Intraspecific diversity of Aureobasidium pullulans strains from different marine environments

Totally more than 500 yeast strains were isolated from seawater, sea sediments, mud of sea salterns, marine fish guts and marine algae. The results of routine and molecular biology identification methods show that nine strains among these marine yeasts belong to Aureobasidium pullulans, although the morphologies of their colonies are very different. The marine yeasts isolated from different marine environments indicate that A. pullulans is widely distributed in different environmental conditions. These Aureobasidium pullulans strains include A. pullulans 4#2, A. pullulans N13d, A. pullulans HN3-11, A. pullulans HN2-3, A. pullulans JHSc, A. pullulans HN4.7, A. pullulans HN5.3, A. pullulans HN6.2 and A. pullulans W13a. A. pullulans 4#2 could produce cellulase and single cell protein. A. pullulans N13d could produce protease, lipase, amylase and cellulase. Both A. pullulans HN3-11 and A. pullulans HN2-3 were able to produce protease, lipase and cellulase. A. pullulans JHSc could secrete cellulase and killer toxin. Both A. pullulans HN4.7 and A. pullulans HN5.3 could yield lipase and cellulase. A. pullulans W13a was able to secrete extracellular amylase and cellulase while A. pullulans HN4.7 and A. pullulans N13d could produce siderophores. This means that different A. pullulans strains from different marine environments have different physiological characteristics, which may be applied in many different biotechnological industries.     

一株源自海绵的α-葡萄糖苷酶抑制活性菌的鉴定、培养条件优化及活性物质的分离

为从海洋微生物中获取天然α-葡萄糖苷酶抑制活性(α-glucosidase inhibiting,α-GI)化合物,对一株前期研究发现具有α-GI活性的细菌进行鉴定和培养条件优化,并对其代谢产物进行分离,获取和鉴定其活性化合物。通过形态学观察和16S r DNA测序鉴定活性菌株HY95为波茨坦短芽孢杆菌(Brevibacillus borstelensis);采用分析单因素和正交试验选取菌株的最佳培养条件为:2.5%(V/V)的接种量,130 r/min的摇床转速,28℃恒温培养60 h。经优化后的MB培养基中:蛋白胨5.00 g/L,酵母粉1.50g/L、氯化钠9.725 g/L,pH 7.5;以生物活性测试为导向,用化学方法(薄层色谱、高效液相色谱)对其中的活性组分进行分离纯化,并经核磁共振氢谱分析确定得到一个α-GI活性化合为环(苯丙氨酸-酪氨酸),其对α-葡萄糖苷酶的抑制率为53.72%±4.92%。为α-GI活性化合物的筛选提供了一个极有开发前景的途径和来源。     

高产赤霉素菌株选育

针对赤霉素工业生产菌株皆为多核多细胞菌丝型,不产生孢子的特性,首先将赤霉素菌丝体通过酶解手段,溶去其细胞壁使其成为单一细胞游离的原生质体,并在此基础上通过紫外线等理化诱变,使其产生基因突变,然后在再生平板上,使赤霉素原生质体中的突变型菌株得到再生,最后通过摇瓶筛选,得到一株生产水平高、生产性能稳定的高产赤霉素菌株。     

泥螺抗菌肽的初步研究

将一定浓度的大肠杆菌注射于泥螺体内18h后，将其粘液和血淋巴，于95℃加热10min，10000r／min，4℃离心20min，所得上清液用截留分子量为3kD的超滤装置于10000r／min，4℃下离心1h．滤液用Sephadex G-50分离，得到两个吸收峰．以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作为试验菌株检测抑菌活性，结果表明泥螺经大肠杆菌诱导后，在其血淋巴和分泌的粘液中可分离得到抗菌肽，此多肽具有分子量较小，热稳定性好，对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌均能够起到抑制作用的特点．     

几种抗生素对褐藻酸降解菌No．20菌株的抑菌作用及其对海带育苗防病应用的初步研究

多年来，在海带人工育苗过程中时常出现烂苗或掉苗现象，给海带育苗和供苗工作造成严重威胁。引起海带幼苗脱落和腐烂的原因是多方面的，但是微生物的作用是重要的因素之一，褐藻酸降解细菌是海带的重要致病因子。     

海绵共附生微生物中具有α-葡萄糖苷酶抑制活性菌株的筛选与初步鉴定

通过建立α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型,对美国圣璜岛海域海绵共附生微生物发酵产物进行活性筛选.其中,α-葡萄糖苷酶活性测试反应体系是在96孔酶标板中进行,在α-葡萄糖苷酶浓度为0.008 U/cm3,pH值为6.8,反应温度为37℃及测定生成物波长为405 nm的基础上,优化筛选模型.结果表明,模型的最佳筛选条件:底物PNPG的浓度为10 mmol/dm3、活性测试反应时间为25min,样品溶剂DMSO含量为2%(V/V).以α-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖作为阳性对照样品,根据优化后的抑制活性筛选模型对212株海绵共附生微生物的粗提物样品进行筛选.结果表明:19株微生物的粗提物抑制率大于50%;其中,抑制活性最高的5株菌株的粗提物,在浓度为0.4、0.6、0.8 mg/cm3时,其抑制活性均在70%以上,远远高于阿卡波糖的最高抑制率58%(1.6 mg/cm3).其中菌株HY936粗提物浓度在0.4 mg/cm3时,仍具有很高的α-葡萄糖苷酶抑制率79.3%.通过16SrDNA序列测定与分析,鉴定该菌株为坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus).坚强芽孢杆菌代谢产物能显著抑制α-葡萄糖苷酶活性,这为研制新型α-葡萄糖苷酶抑制剂提供了有力的线索,对坚强芽孢杆菌有待作进一步的研究.     

石油脱硫微生物菌株的筛选及鉴定的研究

从胜利油田和冀东油田采集被石油污染的土壤样品,经富集技术培养后,从中分离出21株脱硫菌,再从中筛选出一高效脱硫菌株TV9704。这一菌株不能以正十二烷、正十六烷、液体石蜡、萘和柴油为碳源和能源生长,因此不会明显地损失石油的燃烧值;但它能利用噻吩或二苯并噻吩(DBT)作为唯一硫源来生长。本实验中噻吩和DBT的浓度使用UV分光光度计测定。菌株TV9704在噻吩起始浓度为63.2mmol/L的培养基中分别培养48h和144h后,它对噻吩的降解率分别为39.0%、63.8%;在DBT起始浓度为2.7mmol/L的培养基中培养72h,DBT降解了1.46mmol/L。选择醋酸钠和甘油为碳源时,乙醇能显著提高TV9704对DBT的降解率。菌株TV9704经中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)鉴定为芽孢杆菌(Bacillussp),革兰氏阳性,专性好氧,在营养肉汁平板上形成橙黄色的圆形菌落。对菌株TV9704所作16SrDNA基因序列测定和分析显示,它与最相似种Bacillus aquimaris,Bacillus marisflavi的同源性分别为99.2%和98.2%,但它们之间的细胞形态特征及生理生化特性相差较大,因此无法鉴定到种。菌株TV9704可能是一个新种。     

低温β-半乳糖苷酶产生菌的筛选、鉴定、生长特性及酶学性质的初步研究

自北冰洋楚科奇海、加拿大海盆、格陵兰海和中国南极中山站近岸的海水、海冰和沉积物样品中分离的322株低温细菌中筛选出73株低温β-半乳糖苷酶产生菌,并对其中1株BCw006进行了研究。通过16S rDNA序列同源性分析表明,该菌株属于交替单胞菌属,定名为Alteromonas sp.BCw006。对该菌株研究表明:该菌最适生长和产酶温度为24℃;在pH6.0—8.0、含0%—6.O% NaCl的培养基条件下菌株能够较好地生长与产酶,其最适生长和产酶NaCl浓度分别为3%和1%,乳糖对β-半乳糖苷酶合成具有明显诱导作用,酵母粉和蛋白胨是菌株生长和产酶较适宜的氮源,酶的最适作用温度为35℃,0℃时能保持35℃下酶活的25%左右,表明其具有较好的适应低温特性。酶对热敏感,60℃时作用30min后酶活力下降了41%。