一种水产动物病毒现场检测免疫芯片的制备与应用

采用原子力显微镜对氨基化玻片及6种不同方法修饰玻片进行表面特征分析,并比较了硝酸纤维素(NC)膜、PVDF膜以及以上不同修饰玻片对抗体的固定效率、固定效果,最终选择琼脂糖修饰玻片作为芯片载体。将纯化后的兔抗血清(捕获抗体)点样至琼脂糖修饰玻片上,制备免疫芯片,与待检样品(病毒感染的靶器官组织)匀浆液孵育形成复合物,该复合物被辣根过氧化物酶(HRP)标记的特异性单克隆抗体(单抗)识别,经底物显色,得到肉眼可见的检测结果。通过改变芯片制备及应用过程中的具体条件参数,对各条件进行了优化,并采用生物素-链亲和素(BAS)标记特异性单抗作为检测抗体以提高检测灵敏度。基于此夹心免疫分析原理制备的WSSV、LCDV现场检测免疫芯片,病毒的最低检出量分别为82.50ng/ml、0.88μg/ml,在一定的抗原浓度范围内,病毒浓度的对数值与信号强度呈线性关系;采用BAS放大检测信号后,病毒的最低检出量为12.38ng/ml、0.22μg/ml。该免疫芯片与酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫荧光法(IFAT)对同种样品的检测结果高度一致。     

镉胁迫对大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)血细胞遗传损伤的研究

以大弹涂鱼为研究对象,应用单细胞凝胶电泳技术并结合外周血基因组DNA琼脂糖凝胶电泳,研究了镉胁迫对大弹涂鱼外周血细胞的遗传损伤。结果表明:(1)镉对大弹涂鱼外周血细胞是遗传毒性而非细胞毒性,并且产生的遗传损伤存在显著(P0.01或P0.05)的剂量效应,染毒1h的大弹涂鱼的全长和尾长与浓度的相关方程分别是y=29.592x-10.576(r2=0.9786),y=28.417x-14.859(r2=0.9857),染毒2h的大弹涂鱼的全长和尾长与浓度的相关方程分别是y=32.044x-5.0235(r2=0.941),y=29.911x-9.539(r2=0.9635)。(2)DNA的损伤程度和污染胁迫之间存在着时间效应。以上结果表明,DNA损伤可作为大弹涂鱼受镉胁迫时的生物指标。     

肽类常用的分析技术

生命科学研究的迅速发展对生物大分子的分离分析提出了更高的要求,促使人们不断研究和开发新型的高效、快速、灵敏、选择性好的分离分析方法。就以肽类分析来说,不论是组织内提取、利用重组技术表达,或是以化学方法合成肽分子,均存在分离和纯化的问题。蛋白质和多肽的分离分析技术种类繁多,近年来又有很大发展,不少技术也以新的姿态出现,例如双水相体系萃取、超临界流体萃取和反微体体系萃取等技术。但这些技术一般适用于分离提纯的最初阶段。膜滤和纳滤技术十多年前还刚刚用于肽类的分析,但目前已相当普遍。不过,在蛋白质和多肽产…     

几种养殖鲍同工酶生化遗传的比较研究

运用聚丙烯酰胺凝胶电泳对我国主要养殖鲍(皱纹盘鲍、盘鲍及九孔鲍)12种同工酶(LDH、ME、MDH、GPI、PGM、IDH、IDDH、SOD、EST、ODH、ADH、AAT)26个基因座位进行了分析．结果表明：EST、PGM可以作为区分三种(亚种)鲍的生化遗传标记；在所分析的位点中，未发现多态现象，表明三种养殖鲍杂合子缺失严重，其主要原因可能在于哑基因、近交与自然选择。     

米氏凯伦藻细胞表面膜蛋白质组及其对温度变化的响应研究

米氏凯伦藻(Karenia mikimotoi)近年在我国福建、浙江和广东沿海经常形成赤潮,其赤潮不仅影响到海洋生态系统的稳定,也严重威胁到水产养殖以及人类生命健康安全。本论文以米氏凯伦藻为研究对象,建立了米氏凯伦藻细胞表面膜蛋白质荧光标记技术和细胞膜蛋白质提取方法,运用荧光差异凝胶电泳技术(2-DDIGE)对膜蛋白质进行了分析,并研究了米氏凯伦藻的膜蛋白质组及其对环境温度变动的响应。实验共鉴定到44个细胞表面膜蛋白,其中有效注释27个,主要为转运蛋白、HSP70蛋白家族和捕光蛋白等。米氏凯伦藻在20°C条件下的细胞生长和光合作用要明显好于16°C和12°C,但16°C和12°C条件下的差别不大,表明低温限制了米氏凯伦藻的生长。当米氏凯伦藻从12°C快速转移至16°C和20°C时,藻细胞密度和光合作用效率短时间迅速降低,但细胞很快即适应温度变化。细胞膜上的转运蛋白和光合作用蛋白在其适应温度变化中起着重要作用。     

罗氏沼虾肌肉8种同工酶的研究

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)肌肉中的ADH,LDH,G6PDH,SOD,GDH,EST,AKP,ACP等8种同工酶进行分析,以期为其种质资源保护和开发以及遗传育种等方面的研究提供基础资料.结果表明,8种同工酶由17个基因位点所编码,其中G6pdh-1,Gdh-1和Est-3等3个基因位点具有多态现象.多态位点比例为17.6%.     

黄海西北近岸沉积物中细菌群落空间分布特征

采用16S rDNA文库和变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术,对黄海西北部3个近岸站位沉积物中细菌群落多样性及空间分布特征进行了调查和解析。对表层沉积物16S rDNA序列统计表明,各站位细菌群落多样性很高,γ-和δ-变形菌纲分别占克隆序列总数的20%~32%,是沉积物中的绝对优势类群。DGGE图谱分析表明,同一站位中不同深度的细菌群落结构相似性较高,而不同站位间群落结构相差较远。研究表明在黄海西北近岸沉积物中细菌群落多样性较高,优势类群明显,在较小尺度范围内群落结构的垂直变化不明显。     

花尾胡椒鲷养殖群体遗传多样性的等位酶研究

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）技术对取自厦门火烧屿海水网箱的花尾胡椒鲷人工鱼养殖群体的遗传多样性进行等位酶分析。结果表明：所检测的16种同工酶的24个基因座位中，在XDH和GCDH基因座位上发现多态性，其平均多态位点比例为8．33％，基因座位有效等位基因的平均数Ne为1.083，平均杂合度的观测值Ho为0．00556，预期值He为0．00537,Hardy-Weinberg遗传偏离指数（D)为0．035。与其他鱼类相比较说明了其遗传多样性处于较低水平，文中对此进行了探讨并提出相应的种质资源管理保护措施。     

五个短蛸群体等位基因酶的遗传变异

采用水平淀粉凝胶电泳技术研究了山东沿海莱州（LZ），烟台（YT）、青岛（QD），日照（RZ）和大连（DL）五地短蛸自然群体的等位基因酶遗传变异。分析了AAT，ALP，EST，GRS，G6PD，SDH，CAT，SOD，IDH，GPI，PGM，G3PD，MPI，ME，MDH，CK，AK等同工酶在短蛸外套肌和肝脏组织中的表达情况，并对同工酶进行了生化遗传分析，LZ，YT，QD，RZ，DL五个群体的多态位点比例分别为15％，5％，10%,10%,10%(P0．99），群体平均杂合度观测值分别为0．024，0．001，0．009，0．007，0．006，平均位点有效等位基因数分别为1．200，1．022，1．061，1．103，1．077。结果表明，LZ群体的遗传多样性较高，同时，各群体中普遍存在杂合子缺失现象，对五个群体的遗传距离进行聚类分析，构建了系统树图。     

Effects of Hanseniaspora opuntiae C21 on the growth and digestive enzyme activity of juvenile sea cucumber Apostichopus japonicas

The effects of a diet containing Hanseniaspora opuntiae C21 on growth and digestive enzyme activity were estimated in juvenile Apostichopus japonicus. Groups of sea cucumbers were fed diets containing H. opuntiae C21 at 0(control), 10 4, 10 5, and 10 6 CFU(colony-forming units)/g feed. Results showed that after 45 d the specific growth rate(SGR) of sea cucumbers fed a C21-supplemented diet at 10 4 CFU/g feed was significantly higher than that of the control( P 0.05). Intestinal trypsin and lipase activities were significantly enhanced by C21 administration at 10 4 and 10 5 CFU/g feed compared with the control( P 0.05). After feeding for 23–42 d, C21 was demonstrated by denaturing gradient gel electrophoresis to be present in the intestine of sea cucumbers. In addition, after feeding the C21-supplemented diets for 15 d, the sea cucumbers were switched to an unsupplemented diet and C21 was confirmed to be capable of colonizing the intestine for at least 31 d after cessation of feeding. In conclusion, C21 was shown to successfully colonize the intestine of juvenile A. japonicus via dietary supplementation, and improve growth and digestive enzyme activity.