Cloning and characterization of a thermostable carboxylesterase from inshore hot spring thermophile Geobacillus sp. ZH1

The gene(741 bp) encoding carboxylesterase from the thermophilic bacterium Geobacillus sp.ZHl was cloned and overexpressed in Escherichia coli.The purified recombinant protein presented a molecular mass of about 40 kDa by SDS-PAGE analysis.Enzyme assays using p-nitrophenyl esters with different acyl chain lengths as the substrates confirmed its esterase activity,yielding highest specific activity with p-nitrophenyl acetate.Among the p-nitrophenyl esters tested,the carboxylesterase presented preference for p-nitrophenyl caprylate,but hydrolyzed p-nitrophenyl butyrate more efficiently.When p-nitrophenyl butyrate was used as a substrate,the recombinant carboxylesterase exhibited highest activity at pH 8.0 and 60℃.Almost no decrease in esterase activity was observed at 60℃for 3 h,and over 40% of activity was still maintained after incubation at 90℃for 3 h.These results indicate that Geobacillus sp.ZH1 recombinant esterase was thermostable.The enzymatic activity was inhibited by the addition of phenylmethylsulfonyl fluoride,indicating that it contains serine residue,which plays a key role in the catalytic mechanism.Except SDS and xylene,this esterase showed stability toward other tested detergents and organic solvents.Cloning,expression,and biochemical characterization of Geobacillus sp.ZH1 carboxylesterase lay a good foundation for its structural characterization and industrial application.     

毛细管气相色谱法测定海带提取多糖中的L-褐藻糖含量

建立快速而准确灵敏的方法测定海带(Laminaria japonica)提取多糖——褐藻多糖硫酸酯中的L,褐藻糖含量。海带多糖经酸解后,转化成糖腈乙酸酯衍生物。采用SGEAC225毛细管柱进行分离,实验中以肌醇为内标物。从青岛产海带提取的褐藻多糖硫酸酯中仅含有L,褐藻糖和I)-半乳糖2种单糖,样品10-1,10-2,10-3,1阻4中的L褐藻糖的平均含量分别为32．9072％,32．3147％,31．2924％,32．3571％,回收率为97．1％～99．9％,变异系数为0．23％～0．60％。采用气相色谱法测定海带多糖中的L褐藻糖含量准确、可靠。     

菜粕、棉粕替代豆粕对奥尼罗非鱼(Oreochromis niloticus×O.aureus)生长、体组成和免疫力的影响

在一种实用饲料配方(粗蛋白28%,豆粕18%)的基础上,用菜粕、棉粕按1∶2的比例等量替代豆粕(6%、12%、18%)作为蛋白源配制成三种等能等氮的无鱼粉饲料,在室内饲养奥尼罗非鱼[Oreochromis niloticus×O.aureus,平均体重为(4.22±0.09)g]8周。结果表明,菜粕、棉粕替代不同水平豆粕对罗非鱼的生长、饲料利用和机体免疫力均产生了显著的影响(P<0.05)。随菜粕、棉粕替代水平的增加,罗非鱼的生长、饲料利用和体蛋白含量均显著下降(P<0.05),而以无豆粕组影响最大。鱼体肝脂含量、肝体比(HSI)以及脏体比(VR)在组间差异不显著(P>0.05)。无豆粕组血清GPT、GOT酶活力显著升高(P<0.05),而血清SOD、LZ酶活力显著降低(P<0.05)。配方中棉粕和菜粕的总量超过52%对罗非鱼是不安全的。     

液体黄原胶水包油钻井液研究

水包油钻井液作为一种深井低密度欠平衡钻井液流体,适用于低压低渗透地层的施工。通过调研国内外低密度水包油钻井液的发展状况,进行液体黄原胶水包油钻井液的室内试验。根据钻井液体系的不同,将试验分为5组,试验研究了液体黄原胶不同添加量对各组钻井液体系乳化性和流变性的影响。试验结果表明,随着液体黄原胶量的增加,各钻井液体系乳化性逐渐变好,流变性能得到了改善。通过对试验结果的分析,优选出聚磺水包油钻井液体系配方,该体系润滑性比较好,现场施工工艺较为简单;优选出低密度充气钻井液体系配方,该体系适用于欠平衡压力钻井,能够有效地保护储层。     

三角褐指藻滤液提取物对东海原甲藻和盐藻生理特性的影响

在实验室培养条件下,利用流式细胞仪从细胞生长、细胞大小、细胞膜完整性、酯酶活性等方面分别研究了三角褐指藻（Phaeodactylum triconutum）滤液提取物对东海原甲藻（Prorocentrum donghaiense）和盐藻（Dunaliella salina）为期6 d生物培养过程中生理特性的影响。结果表明,三角褐指藻滤液乙酸乙酯提取物对东海原甲藻表现出强烈的生长抑制作用,荧光检测显示,其能刺激细胞体积的增大,导致部分藻体细胞膜受损,酯酶活性在短时间内增强,随后受到显著抑制。而提取物对盐藻的生长抑制并不明显,盐藻细胞体积没有受到影响,细胞膜保持了高度完整,酯酶活性在第6天时才受到抑制作用。以上分析表明,东海原甲藻对三角褐指藻滤液乙酸乙酯提取物更加敏感,特殊的细胞内部结构特征有利于化感物质进入东海原甲藻的体内,直接导致藻细胞的死亡。化感物质引起的不同的生理响应中,酯酶活性指标具有更好的敏感性,是在环境压力下生物自我保护的一种应急方式。     

黄原酯棉富集-冷原子吸收法测定水和地质样品中的痕量汞

研究了黄原酯棉富集Hg的最佳条件,用黄原酯棉富集-冷原子吸收法测定水和地质样品中的痕量Hg,方法灵敏、快速。     

丙烯酸三溴苯酯新合成方法的研究

设计了一种新的合成路线。采取先加成后消除的两步法,使产率大幅度提高,总产率达90％,并经过条件实验,确定了最佳反应条件,选择了较理想的后处理方法,使制备工艺简单易行。     

水溶性甲壳素的制备

本文探讨了不溶性甲壳素的最佳制备条件。用甲酰胺和氯磺酸化甲壳素，并确定最佳的磺化温度和磺化时间，可得到含硫量１０％以上的甲壳素硫酸酯。这是一种具有多种用途的添加剂。