参的分子系统发育和骨片演化的分析

基于线粒体16S rRNA基因部分序列,对我国15种海参的分子系统发育进行了分析.结果表明,片段长度约为570bp,A+T的平均含量为54.7％.15种海参的遗传距离在0.041（花刺参与糙剌参）至0.327(红腹海参与花刺参)之间,不同海参种类间的遗传距离差别很大.NJ和MP聚类分析方法一致,符合传统的形态学分类结果...     

利用引物退火控制技术克隆日本囊对虾性腺差异表达基因

为了解日本囊对虾（Marsupenaeusjaponicus）性腺发育及分化的分子机制,本研究采用改良的引物退火控制技术克隆到了共8个精巢、卵巢的差异表达基因．其中4个为已知基因,分别为凝血酶敏感蛋白基因、皮质棒蛋白基因、增殖细胞核抗原基因和泛素缀合酶基因;4个为未知基因,分别命名为MjACP3-T、MjACP4一T、MjACPl5一T和MjACP4一O基因．采用实时定量PCR方法分析了4个未知基因在性腺发育过程的表达谱,结果表明：MjACP3一T、MjACP4．T和MjACPl5,T基因在日本囊对虾精巢和卵巢中的表达量有显著差异,且在各个时期精巢的表达量均高于卵巢,说明这3个基因可能在精巢的发育中起到某些重要作用．卵巢MjACP4一O基因的表达量变化较大,第5期卵巢的相对表达量达到最高（为1．38）,而其他各个阶段的变化较大,在第4期卵巢的相对表达量最低（为0．03）．在精巢中,MjACP4一O基因的表达量随着精巢逐渐发育成熟呈下降趋势．定量PCR结果与引物退火控制技术的结果有着很好的一致性．研究结果表明,引物退火控制技术是一种简单高效的克隆差异表达基因的技术．采用该技术所克隆到的8个精巢、卵巢的差异表达基因,为进一步了解日本囊对虾性腺发育分化的分子机制提供了基础材料．     

起始pH值对海洋混合菌群产氢量的影响

对采自天津潮间带的污泥进行热休克处理,厌氧条件下富集混合菌群进行产氢试验;设置起始pH从4．0到8．0（间隔0．5个单位）,比较混合菌群在不同pH培养条件下产氢量;利用变性梯度凝胶电泳（DGGE）分析不同起始pH培养条件下的混合菌群组成。结果表明,在起始pH为7．0时,混合菌群产氢量最高。不同起始pH对产氢量的影响,依...     

军曹鱼（Rachycentron canadum）生长激素基因cDNA的克隆和原核表达

运用同源克隆方法,从军曹鱼脑垂体中分离了生长激素基因（GH）的全长cDNA。结果表明,该基因cDNA全长862bp,含615bp的开放阅读框（ORF）,编码204个氨基酸;其中包括22个氨基酸的信号肽和182个氨基酸的成熟肽。采用T-A克隆构建pMD18-T-CoGH重组质粒,测序正确后经Nde I和Xho I双酶切获...     

注射黄芪多糖对吉富罗非鱼c型溶菌酶基因表达量的影响

将黄芪多糖(APS)用无菌生理盐水配制成2 mg/mL和20 mg/mL针剂,腹腔注射吉富罗非鱼,以注射无菌生理盐水为对照。24 h后分别提取吉富罗非鱼鳃、头肾、肝脏、脾脏等组织中的总RNA并反转录成cDNA,利用Real-time PCR方法对不同组织中基因表达进行定量分析。结果表明:吉富罗非鱼腹腔注射20 mg/mL高剂量APS后,其鳃、头肾、肝脏等三个组织中的Lysozyme-c基因表达量显著高于对照组(P<0.05);注射2 mg/mL低剂量APS后,Lysozyme-c基因表达量仅在脾脏中出现显著上调(P<0.05)。APS可通过诱导Lysozyme-c基因在鳃、头肾、肝脏和脾脏等组织在的表达量,来提高吉富罗非鱼的机体免疫力。     

猪传染性胃肠炎病毒S、N基因核酸疫苗的构建与免疫原性试验

采用RT—PCR扩增TGEVSCH株S基因5’端主要抗原位点编码区和全长N基因,将其插入真核表达载体pVAXl,构建单独与嵌合表达S、N基因的pVAX—S、pVAX—N、pVAX—S—N3种重组质粒。通过脂质体将重组质粒体外转染COS-7细胞,利用间接免疫荧光检测目的基因的表达情况。将6周龄NIH小鼠随机分为5组,分别于腿部肌肉注射重组质粒pVAX、pVAX—S、pVAXS-N、pVAX—S＋pVAX—N与pVAX—S＋pVAX,共免疫3次,间隔2周。通过间接EI。IsA以及流式细胞仪分别检测免疫小鼠血清中特异性TGEVIgG抗体和外周血T淋巴细胞亚群数量。结果显示,重组质粒构建正确且在COS-7细胞中得以表达;pVAX—S＋pVAX—N质粒混合免疫组与pVAX—s＋pVAx质粒混合免疫对照组相比,可有效提高免疫小鼠外周血T淋巴细胞亚群数量和血清中特异性抗体水平的增加,而pVAX—S-N免疫组与pVAX—S组比较,未能起到提高免疫小鼠血清中特异性抗体水平的和外周血T淋巴细胞亚群数量作用。以上结果表明S、N基因的联合应用可有效加强TGEV核酸疫苗的免疫效力,但这种增强作用与S、N基因联合应用的方式直接相关。