草鱼血清中一种新的凝集素免疫因子

于1998年5月－2000年3月，在浙江省杭州市采集草鱼，采用硫酸铵盐析和梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，从血清中分离出一种自然凝集素，对其理化和生物学性质进行研究。结果表明，该凝集素能够识别和凝集多种不同的红细胞、细菌和酵母，具有100000g离心不沉降，不被透析，耐热、耐酸、耐碱，抗DNase、RNase、SDS和乙醚，对胰蛋白酶、糖苷酶、糖氧化剂NaIO4和β－巯基乙醇敏感等特性，是一种分子量为67kD、等电点为6．2的糖蛋白分子。其活性能被半乳糖、乳糖、甘露糖和N－乙酰葡糖胺所抑制，其抗原特异性不同于草鱼凝集集抗IgM，表明两者是不同的物质。草鱼凝集素显著地促进巨噬细胞的吞噬、杀菌能力，说明是一种重要的免疫活性因子。     

SCREENING OF AGGLUTININS IN MARINE ALGAE FROM FUJIAN COAST OF CHINA

Thirty-three species of marine algae belonging to Rhodophyta, Phaeophyta and Chlorophyta from the Fujian coast were examined for agglutinins with different animal and human erythrocytes. Protein extracts from 26 species were active against at least one type of the erythrocytes tested. There were 3 species (Grateloupia imbricata, lshigefoliacea and Entermorpha prolifera) whose extracts could agglutinate all the erythrocytes used. The lowest protein concentration required to produce erythrocyte agglutination varied remarkably, from 3.1μg/ml to 500μg/ml . The strongest activity was found in the agglutina-tion of rabbit erythrocytes by Gloiopeltis furcata extract. Inhibition assays performed with nine mono- and bisaccharides indicated that agglutinations of rabbit erythrocytes by extracts of 7 species were inhibited by one or more types of the sugars assayed. The agglutinating activity shown by extracts of most species wasnot affected when the test solution was heated to 90℃, but was lost at 95℃ - 100℃. A few extracts losttheir activity at 60 RS, 65 RS and 75 RS, respectively.     

两种微藻凝集素对几种不同类型细胞的凝集作用

经离子交换和分子筛层析从紫球藻（Porphyridium cruentum）和海水小球藻（Chlorella sp．）中分离纯化得到2种凝集素,研究它们对几种不同类型细胞即动物和人血红细胞、海洋和淡水微藻、细菌和真菌的凝集活性。研究结果表明,2种微藻凝集素对它们当中一些类型的细胞或种类具有不同程度的凝集活性,其中对水生聚胞藻（Synechocystis aquetilis）的凝集活性最强,最低质量浓度只需0．0313g／L。     

文蛤(Meretrix meretrix)C-型凝集素基因的分子克隆及表达分析

C-型凝集素是一种重要的模式识别蛋白,本研究以文蛤为材料。利用PCR扩增和RACE技术首次获得了编码文蛤C-型凝集素的基因(Mm-CTL)c DNA序列,全长为1855bp,其开放阅读框为519bp,编码172个氨基酸。Smart软件预测Mm-CTL的糖识别结构域(CRD)从第34个氨基酸到第168个氨基酸。BLASTP序列相似性分析显示,Mm-CTL与大竹蛏氨基酸序列同源性最高,相似性为56.5%,与其它无脊椎动物的相似性为13.5%—23.9%。系统进化树分析与同源分析结果一致,其中Mm-CTL与双壳类C-型凝集素聚在一起,与大竹蛏亲缘性最近。环境胁迫实验显示,溶藻弧菌感染6h时Mm-CTL表达量明显上升,在12h时达到最高值,随后有所下降。盐度胁迫时Mm-CTL在盐度5时表达量相对较低,在盐度10—20中的表达量相对较高。温度胁迫时Mm-CTL在35°C时表达量相对最高,10°C时表达量明显较低。研究结果表明,文蛤应对环境因子影响可通过调节Mm-CTL的表达来应答免疫反应。本研究将为贝类先天性免疫因子研究以及病害的防控奠定基础。     

杂交鲟(Sturgeon cartilage)软骨中硫酸软骨素的提取方法及分析鉴定

采用稀碱浸提、蛋白酶水解与三氯乙酸沉淀相结合脱蛋白的工艺,对杂交鲟软骨提取琉酸软骨素的方法进行了较系统的研究。综合考察各种影响因素,设计了正交试验对提取工艺参数进行了优化,并对产品的质量指标进行了检验。结果表明,最佳提取工艺参数为:碱提取时料液比为1:2.0,碱浓度为4%,碱提温度为40℃;胰蛋白酶的酶解温度为55℃,酶量为2%,酶解时间为10h,制备的硫酸软骨素为白色粉末,得率为28.9%,纯度为92.3%,蛋白质含量为2.59%,各项质量指标完全符合标准要求。与目前已报道的其他软骨素制备工艺相比较,该方法具有工艺简便,提取率高,产品纯度高的特点。光谱分析法结构鉴定结果表明它是一种软骨素肽,其主要成分为硫酸软骨素C。     

马氏珠母贝PmLec-8基因的克隆与表达分析

Lec-8(C-type lectin 8)属于C-型凝集素超家族,在机体抵抗微生物的感染过程起重要的作用。本研究采用RACE技术克隆出了PmLec-8基因cDNA全长序列,并且运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了PmLec-8基因在马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)不同组织中的表达模式。结果显示:PmLec-8基因序列全长737 bp,其中5′UTR长为36 bp,3′UTR长为113 bp,开放阅读框(ORF)为588 bp,编码195个氨基酸,预测其分子质量约为22.90 ku,等电点为5.17;PmLec-8具在一个糖类识别结构域(Carbonhydrate-recognition domain,CRD),符合典型的C型凝集素(C-type lectin)家族特征;多序列比对结果表明物种间Lec-8的同源性较低,4个半胱氨基酸残基高度保守;qRT-PCR数据分析表明,PmLec-8在马氏珠母贝肝胰腺、性腺、闭壳肌、鳃、血细胞和外套膜中均有表达,其中肝胰腺中表达量最高,其次是鳃,差异具统计学意义(P0.05)。     

毛蚶血清凝集素的凝集活性

以毛蚶为实验材料,对其血清中的凝集素进行研究.毛蚶血清凝集素对人的A,B,O血型红细胞、鸡和小鼠的红细胞均有凝集作用,凝集效价分别为256,256,8,16,64,同时它还能对白色念珠菌、啤酒酵母、溶藻胶弧菌等微生物具有凝集作用.毛蚶血清凝集素具有一定的pH值稳定性和热稳定性.在选用的12种单糖和寡糖中,L-鼠李糖、L-树胶醛糖、麦芽糖、D-半乳糖、蔗糖对毛蚶血清的凝集活性有明显的抑制作用.用弧菌对毛蚶进行免疫刺激时,其血清对鸡红细胞的凝集效价明显增加.     

具彩色斑纹颅形贝在广西桂林下石炭统黄金组中的发现:兼论颅形贝属的地质地理分布

文中描述了产自广西桂林地区下石炭统黄金组下部的颅形贝属一新种,桂林颅形贝(Cranaena guilinensis)。新种以平直的前结合缘和背壳上发育中槽为特征。在4枚标本上发现保存有放射状的彩色条带,表明该种当时生活在温暖海域的浅水环境。对该属70个种的地质地理分布和生物多样性变化的初步分析表明,该属可能起源于早泥盆世欧美大陆西北缘的老世界区,之后的地理分布和生物多样性发展以北美地区为中心,经历了中泥盆世—晚泥盆世早期和早石炭世2次比较明显的辐射演化、迁移扩散高峰和晚泥盆世晚期的1次严重衰退。第1次高峰是中泥盆世—晚泥盆世早期,该属的生物多样性达到巅峰,生物地理分布范围扩大到欧美大陆之外的西伯利亚板块、哈萨克斯坦板块和华南板块等;第2次高峰是早石炭世,该属的生物多样性虽不及前一次,但获得了最广泛的地理分布,不仅在北方大陆有分布,而且已进入到冈瓦纳大陆边缘。晚泥盆世晚期该属的1次严重衰退显然与F/F灭绝事件有关。早石炭世之后,该属进入衰退阶段,最终在二叠纪初灭绝。     

外源凝集素──水产动物御敌的有力兵器

外源凝集素是非免疫起源的热敏蛋白质或糖蛋白，由于其多价构型及对持定细胞多糖具结合亲和力，它们选择凝集某些细胞（包括脊椎动物血球及一些病原微生物）和沉淀某些复杂碳水化合物；其凝集活动常被单糖所抑制，有的却需某些二糖、三糖或多糖。外源凝集素分离自广泛的低等和较高等的生物。一些地区水产养殖业受挫，因素较多，但对发病机理认识之缺乏和调动养殖对象本身防病积极性之不足，是其重要原因。外源凝集素可在诸如凝集外来细胞，调理作用等的防御活动中扮演识别因子，协助一些生理活性物发挥作用，参与吞噬、胞囊、凝固、止血及创伤修复等作用。在生物学、细胞学、生物化学、医学和食品科技上有广泛用途。迄今外源凝集素的许多性能并未全清，在自然界中的精细生理作用仍是个谜。本文论述外源凝集素的定义、性能及用途，以提请有关人士重视。     

Screening of Lectins in Crab and Shrimp from Fujian Coast of China

Twelve species of crustacean from Fujian coast were examined for lectins with different animal erythrocytes. Serum extracts fromall of 12 species showed agglutinating activity against at least two types of the erythrocytes used, which revealed the existence of lectins in these species. There were five species ( Penaeus japonicus, Lophosquilla costata, Charybdis feriatus, Portunus pelagicus, Scylla serrata ) whose serums could agglutinate all the erythrocytes tested. The lowest serum protein concentration required to produce erythrocytes agglutination varied remarkably, ranging from 0.7 μg/mL to 8 080 μg/mL. The strongest activity was shown in the agglutination of rabbit erythrocyte by serum of Penaeus vanaminas. Inhibition assays performed with seven mono- and bisaccharides showed that agglutination of quail erythrocytes by serums of three species (Portunus pelagicus, Scylla serrata and Sesarma sp. ) were not inhibited by any sugars, while others were inhibited by at least three types of sugars. The assay of temperature influence on agglutinating activity showed that only Penaeusjaponicus retained activity when the serum was heated to 90℃, and other serums lost their activity at 40 ℃, 50 ℃, 60 ℃, 70 ℃, 80 ℃ for 10 minutes, respectively.