企鹅珍珠贝Creb2基因的克隆及表达分析

CREB(cAMP response element binding protein)是一种真核生物中广泛存在的调控因子。为了探讨企鹅珍珠贝(Pteria penguin)Creb基因的序列和表达特征,为进一步阐述Creb的生理功能提供科学依据,本研究利用RACE-PCR技术克隆到企鹅珍珠贝一个Creb基因的全长序列,分析其理化性质和进化地位;利用荧光定量PCR分析Creb基因在各组织中的表达特征。结果表明,该企鹅珍珠贝Creb基因的c DNA全长为1484 bp,其中开放阅读框(ORF)为1071 bp,编码356个氨基酸,5′非编码区为218 bp,3′非编码区为195 bp,C端包含一个碱性亮氨酸拉链结构(basic region leucin zipper,b ZIP)。预测其分子质量为39.49 k D,等电点为4.43。序列比对显示该企鹅珍珠贝Creb基因与欧洲平牡蛎(Ostrea edulis)和太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)的Creb2同源性(identity)最高,分别为46.3%和46.1%,故命名为pp Creb2;系统进化树分析结果与传统形态学分类结果相吻合。荧光定量PCR分析显示,pp Creb2在企鹅珍珠贝的各个组织中组成性表达,其中在足中表达量最高,鳃中其次。     

企鹅珍珠贝同工酶表达多态性的初步研究

采用垂直板状聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳，对企鹅珍珠贝鳃组织的酯酶(EST)、葡萄糖-6磷酸脱氢酶(G6PD)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和超氧化物歧化酶(SOD)5种同工酶进行了检测，并对酶谱特征进行了生化遗传分析。酶谱表型显示企鹅珍珠贝的同工酶呈现多态现象，同工酶表达上的多态性表明企鹅珍珠贝具有较丰富的遗传多样性。     

3种江珧同工酶遗传标记

通过对江珧科的栉江珧、旗江珧及二色裂江珧三物种的 5种组织 (消化盲囊、肾组织、外套膜、后闭壳肌和鳃组织 )进行垂直板状聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术 ,研究江珧科的 SOD、EST同工酶酶谱 ,结果表明 ,不同种间的个体其酶谱表型有稳定的差异 ,同属的种间差异小于不同属的种间差异 ,即酶谱的差异程度与形态分类学中的亲缘关系相关。可利用其酶谱表型具有种特异性作为一种蛋白分子标记 ,应用于江珧物种尤其是经济品种的鉴定上     

两种江珧雌雄同体及性转换现象

通过对江珧科两物种栉江珧、二色裂江珧的性腺组织学切片观察 ,发现性转换及雌雄同体的个体 ,雌雄滤泡在性腺中分布有两种类型 ,一种为滤泡混合型 ,另一种为滤泡并存型。性变方向有雄性转化为雌性、雌性转化为雄性及两种性别均衡发育等三种类型 ,且以雄性转化为雌性为主。据此推测性变及雌雄同体在江珧科是较普遍存在的现象。     

栉江珧受精过程的细胞学研究

采用阴干、温差刺激诱导栉江珧亲贝排放和解剖亲贝获取精卵,授精后,通过连续取样直接镜检和卡诺液固定、Giemsa染色后观察,以研究栉江珧受精过程的细胞及染色体变化。结果表明,栉江珧成熟或接近成熟的卵,大多停留在第一次成熟分裂的前中期,接触海水后,进一步发育至中期。通常在26℃的海水中,授精后20min和35min,分别排出第一和第二极体。大约在授精后45min,雌雄原核融合,受精卵开始第一次卵裂。研究还表明,氨海水具有十分明显刺激卵内物质运动和促进卵细胞成熟的作用。