PCR引物设计

多聚酶链式反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）又称无细胞分子克隆系统，是一种体外扩增特异ＤＮＡ片断的技术，１９８５年由美国Ｃｅｔｕｓ公司和加利福尼亚大学联合创建，是９０年代分子生物学领域的一项革命性突破，很快地在分子克隆、遗传病的基因诊断、法医学、考古学等方面得到了广泛应用。ＰＣＲ技术实际上就是在模板ＤＮＡ（ＴｅｍｐｌｅｔｅＤＮＡ）引物（Ｐｒｉｍｅｒ）和４种脱氧核糖核苷酸（ｄＡＴＰ，ｄＧＴＰ．ｄＣＴＰ，ｄＴＴＰ）存在的条件下依赖于ＤＮＡ聚合酶（Ｔａｑｓｅ）的酶促合成反应…     

用于基因表达调控及蛋白定位研究中的新型标记——绿色荧光蛋白

绿色荧光蛋白(Green-fluorescentprotein,GFP)是许多腔肠动物所特有的生物荧光素蛋白。1971年,J.G.Morin等[8]发现维多利亚水母(Aequoreavictoria)发出的绿光不是缘于水母发光蛋白,而是另一种蛋白——GFP造成的。1974年,Morise等[9]首次证明在维多利亚水母体内发出的绿光,是钙离子激活的水母荧光蛋白(发蓝光)将能量传递给GFP后产生的,GFP是一种接收及最终放射能量的物质,所接收的能量来自荧光素酶-氧化荧光素的复合体或钙离子激活的发光蛋白。纯化的GFP,是具有238个氨基酸,分子量为26888Da的单体蛋白[10]。GFP的构像十分稳定[11],…     

鲈鱼群体生化遗传学研究Ⅱ.种群生化遗传结构及变异

1995年6月—1996年5月分别在汕头及青岛收集共100尾鲈鱼生化样品，采用淀粉胶及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了鲈鱼17种同工酶，记录出31个基因座位，统计了基因频率。结果表明，2群体间遗传相似度和遗传距离分别为0.9920和0.0080。作者初步认为中国近海鲈鱼为1个种，分南、北2个种群。汕头种群多态座位比例为22.6%，青岛种群为25.8%。x2检验表明，2个群体多态座位等位基因频率除汕头的Est-4外均符合Hardy-Weinberg平衡。汕头与青岛种群平均杂合度分别为0.079和0.099，表明目前鲈鱼种质资源状况尚好，但当前捕捞鲈鱼苗的压力过大，应严格控制鲈鱼苗的捕捞，以免因滥捕仔稚幼鱼而导致资源衰竭。     

牙鲆外周血细胞的超显微结构观察研究

鱼类的外周血细胞是其免疫系统的重要组成部分，对于血细胞形态与结构的观察，有助于更好地理解鱼类免疫机理。作者在实验中发现，不同鱼类血细胞的种类及其结构并不完全相同，因此，有必要进行大量的实验以确定鱼类外周血细胞的组成是否可以反映其种间差异。 牙鲆是中国重要的海水经济鱼类，目前有关其血细胞的形态学的研究尚未见报道。本文以牙鲆外周血细胞为材料研究其超显微结构，以便能准确地了解牙鲆血细胞的分类及不同血细胞的形态结构。     

牙鲆鱼胚胎和仔鱼显微摄影方法

生活在海洋中的硬骨鱼类 ,所产卵子一般为浮性卵 ,即卵内有一至多个油球 ,使卵子能浮于水面。此时的卵子 ,卵黄向上 ,胚盘向下 ,呈倒悬状态。在研究海水硬骨鱼的胚胎发育时 ,如果仅仅观察发育状态 ,还可以做到 ;但如果想把各发育时期的胚胎拍摄下来 ,则非常困难。张崇理１９５９曾使用冻粉 (即琼脂 )来夹住卵子以达到观察的目的。具体做法是 :将１．３%的琼脂倒入培养皿中 ,冷却后在琼脂上挖一稍小于卵子的小槽或小窝 ,加上海水 ,把卵子夹在里面 ,这样就可以把卵子倒转过来。不过倒转过来的时间不能太长 ,由于油球比重低的缘故 ,卵子仍可在…     

鱼类微卫星标记的研究进展

微卫星DNA(microsatellite DNA),又称短串联重复(short tandem repeats,STRs)、简单序列重复(simple sequence repeats,SSRs),由2~6个碱基对的核心序列串联重复而成,与其它常用的分子遗传标记(例如同工酶、RFLP、RAPD、AFLP)相比,微卫星标记具有座位数目巨大并随机分布于基因组     

大菱鲆的受精细胞学研究

对大菱鲆（Psetta maxima）的受精过程进行细胞学观察发现,大菱鲆从精子入卵、皮层反应、卵母细胞第二次成熟分裂排出第二极体、雌雄原核形成与融合,直到舍子进行第一次有丝分裂,与其他已经报道的硬骨鱼的受精程序基本相同。在受精的整个过程中所有观察过的受精卵都只发现一个精子形成原核,并最终与卵原核结合形成舍子,由此判断大菱鲆的受精方式是单精受精。     

牙鲆Myogenin蛋白在大肠杆菌中重组表达的研究

采用大肠杆菌表达系统及pProEXTMHTc表达载体对牙鲆肌肉发生调节因子myogenin基因进行了体外重组表达研究。通过对诱导时间、IPTG诱导浓度以及诱导温度的优化,确定了最佳诱导条件为:诱导温度31℃,IPTG终浓度0.6mmol/L,诱导时间2 h。在该条件下,重组蛋白表达量最高且是可溶性的。Myogenin融合蛋白的成功表达为进一步深入研究其在牙鲆肌肉发育过程中的分子机制奠定了基础。     

星斑川鲽(Platichthys stellatus)养殖群体的RAPD分析

利用RAPD技术对星斑川鲽养殖群体的遗传多样性进行了研究。将实验用星斑川鲽养殖群体的活鱼苗解剖,取其肌肉,高盐法抽提获得总DNA,质量鉴定和浓度测定后用随机引物进行PCR扩增,从20个随机引物中筛选出18个用于群体遗传学分析,共扩增出133条带,谱带大小为100~2 000 bp,大多数谱带分布在250~1 000bp。多态谱带数为83,每个引物扩增谱带数为1~14条,平均为7条。多态谱带比例为62.41%,Shannon的信息指数和Nei的多样性指数分别为0.21和0.316 6。     

半滑舌鳎和塞内加尔鳎养殖群体遗传变异的RAPD分析

采用RAPD方法对半滑舌鳎和塞内加尔鳎的养殖群体进行遗传变异分析。从78条随机引物中筛选出20条用于群体遗传学分析,2个群体共扩增出260条DNA片段,其中半滑舌鳎187条,塞内加尔鳎180条,片段大小为200-2 000 bp。半滑舌鳎和塞内加尔鳎养殖群体的多态片段比例分别为63.10%和60.56%,Nei的多样性指数和Shannon的信息指数分别为0.266 4和0.237 5,0.385 2和0.349 8。与其它鲆鲽鱼类养殖群体相比,半滑舌鳎和塞内加尔鳎养殖群体的遗传多样性水平略低;2种鱼群体间的遗传相似性系数和遗传距离分别为0.458 3和0.723 1,它们的遗传变异主要来自群体内。