三亚海域浮游病毒与细菌丰度的时空变化规律以及相关环境因子*

在三亚海域设置3个站位, 分别于各站位连续采集12个月表层水样。利用流式细胞仪进行浮游病毒及浮游细菌丰度的测定, 并对两者及其与环境因子之间的相关性进行研究, 同时对不同站位之间进行差异性分析。结果表明, 调查海域浮游病毒丰度(平均7.63×10⁶viruses·mL^-1)高于浮游细菌丰度(平均1.52×10⁶cells·mL^-1)。浮游病毒及浮游细菌丰度在三亚河口最高, 且有明显的季节变化, 冬春季高于夏秋季, 并且其与鹿回头半岛西侧、小东海之间均有极显著差异(P<0.01), 不同类群病毒代表的宿主类群也有所不同。调查海域总体水平浮游病毒丰度与浮游细菌丰度显著正相关(r=0.800, P<0.01); 叶绿素(Chl a)和氮盐(NO- 2、NO- 2+NO- 3、NH+ 4)是影响两者的关键因子。     

益气养阴方治疗气阴两虚型慢性功能性便秘40例临床观察

目的：观察益气养阴方治疗气阴两虚型慢性功能性便秘的临床疗效。方法：将气阴两虚型慢性功能性便秘患者80例随机分为治疗组与对照组各40例。治疗组采用益气养阴方治疗,对照组采用枸橼酸莫沙必利分散片治疗,比较2组患者临床疗效及临床症状积分变化情况。结果：总有效率治疗组为90.0%,对照组为75.0%,2组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;2组临床症状积分治疗前后组内比较及治疗后组间比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：益气养阴方治疗气阴两虚型慢性功能性便秘有较好的临床疗效。     

一例异育银鲫(Carassius auratus gibelio)暴发性出血病病原分析

2016年6月,江苏某异育银鲫(Carassius auratus gibelio)养殖场暴发一种传染性急性出血病,造成养殖银鲫大量死亡。为分析此次疾病病因及流行规律,本研究从发病养殖场采集患出血病的异育银鲫,从细菌、病毒及寄生虫三个方面对病原进行了分析。采用病原菌分离、组织病理学观察、超薄切片电镜观察、病毒核酸分析、回感实验等对病原进行鉴定。结果显示从发病鲫鱼体内分离到病毒一株,未发现寄生虫及细菌感染。经测序及序列分析,该病毒为鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus2,CyHV-2)病毒,组织病理学观察结果显示患病鱼的鳃和肾脏有明显病变,电镜下可观察到病鱼脾脏组织有带囊膜的球形病毒,囊膜直径约为170—200nm,病毒衣壳直径约为110—120nm,核心直径约为60nm,用组织匀浆感染鲫鱼囊胚细胞系(CGB)可稳定地观察到典型的细胞病变,用患病鱼组织匀浆液人工感染异育银鲫的死亡率高达100%,荧光定量PCR检测到该病毒可感染多器官,其中以脾脏中病毒含量最高,其次是脑,肝脏中最少。本研究可为CyHV-2的诊断防控及疫苗研制提供资料。     

三疣梭子蟹几丁质酶基因(PtCht6)的克隆及其在免疫中的功能分析

几丁质酶(chitinase)在甲壳动物的蜕皮、消化和免疫等很多生物学过程中发挥重要功能,为深入探讨几丁质酶的免疫防御机制,本实验利用RACE技术克隆了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)PtCht6基因。该基因cDNA全长2736bp,开放阅读框(ORF)2103bp,编码700个氨基酸,具有几丁质酶GH18家族典型特征。利用实时荧光定量技术分析PtCht6在三疣梭子蟹不同组织、不同蜕皮阶段、不同病原感染以及低盐胁迫(11)下的表达特征,结果显示:PtCht6在各组织中均有表达且在肝胰腺中的表达量最高;在不同蜕皮时期的肝胰腺中,其表达量由蜕皮后期(A/B)、蜕皮间期(C)、蜕皮前期(D)依次递减(P0.05);人工感染WSSV和副溶血弧菌后.PtCht6的表达量在肝胰腺中分别于12h、72h达到最大值,在血细胞中均于12h达到最大值,且相较于对照组,整体显著上调表达(P0.05);低盐胁迫能够显著抑制该基因的表达,最高抑制73倍(P0.05)。同时发现,低盐环境下感染WSSV后,该基因达到峰值的时间明显延迟(至少延迟12h.P0.05)。该研究结果预示PtCht6作为免疫因子参与三疣梭子蟹的病原防御,且低盐胁迫在一定程度上抑制了该基因的免疫功能。     

通阳益气方治疗冠心病慢性心力衰竭22例临床观察

目的：观察通阳益气方治疗冠心病慢性心力衰竭气虚痰阻证的临床疗效。方法：将44例冠心病慢性心力衰竭气虚痰阻证患者随机分为2组,对照组22例予西医常规治疗,治疗组22例在对照组治疗的基础上加通阳益气方治疗,疗程均为4个月。比较2组治疗前后心功能分级、心脏超声、血脂等指标。结果：心功能疗效总有效率治疗组为77.27%,对照组为59.09%,2组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。2组LVEF、LEVDD治疗前后组内比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）,LVEF治疗后组间比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗组LDL-C、TG、TC及对照组LDL-C治疗前后组内比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;LDL-C治疗后组间比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：通阳益气方治疗冠心病慢性心力衰竭气虚痰阻证有较好疗效。     

头针结合膏肓灸法治疗慢性疲劳综合征35例临床观察

目的：观察头针结合膏肓灸法治疗慢性疲劳综合征的临床疗效。方法：将70例慢性疲劳综合征患者随机分为2组,治疗组35例采用头针结合膏肓灸法治疗,对照组单用头针治疗。结果：总有效率治疗组为94.3%,对照组为82.9%,组间比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。2组症状评分及疲劳量表-14（FS-14）评分治疗前后组内比较及治疗后组间比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：头针结合膏肓灸法治疗慢性疲劳综合征效果显著。     

补肺活血胶囊辅助治疗COPD稳定期的Meta分析

目的：通过对补肺活血胶囊辅助治疗COPD稳定期的文献进行Meta分析,评价补肺活血胶囊的临床疗效及安全性。方法：在中国知网、万方数据库、重庆维普中文科技期刊数据库、中国生物医学文献数据库四大中文数据库中检索自建库至2017年5月期间发表的关于补肺活血胶囊治疗COPD的临床文献,对纳入文献采用Rev Man 5.2软件进行Meta分析。结果：共纳入10篇文献,937例患者,Meta分析结果表明补肺活血胶囊辅助治疗COPD稳定期可减少1年内急性发作次数,降低咳嗽、喘促症状积分,改善症状;提高控制率和显效率;降低二氧化碳分压,提高氧分压,减轻二氧化碳分压升高和氧分压降低对机体的损害程度,但患者的肺功能等指标无明显改善。结论：初步认为补肺活血胶囊辅助治疗COPD稳定期有较好的疗效,但由于缺乏高质量临床随机对照研究,故其有效性和安全性尚需更多高质量临床随机对照试验予以证实。     

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒衣壳蛋白基因的克隆表达及抗体制备

本文根据GenBank登录的对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的全基因组序列(NC-002190),设计出主要结构蛋白基因的相应引物,从厦门发病的对虾中,提取DNA,以此为模板,利用PCR扩增目的基因.再将目的基因分别与pGEX-6p1载体和pET-28a载体连接,构建重组表达载体pGEX-Ⅳ、pET-Ⅳ,重组子经酶切和测序鉴定后导入表达型大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,大小约为62KDa和41KDa,与预测大小一致.将pET-Ⅳ表达重组蛋白经纯化,免疫小鼠,Western免疫印迹反应结果表明其抗体均可与pGEX-Ⅳ和pET-Ⅳ表达的蛋白发生特异性反应.本研究的结果为对虾IHHNV的快速检测及其免疫提供了研究基础.     

In vivo neutralization assays by monoclonal antibodies against white spot syndrome virus in crayfish(Cambarus proclarkii)

The neutralizing activities of eight monoclonal antibodies （MAbs） against white spot syndrome virus （WSSV） （2D2, 2B2,1D2, 1D5, 1C2, 4A1, 6A4 and 6B4） were analyzed by in vivo experiments. Gills from WSSV-infected shrimp were homogenized and ten-fold serially diluted by PBS, and then incubated with MAbs （hybridoma culture supernatant）, respectively. The mixture of WSSV and MAbs were injected into crayfish （Procambarus clarkii）. After challenge, the death rates of crayfish were counted to determine the neutralizing activities of MAbs. At the same time, the mixture of myeloma culture supernatant and WSSV or PBS was served as positive or negative control, respectively. The results showed that, at each virus dilution, the mean time to death of the crayfish injected with MAb-treated virus was significantly longer than that in the positive control, though they all showed 100% mortality within 25 d, and meanwhile, few crayfish died in the negative control. Among the eight MAbs, 2D2, 2B2, 1D2 and 1D5, especially the former two, delayed the mortality significantly, and 1 C2, 4A1 and 6A4 delayed the mortality as well but not so efficiently, while MAb 6IM was efficient only when the virus concentration increased. The results indicated that the anti-WSSV MAbs can neutralize WSSV in different virus dilutions.