RAPD技术在龙须菜遗传多样性研究中的应用 Ⅰ总DNA的提取及RAPD反应条件的优化

比较两种从龙须菜中提取总ＤＮＡ的方法,这两种方法得到的染色体ＤＮＡ具有较好的完整性,从ＤＮＡ的产量、蛋白质含量等指标可以看出,ＣＴＡＢ法优于蛋白酶Ｋ法。实验对龙须菜ＲＡＰＤ反应条件进行了优化：在２５μＬ反应体系中,含有Ｍｇ２＋２．５ｍｍｏｌ／Ｌ,ｄＮＴＰ１００μｍｏｌ／Ｌ,总ＤＮＡ２５ｎｇ,引物０．２μｍｏｌ／Ｌ和Ｔａｑ酶１Ｕ,经９４℃变性１ｍｉｎ,３５℃退火１ｍｉｎ,７２℃延伸２ｍｉｎ,３５个循环,得到稳定的ＲＡＰＤ扩增图谱。     

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)CTL基因SNP位点E4-205 C/T与抗溶藻弧菌相关性分析

C-型凝集素(C-typelectin,CTL)是甲壳类动物体液免疫中重要的免疫因子之一。但CTL基因在溶藻弧菌对三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)感染的过程中的表达及抗病机制尚有待进一步研究。为初步阐明CTL基因SNP E4-205 C/T位点与抗溶藻弧菌感染相关的分子机制,对不同基因型梭子蟹进行溶藻弧菌感染,通过绝对定量方法分析不同基因型梭子蟹肝胰腺、肌肉组织中溶藻弧菌的复制情况。发现溶藻弧菌感染后12 h内梭子蟹肝胰腺、肌肉组织中C/C组细菌数量显著高于T/T组,结果表明T/T组梭子蟹抗感染能力显著高于C/C组。进一步对该位点非同义突变(ACT-ATT)导致的一个氨基酸改变(Thr-Ile)的两种蛋白进行体外重组表达,并对两种重组蛋白CTL-ATT及CTL-ACT进行活性分析。发现两种重组蛋白对溶藻弧菌生长均具有一定的抑制作用, CTL-ATT的抑菌活性显著高于CTL-ACT。重组蛋白CTL-ATT与PAMPs的结合活性高于CTL-ACT与PAMPs的结合活性,同时两种蛋白与PAMPs和溶藻弧菌的结合活性具有浓度依赖性。结果表明三疣梭子蟹CTL基因参与机...     

Development of a SCAR marker for male gametophyte of Gracilariopsis lemaneiformis based on AFLP technique

The red alga Gracilariopsis lemaneiformis （Bory） is an economically valuable macroalgae. As a means to identify the sex of immature Gracilariopsis lemaneiformis, the amplified fragment length polymorphism （AFLP） technique was used to search for possible sex- or phase-related markers in male gametophytes, female gametophytes, and tetrasporophytes, respectively. Seven AFLP selective amplification primers were used in this study. The primer combination E-TG/M-CCA detected a specific band linked to male gametophytes. The DNA fragment was recovered and a 402-bp fragment was sequenced. However, no DNA sequence match was found in public databases. Sequence characterized amplified region （SCAR） primers were designed from the sequence to test the repeatability of the relationship to the sex, using 69 male gametophytes, 139 female gametophytes, and 47 tetrasporophytes. The test results demonstrate a good linkage and repeatability of the SCAR marker to sex. The SCAR primers developed in this study could reduce the time required for sex identification of Gracilariopsis lemaneiformis by four to six months. This can reduce both the time investment and number of specimens required in breeding experiments.     

企鹅珍珠贝同工酶表达多态性的初步研究

采用垂直板状聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳,对企鹅珍珠贝鳃组织的酯酶(EST)、葡萄糖-6磷酸脱氢酶(G6PD)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和超氧化物歧化酶(SOD)5种同工酶进行了检测,并对酶谱特征进行了生化遗传分析.酶谱表型显示企鹅珍珠贝的同工酶呈现多态现象,同工酶表达上的多态性表明企鹅珍珠贝具有较丰富的遗传多样性.     

南京玄武湖浮游细菌群落结构的季节变化及其与环境因子的关系

应用16S rRNA基因末端限制性片段长度多态性技术和多元统计方法,探究了南京玄武湖浮游细菌群落结构的季节性变化,并找出了浮游细菌群落组成分布的主要影响因子.结果表明,玄武湖4个季节中夏季Invsimpson指数、Shannon-Wiener指数和Pielou指数最高,而春季最低.非度量多维尺度分析结果显示浮游细菌群落结构存在着明显的季节性变化.Mantel检验、典范对应分析、变量分割分析表明影响玄武湖细菌群落结构最显著的环境因子为温度,其次为pH.营养盐浓度对玄武湖细菌群落结构的影响不显著.总的来说,本研究将有助于更好地理解富营养化水体中的浮游细菌群落组成的季节变化规律.     

Isolation via enrichment and characterization of ten polymorphic microsatellite loci in the cuttlefish, Sepiella maindroni de Rochebruns

Ten novel polymorphic microsatellite loci were developed using an enrichment and colony hybridization protocol and characterized for the cuttlefish, Sepiella maindroni. Polymorphism was explored by using 30 individuals from the coastal waters of Zhanjiang, Guangdong province, China, in December 2007. The number of alleles ranged from 5 to 13. The ranges of observed and expected heterozygosity were from 0.578 9 to 1.000 0 and 0.682 8 to 0.925 7, respectively, and the average polymorphic information content (PIC) was 0.778 5. These microsatellite loci will certainly facilitate the detection of the genetic variation and population structure of S. maindroni.     

应用RAPD技术对裙带菜七个配子体克隆的遗传分析

对裙带菜７个单克隆进行了ＲＡＰＤ分析,从２０个引物中筛选出１６个能产生稳定的扩增片段的引物,共产６４条扩增片段,其中５６条呈现多态,多态位点比例高达８７．５％,根据这些引物扩增的指纹图谱,计算了各材料之间的遗传距离（Ｄ）,并由此进行了聚类分析,结果显示,各品系之间的遗传距离在０．４４１９－０．７４２之间,裙带菜种内遗传变异丰富,其遗传距离与地理分布没有必然的联系。     

皱纹盘鲍微卫星研究进展

微卫星标记(microsatellite markers)广泛分布于原核生物和真核生物基因组中，具有密度大、多态性丰富、遵循孟德尔分离定律共显性遗传、易于PCR扩增等特点，已成为近年来最引人注目的新型DNA标记。本文对皱纹盘鲍的微卫星标记的开发以及在种群遗传多样性评价、家系分析、人工苗种遗传变异监测研究方面的最新进展进行了综述，并阐述了微卫星标记在无效等位基因、大小承异同形性等方面存在的问题。     

转录组数据的大菱鲆(Scophthalmus maximus) SNP标记开发及多态性分析

大菱鲆(Scophthalmus maximus)是最具商业价值和养殖前途的海水鱼类之一, 雌雄间生长有一定的差异。其高通量雌雄转录组测序的完成为大规模鉴定和开发SNP标记提供了参考序列。本研究基于大菱鲆雌雄转录组测序数据, 选择其中45个SNP位点, 设计引物63组, 其中21个位点(46.7%)应用小片段高分辨率熔解曲线(HRM)技术分型成功。对其进行多态性检测, 21个位点均具有二个单倍型。观测杂合度Ho的分布范围为0.256—1.000, 期望杂合度He的范围为0.276—0.518, 19个位点符合Hardy-Weinberg平衡。14个SNP位点位于基因编码区, 其中3个属于非同义突变。含有这些SNP位点的基因大多与信号转导和转录翻译相关。本研究结果表明, 高通量转录组测序和小片段HRM适合大规模SNP标记开发, 为大菱鲆的分子遗传育种提供了候选标记资源。