实时定量RT-PCR方法检测太平洋牡蛎中的诺沃克样病毒

建立了Taqman 实时定量RT-PCR方法检测诺沃克样病毒(Norwalk-like Virus,NLV)的方法,并对中国的牡蛎样品进行了分析.选取GⅡ型NLV的RNA聚合酶区域,利用Primer Express 2.0软件设计引物和探针,建立了定量RT-PCR反应体系.将含有NLV扩增片段的质粒10倍梯度稀释,作为标准品进行反应以确定检测灵敏度并制备标准曲线.结果表明,质粒密度在6×106,6×105,6×104,6×103,6×102,6×101,6个拷贝之间,共7个数量级的范围内,定量RT-PCR反应都有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为6个拷贝.制备的标准曲线中,病毒拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct = -3.36lg X 37.11,相关系数R2=0.998.对中国37批太平洋牡蛎(Crassostrea gigas Thunberg)样品进行了定量检测,有6批样品为阳性,并根据标准曲线测定了NLV的含量.     

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)鳃细胞膜蛋白与WSSV的结合活性以及BP53的初步研究

实验提取了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的鳃细胞膜并采用2种非离子型表面活性剂TritonX-100和Tween-20增溶鳃细胞膜,通过ELISA方法证实增溶后的对虾鳃膜蛋白与WSSV有结合活性,对其中1种鳃膜蛋白BP53进行了MALDI-TOF-MS-MS质谱测序,并且经BLASTP对其保守域进行了分析,结果表明BP53鳃膜蛋白与ATP ase-β-subunit同源性最高。     

口蹄疫病毒VP1植物表达载体的构建

P1-T重组质粒上含有口蹄疫病毒(FMDV)GD10分离株的p1 cDNA片段，以此为模板，用PCR方法扩增其中的VP1基因，获得大小约640bp的片段。该片段用BglⅡ和BstEⅡ酶切消化后克隆至表达载体pCAMBIA1305．2，转化Ecoli TOPIO感受态细胞。重组质粒经PCR、酶切及序列分析，证实VP1基因处于CaMV35S启动子控制，且读码框正确。     

“克毒丹”和“虾丹特”提高斑节对虾成苗率的初步探讨

１９９３年,全球虾病大流行,使虾产量下降１２％,而我国虾病则从南到北发生了空前的大暴发,致使年产量大幅度地下降了一半以上［１］,因而养虾业遭受惨重损失。据分析,这次虾病流行的原因主要有：工农业和生活污水污染沿海,使养虾业直接受害;虾池老化,自净能力较差;对虾育苗滥用抗菌素,致病菌因而获得抗药性;更为严重的是,有多种病毒性病原侵害对虾苗种和成虾,致使对虾的抗病机能减弱,当减弱到一定的程度时,加上环境、水质、营养和细菌等不良因素,使虾病暴发,在短时间内遭受毁灭性的打击。目前,已发现的对虾病毒共１０余…     

利用流式细胞仪计数微型浮游生物的方法

微型浮游生物(细胞粒径20μm)在水生生态系统的物质循环和能量流动中起着重要的作用,对其丰度的准确测定是进一步研究微型浮游生物在不同水生生态系统中作用的重要基础.相对于传统的显微镜检测技术,流式细胞术不仅具有分析速度快、灵敏度和准确度高等优点,而且可以同时测量单个细胞的多个生理参数.不同类型微型浮游生物流式细胞术的应用原理是不同的.对于自养型浮游藻类,主要根据藻体内色素的自发荧光对其进行分辨和计数;而对于异养型细菌、原生动物及浮游病毒等,还需借助外源荧光染料对细胞核酸染色后再进行分析.目前流式细胞术已成为浮游藻类和异养细菌丰度检测的常规方法,但是,由于原生动物具有更大的细胞体积且在自然水体中丰度较低;而浮游病毒粒径又太小,甚至低于光源激发波长,因此流式细胞术应用一直受到限制,直到近10年来才有相关报道.本文对运用流式细胞术计数浮游藻类、浮游细菌、原生动物和浮游病毒的具体原理、方法和进展进行综述,并对流式细胞仪在未来水生微生物学领域的应用进行展望.     

虾池中桡足类及其休眠卵携带对虾白斑综合症病毒的初步调查研究

探讨对虾白斑综合症(White Spot Syndrome WSS)与虾池中桡足类之间的关系,于2003年5~10月份,在暴发过对虾白斑综合症的池塘中采集桡足类样品共128个,并从冬季底泥样品分离出桡足类休眠卵样品20个,以及此种休眠卵孵化得来的桡足类幼体样品5个。利用PCR斑点杂交法以及巢式PCR法检测样品中对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus WSSV)携带情况。结果表明,5~10月份桡足类样品中均能检测到阳性样品,总的阳性率为56.3%;其中,5月份样品阳性率为37.5%,6,8,9,10月份各取样1次,每次样品中的阳性率均在60%以上。在20例桡足类休眠卵样品中有1例为阳性,阳性率为5%;并且实验室中孵化此种休眠卵得来的桡足类幼体样品中检测到阳性,阳性率为40%。本研究初步表明,桡足类是WSSV的携带者或传播媒介之一,且冬季池塘底泥中携带WSSV的桡足类休眠卵可萌发出带病毒的桡足类。     

浅谈业务网络安全

1引言随网络技术的发展,人们对业务网络的安全也越加重视。尤其最近暴发的“红色代码”、“蓝色代码”及“尼姆达”等病毒,加深了认识网络安全的重要性。网络的生命在于其安全性。因此,如何在现有的条件下,搞好网络的安全,成了网络管理人员的一项重要任务。下面结合对WINDOWS NT网络管理的一点经验与体会,在技术方面提出对业务网安全的一些看法。