军曹鱼（Rachycentron canadum）生长激素基因cDNA的克隆和原核表达

运用同源克隆方法,从军曹鱼脑垂体中分离了生长激素基因（GH）的全长cDNA。结果表明,该基因cDNA全长862bp,含615bp的开放阅读框（ORF）,编码204个氨基酸;其中包括22个氨基酸的信号肽和182个氨基酸的成熟肽。采用T-A克隆构建pMD18-T-CoGH重组质粒,测序正确后经Nde I和Xho I双酶切获...     

壬基酚对罗氏沼虾血清中免疫酶活力的影响

将罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)在0.1、0.2、0.4 mg/L的壬基酚中暴露48 h,检测壬基酚对罗氏沼虾血清中部分免疫酶活力的影响。结果表明:高剂量壬基酚组(0.4 mg/L)的罗氏沼虾血清超氧化物歧化酶(SOD)活力在前期受到明显抑制(p<0.05),24 h后各剂量组血清SOD活力转为促进,中、高剂量组的SOD活力显著高于对照组(p<0.05);中、低剂量组血清中酸性磷酸酶(ACP)活力均受到抑制,其中12 h低剂量组血清ACP活力显著降低(p<0.05),高剂量组则表现为先促进后抑制的效应;各剂量组血清碱性磷酸酶(AKP)活力先受到抑制后转为促进,48 h中、低剂量组血清AKP活力显著高于对照组(p<0.05)。     

金钱鱼Zar1基因克隆及其表达分析

【目的】分析金钱鱼(Scatophagus argus)卵巢发育过程重要基因——合子阻滞因子1(Zygote arrest 1,Zar1)组织表达及其在卵子成熟和胚胎发育过程中的表达。【方法】克隆金钱鱼Zar1基因,采用反转录-PCR(RT-PCR)检测其在各组织的分布情况,实时荧光定量PCR(q PCR)研究Zar1在不同卵巢发育时期和胚胎发育过程中的表达。【结果】金钱鱼Zar1的开放阅读框(ORF)序列全长为1008bp,编码335个氨基酸。序列分析发现,金钱鱼Zar1在蛋白C末端高度保守,具有非典型的PHD基序(Plant homeo domain)和锌指结构域。金钱鱼Zar1同源性分析发现,它与鲈形目物种相似度最高,其中大黄鱼(Larimichthys crocea)相似性最高,为85.1%。系统进化树分析显示,金钱鱼Zar1与大黄鱼亲缘关系最近,与其分类地位一致。组织分布发现,金钱鱼Zar1仅在卵巢中表达。Zar1在II、III和IV期卵巢表达呈现逐渐递增趋势,其中IV期表达水平显著高于II期卵巢。Zar1在胚胎发育早期表达较高,后期较低,其中在四细胞期表达水平最高,之后逐渐降低。【结论】金钱鱼Zar1在卵巢和胚胎期表达,在金钱鱼卵子发生和胚胎发育阶段发挥重要作用。     

黄鳍鲷不同组织同工酶的研究

运用聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳法对黄鳍鲷的7种组织(心肌、肝脏、肾脏、肌肉、性腺、脾脏、脑)进行了4种同工酶(EST,LDH,MDH,ME)的初步研究,并对几种酶的同工酶位点及酶谱表型进行了分析。结果表明：黄鳍鲷的4种同工酶系统具有明显的组织特异性。同时还分析了聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳法对同工酶电泳的分离效果,认为该种方法对同工酶系统的分辨率高,分离效果好,可得到更精确的结果。     

金钱鱼cyp17a1基因克隆、组织分布及在卵巢发育中的表达

【目的】克隆金钱鱼cyp17a1基因,分析其在组织中的分布、卵巢不同发育时期中的表达变化,为金钱鱼繁殖生物学提供理论依据。【方法】通过金钱鱼转录组文库筛选和RT-PCR进行cyp17a1 c DNA序列扩增;用DNAstar软件比较Cyp17a1同源性,MEGA5.0构建系统进化树,RT-PCR检测cyp17a1组织表达,实时定量PCR检测不同卵巢发育时期cyp17a1的表达量。【结果】金钱鱼cyp17a1开放阅读框编码515个氨基酸残基;Cyp17a1氨基酸序列与同属鲈形目鱼类Cyp17a1同源性较高(87.8%～92.7%),与大黄鱼最高(92.7%),与其他目鱼类同源性次之(72.7%～85.0%),与硬骨鱼类Cyp17a2或Cyp17a1-like同源性最低(48.2%～51.7%);所有硬骨鱼类Cyp17a1聚为一支,在Cyp17a1分支中,金钱鱼与鲈形目鱼类聚为一支;cyp17a1在性腺中表达量较高,在精巢中表达最强;在肝、脑和头肾表达较弱;在脾脏、肠、心脏、肌肉和鳃中未检测到表达;卵巢中cyp17a1的表达量随卵巢发育逐渐增加,Ⅳ期卵巢中cyp17a1表达量最高。【结论】cyp17a1在性腺中表达量较高,在金钱鱼卵巢发育过程中有重要作用。