Rapid detection of virulent protease secreted by Vibrio anguillarum by dot enzyme-linked immunosorbent assay

Dot enzyme-linked immunosorbent assay （dot-ELISA）, indirect ELISA and Westem blot were performed to detect the virulent protease secreted by Vibrio anguillarum which was isolated from the diseased left-eyed flounder, Paralichthys olivaceous. Sensitivity results showed that dot-ELISA is a more sensitive, rapid and simple technique for the protease detection. The minimal detectable amount of protease is about 7 pg in the dot-ELISA test, while 7.8 ng in the indirect ELISA and 6.25 ng in the Westem blot respectively. Protease could be detected 2 h after incubation of V. anguillarum in the 2216E liquid medium but enzyme activity was very low at that period. From 6 to 12 h, the amount and enzyme activity of protease increased markedly and reached maximum at stationary phase. Analysis of serum samples periodically collected from the infected flounders showed that after 2 h of infection by V. anguillarum, the pathogenic bacteria could be detected in the blood of the infected flounders but no protease was found. It was 5-6 h after infection that the protease was detected in blood and then the amount increased as infection advanced. Quantitative detection of protease either incubation in the medium or from the blood of infected flounders could be accomplished in virtue of positive controls of quantificational protease standards （＂marker＂） so that the alterations ofprotease secretion both in vitro and in vivo could be understood generally. In addition, the indirect ELISA and dot-ELISA were also performed to detect V. anguillarum cells. Results indicated that the sensitivity of indirect ELISA to bacteria cells is higher than that of the dot-ELISA, and that the minimal detectable amount is approximately 10^4 cell/mL in the indirect ELISA, while 10^5 cell/mL in the dot-ELISA.     

副渔获物对渔业资源的影响及其减少方法的探讨

由于渔具不同的选择性和多鱼种鱼类共栖 ,人们在对目标种类进行捕捞时 ,不可避免地产生副渔获物及其抛弃。由于渔业资源的下降和人们对海洋环境保护意识的加强 ,副渔获物及其抛弃问题日益成为人们关注的焦点。本文对世界范围内的渔业活动所产生的副渔获物进行分析 ,根据副渔获物的种类、被抛弃情况和原因以及对渔业资源的影响 ,提出了减少副渔获物和抛弃的方法。     

我国海洋捕捞副渔获物现状,问题和对策

80年代以来,欧美一些国家的渔业科学家开始研究海洋捕捞副渔获物(以下简称副渔获物)问题,发表了一系列文章,但对副渔获物的定义至今也没有完全统一。在我国直到目前为止,副渔获物这个名字即使在渔业界也比较陌生。1995年10月,中国水产科学研究院在江苏省南通市主持召开了“中国海洋捕捞的副渔获物(兼捕)问题和对策研究研讨会”,是我国首次副渔获物的专题会议、会后还成立了副渔     

大亚湾和厦门港水域的嗜盐弧菌

报道厦门港水域7个站位和大亚湾9个站位嗜盐弧菌的数量分布特征、种类组成及其季节变化.采用“MPN”法进行弧菌计数,以TCBS进行弧菌分离以及采用API20E标准系列进行弧菌种的鉴定.结果表明,大亚湾海水中弧菌测值范围为1.48～5.38lg(个/dm3),平均菌数为3.90lg(个/dm3).厦门港测值范围为2.36～5.38lg(个/dm3),平均菌数为3.89lg(个/dm3).弧菌数量随温度发生明显的季节变化,夏季菌数多,冬季菌数少.出现于两港湾的主要弧菌种有溶藻弧菌、副溶血弧菌、河弧菌、创伤弧菌、模拟弧菌和麦氏弧菌,溶藻弧菌为优势种.     

异养细菌与虾病关系的研究

对对虾养殖池海水、底质、虾池进水及其邻近水域海水中的异养细菌和弧菌进行了调查研究.结果表明,在对虾养殖环境中,异养细菌菌群结构和各类群属细菌数量变化异常.弧菌成为优势菌属,并显示了喜欢在营养丰富的环境中生长的特点.弧菌可作为有机污染的指示菌.弧菌的数量与对虾发病有一定关系.     

海水养殖鱼类细菌性疾病研究概况

本文概述性地介绍了发生在海水养殖中的常见细菌性疾病包括弧菌现、链球菌症、卡诺氏菌症、细菌性肾病、巴斯德氏杀菌症、爱德华氏症、滑走细菌症和杀鲑气单胞菌症等的主要症状、流行情况及病原菌特征，通过遗传育种筛选有抗病力的养殖品种是人们正在努力的方向，目前的研究重点主要在鱼类抗病能力方差分析研究及抗病育种的方法研究，免疫接种是提高养殖鱼类对某一特定性病原菌的最有效的方法，目前已有三十多种菌苗上市，通过使用免疫刺激剂提高鱼类的非特异性免疫力已显示一定的应用前景，虽然抗菌素由于存在抗药菌株和鱼体残留，但它仍是目前对细菌性疾病疾病的常规疗法，而海洋藻类提取物对细菌的抑制作用已被人们所认识，它将会成为一种有潜力的抗菌药物。     

最小弧菌热不稳定型溶血素基因克隆与序列分析

根据已发表的最小弧菌热不稳定型溶血素（heat-labile hemolysin）基因核苷酸序列，设计和合成一对特异性引物，以最小弧菌96-6-3的基因组DNA为模板，PCR扩增得到热不稳定型溶血素基因片段，克隆到质粒载体pMD-18T中进行测序和分析．其结果表明扩增的热不稳定型溶血素基因片段与已发表的最小弧菌热不稳定型溶血素的同源性高达98％，扩增片段编码由446个氨基酸组成的多肽，推测分子量为50200．软件分析表明编码的氨基酸有较高的抗原性，可作为基因工程疫苗的候选基因片段．     

人工养殖点带石斑鱼弧菌病病原菌的分离及鉴定

广东、海南两省多个海水网箱养殖场养殖的点带石斑鱼(Epinephelus malabaricus)发生严重的弧菌病,从海南三亚和广东深圳的发病鱼病灶上分离到2株致病性细菌VAL02和VAL00,经人工回接感染实验证明这2株菌引起点带石斑鱼弧菌病,VAL02对点带石斑鱼苗的半致死量是2.25×10~5 cfu/g。经形态及生理生化特征分析,鉴定出VAL02及VAL00均为溶藻弧菌。应用药敏纸片法研究了22种化学疗剂对VAL02及溶藻弧菌标准株的生长抑制作用,发现VAL02对氯霉素、氟哌酸、卡那霉素和乙酰螺旋霉素等产生耐药性,对复方新诺明和环丙沙星等敏感。     

褐藻胶裂解酶产生菌Vibro sp.QY102的发酵条件优化

对海洋来源的Vibro sp.QY102的产褐藻胶裂解酶的发酵条件进行研究。结果表明,该菌株最适液体培养基成分为(w/v):0.5%褐藻酸钠;0.4%蛋白胨;0.3%KH2PO4;0.7%K2HPO4.3H2O;2%NaCl;0.01%MgSO4.7H2O,pH=6.0。按3%的接种量接入培养基,30℃150 r/min振荡培养120 h,产酶达到10.2 U/mL,为优化前的4.5倍。Mg2 是该菌株产酶所必需的,这在其他褐藻胶裂解酶生产菌株中未见报道。该菌株产酶发酵条件的研究,为褐藻胶裂解酶的大规模制备及应用奠定了基础。     

青岛地区近岸海水和几种海产品中付溶血性弧菌的调查分析(英文)

付溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是水产品中的一种重要食物中毒菌,它在沿岸海水和海产动物体上都有广泛的分布。本文报告了青岛地区近岸海水和几种常见水产品污染了该菌的情况。在检测方法上,改进了一种选择性较强的培养基(SAC),经实验表明,SAC培养基较其他常用的几种培养基对付溶血性弧菌检出的阳性率和灵敏度均较高,与普通采用的TCBS法比较,x~2=4.28,ρ<0.05,有显著效果的意义。青岛近岸海水中付溶血性弧菌的平均出现率为63.25—463CFU/100ml,生鲜的水产食品中平均含有745～6900CFU/100g,其中贝类含量最多,季节性和海区对其检出率有明显影响,夏季检出率最高,冬季最低,对不同方法所检出的菌株,选出部分作了它们的主要生理、生化特性的鉴定,并与参考菌株对比,证实SAC法检出的菌株有85％以上的株数符合付溶血性弧菌的特征,而TCBS法所检出菌株只有55％的真实性。并初步证明,这是一种温血动物和冷血动物的共患菌。