臭氧对物体表面IBV冠状病毒的杀灭效果的研究

本文利用强氧化剂臭氧O3对物体表面的冠状病毒进行杀灭试验。不同物体表面经不同臭氧浓度、湿度、温度处理灭活的冠状病毒于10日龄鸡胚培养一代，进行对流免疫电泳试验检测。结果表明，臭氧浓度在高于60．3mg／m^3，作用时间超过15min时就可将表面皿表面的病毒完全杀灭。温度对臭氧的杀毒效果也有影响，即温度越高杀毒效果越明显，而湿度对臭氧消毒效果则没有影响。同时，表面的材料不同对臭氧的消毒效果也存在一定影响，对金属材料和玻璃器皿的消毒效果较好；对纸片和布片的杀毒效果较差。     

对虾白斑综合症病毒基因组同源重复区结合蛋白的筛选

对对虾白斑综合症病毒（WSSV）基因组序列分析发现，基因组3％的区域均匀分布有与昆虫杆状病毒类似的9个同源重复区，很可能具有昆虫杆状病毒同源重复区参与病毒复制起始或转录调控的功能．以WSSV基因组同源重复区中一个包含高度保守结构域的小重复片断DNA（210bp）作为配体，利用WSSV基因组噬菌体展示库，经过5轮淘选出一个可与DNA特异结合的重组噬菌体克隆，包含的外源DNA片断长度为306bp．通过与WSSV基因组序列对比，发现该序列为WSSV的ORFs中wsv 021的5’端部分．推测wsv 021是一个可能与病毒复制或调控相关的重要功能基因．     

Flow cytometric detection and enumeration of DNA and RNA viruses infecting marine eukaryotic microalgae

Sample preparation protocols for flow cytometry (FCM) analysis with five algal viruses were optimized: Heterocapsa circularisquama virus (HcV), Heterosigma akashiwo virus (HaV), Chaetoceros salsugineum nuclear inclusion virus (CsNIV), Rhizosolenia setigera RNA virus (RsRNAV) and H. circularisquama RNA virus (HcRNAV). The optimum staining protocols differed significantly among the viruses tested. FCM counts for the large DNA algal viruses HaV and HcV (∼0.2 μm in diameter) were similar to numbers determined by epifluorescence microscopy (EFM). In contrast, FCM counts of viruses smaller than 40 nm that harbor DNA (CsNIV) or RNA genomes (RsRNAV, HcRNAV) were comparable to or lower than most probable number (MPN) values, which indicate only infectious virus number, suggesting that the FCM counts were underestimates. This is presumably because their single particle fluorescence signals were below the detection limit for the flow cytometer. These results indicate that a large portion of the smaller viruses in the aquatic plankton virus community may be overlooked by FCM.     

白斑综合症病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28基因的克隆及在蓝藻中表达载体的构建

用蔗糖密度梯度离心法分离纯化白斑综合症病毒（WSSV）。设计并合成引物，提取WSSV中国株的基因组DNA作为模板，通过PCR，扩增克隆出VP28基因，利用BamHI和EcoRI切点将VP28基因插入克隆载体pUC19 的多克隆位点上，得到VP28基因的重组克隆质粒，对其进行双向DNA测序。测序结果表明，该基因含有615个核苷酸，与GenBank中已有不同来源的WSSV的序列片段同源性为100％。利用BamHI切点将VP28的基因插入到穿梭表达载体启动子PpsbA的下游，EcoRI酶切鉴定，得到正向连接的可在蓝藻表达的重组穿梭表达载体，命名为pRL-VP28。     

文蛤一种球形病毒的分离纯化及细胞病理变化观察

为研究一种球形病毒引起的文蛤(Meretrix meretrix)细胞病理变化及该病毒的分类地位,作者运用透射电镜对异常死亡文蛤的细胞病理变化及感染的病毒粒子进行了超微结构观察,并通过差速离心、酒石酸钾超速离心和氯化铯密度梯度离心结合等方法对首次对该病毒粒子进行了分离纯化。结果表明:患病个体的鳃、消化盲囊、消化道和外套膜均大量存在一种病毒颗粒,该病毒呈球形,无囊膜,直径45~55 nm,核心与核衣壳间无明显界限,未发现病毒包涵体,该病毒存在于细胞间质及被破坏的细胞质中。该病毒粒子的感染引起的细胞病理变化主要表现为:细胞核染色质集聚,溶酶体增多,线粒体肿涨,粗面内质网膨胀,肌原纤维排列混乱,细胞结构变得无规则直至解体。病毒粗提液于4℃150 000 g氯化铯密度梯度离心20 h可该病毒粒子提纯,经纯化后负染显示,该病毒粒子呈球形,二十面体对称,无囊膜,直径在60~75 nm,表面结构粗糙,壳粒结构较明显,该病毒粒子在氯化铯中的浮密度为1.554~1.582 g/m L。本文结果为文蛤死亡病原的研究提供了基础资料。     

闽粤地区鲍暴发性流行病的病因分析和流行病学研究

1999年以来,福建、广东两省养殖鲍已连续多年发生了暴发性流行病,死亡率可达100％。结合病理学分析与流行病学调查结果分析,认为球状病毒和弧茵并发感染是该暴发病流行的主要原因。电镜观察发现病鲍的肝细胞和肠上皮细胞内有大小约为130～150nm和50-70nm的2种球状病毒,前者数量较多,具外囊膜,后者的病毒颗粒裸露,未见外囊膜。感染造成了鲍的肝脏和肠等器官的细胞结构严重破坏。人工感染实验表明注射、混朱浸泡等方式均会昔擞感染。根据回归实验和流行特．最调查,结合胡疆巴湫果,该病多发生于23℃以下的水温期,主要是通过海水的流动和养殖水的交换和鲍的运销而传播,25℃以上水温未见该病暴发。     

对虾白斑综合症病毒膜蛋白VP41A的功能研究

对虾白斑综合症病毒（WSSV）是对虾养殖的主要病害之一,在虾养殖业中造成了严重的损失．本研究从WSSV基因组中克隆到vp41a基因,大小约为900bp,发现该基因编码蛋白VP41A．通过构建重组质粒pET．His一卅J0表达了重组蛋白VP41A,大小约为43kDa．并通过Ni一琼脂糖珠交联下拉实验,在虾血细胞中找到一个能与VP41A相互作用蛋白,质谱分析发现该蛋白为细胞粘连蛋白,说明在WSSV感染宿主细胞的过程中蛋白VP41A可能发挥重要作用．本研究结果推动了WSSV与宿主对虾相互作用的研究,有利于探索病毒复制或转录的关键蛋白,为最终的病毒防治及快诛诊断提供科学依据．     

淋巴囊肿病毒mcp基因变异特征及其基因型分析

淋巴囊肿病毒是引起多种海、淡水鱼淋巴囊肿病的病原,且不同淋巴囊肿病毒分离株间存在一定的差异。本文对25株淋巴囊肿病毒分离株mcp基因的变异特征进行分析,结果表明:分离自同一宿主的淋巴囊肿病毒mcp基因序列并非完全一致,有些同宿主分离株间存在着较少的变异,其MCP蛋白序列间的变异位点多位于不规则结构域、属于非蛋白相互作用位点;分属不同基因型淋巴囊肿病毒分离株MCP蛋白序列间的变异位点也多位于不规则结构域,变异位点为蛋白相互作用位点的比率仅占21.98%。金头鲷淋巴囊肿病毒分离株LCDV-sa是一种新的淋巴囊肿病毒基因型,此25株淋巴囊肿病毒可分为7个基因型。对淋巴囊肿病毒变异的研究,可加深对其感染机制的认识,有助于了解其传播途径,可为淋巴囊肿病的防控提供重要的理论依据。     

一株H_5亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆与序列分析

根据GenBank中发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列设计2对引物,用RT-PCR方法从禽流感病毒广东分离病毒株(A/Chicken/Guangdong/1997)中扩增HA基因cDNA片段,并将其克隆至pMD-18T载体进行核苷酸序列测定。结果表明:用2对引物所扩增的片段大小分别约为1300 bp和800 bp,经序列拼接获得的HA基因cDNA长度约为1601 bp,编码533个氨基酸,与国内己发表的11个代表株的核苷酸和氨基酸序列同源性为分别为96.9%~99.9%和86.5%~93.0%;HA基因编码的氨基酸序列的系统进化树也表明A/Chicken/Guang-dong/1997、A/Goose/Huadong/01/2000、A/Ck/Hk/37.4/2002、A/Chicken/Zhoukou/2/02、A/Duck/Guangxi/53/2002、A/Duck/Fujian/01/2002等毒株处于同一进化枝,亲缘关系较近;而与A/Silly/Chicken/Hongkong/SF189/01株处于不同进化枝,亲缘关系较远。