6种帘蛤科贝类及4个地理种群文蛤线粒体COI基因片段序列分析

对文蛤(Meretrix meretrix L.,1758)、青蛤(Cyclina sinensis G.,1791)、硬壳蛤(Mercenaria mercenaria L.,1758)、江户布目蛤(Protothaca jedoensis L.,1874)、薄片镜蛤(Dosinia corrugata R.,1850)和菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum A.,1850)6种帘蛤科贝类和4个地理种群文蛤(大连、连云港、湛江、防城港)的细胞色素c氧化酶亚基I(COI)基因片段的核苷酸序列进行了分析,以探讨这一序列在种质鉴定、种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值.测序结果表明,所有物种扩增片段长度均为709 bp,序列A+T含量(62.2%~67.6%)明显高于GC含量.物种间共有变异位点311个,其中简约信息位点202个;文蛤4个地理种群间共有变异位点46个,其中简约信息位点2个.此区段共编码235个氨基酸,种间共有氨基酸变异位点85个;文蛤种群间只有1个氨基酸变异位点.以COI基因片段序列为标记,用大竹蛏(Solen grandis)作外群,构建了帘蛤科贝类的系统发生树,其拓扑结构显示4个地理种群文蛤首先聚为1个单元,然后与青蛤聚在一起,最后所有帘蛤科物种聚为一枝,与外群相区别,其结果与传统形态分类基本一致,说明COI基因适合作为该科贝类种群遗传结构和系统发生研究的分子标记.     

文蛤遗传标记研究进展

文蛤(Meretrix meretrix),隶属于软体动物门(Mollousca)、双壳纲(Lamellibranchia)、异齿亚纲(Heterodonta)、帘蛤目(Veneroida)、帘蛤科(Veneridae),为广温、广盐性的滩涂埋栖型双壳贝类,是我国重要的海产经济种类,我国南北沿海均有分布,尤其在辽宁辽河口沿海、山东莱州湾沿海、江苏南部沿海、广西合浦沿海等资源最为丰富.     

帘蛤科4种养殖蛤群体遗传多样性和种间关系的fAFLP分析

利用荧光标记扩增片段长度多态性(fAFLP)技术对文蛤(Meretrix meretrix)、青蛤(Cyclina sinensis)、菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)和硬壳蛤(Mercenaria mercenaria)4种帘蛤科贝类的群体遗传多样性和种间关系进行了研究。选择EcoRⅠ/MseⅠ进行酶切,使用6个E 3/M 3引物组合进行扩增,共获得1 096个位点,多态位点比率95.1%,片段长度50~456 bp。其中,文蛤、青蛤、菲律宾蛤仔和硬壳蛤分别得到681,715,702和694个位点,相应的多态位点比率为76.8%,81.7%,83.0%和75.1%,得到17个种特异性位点,可作为4物种特征标记。分析了群体遗传相似系数和遗传多样性指数以及种间遗传相似系数。结果表明,硬壳蛤群体遗传相似系数最高(0.670 9),遗传多样性指数最低(0.236 0);菲律宾蛤仔群体遗传相似系数最低(0.592 5),遗传多样性指数最高(0.261 8);根据遗传相似系数采用UPGMA法构建了4物种32个体的聚类图,表明文蛤与菲律宾蛤仔遗传关系最近,青蛤与其他3物种遗传关系较远。     

文蛤属(Meretrix)16S rRNA基因及ITS1序列的系统学分析

利用线粒体16SrRNA基因片段及核糖体DNA转录间隔区ITS1序列分析的方法,以近缘属的青蛤(Cyclinasinensis)为外群,对文蛤属的文蛤(M.meretrix)、丽文蛤(M.lusoria)、帘文蛤(M.lyrata)和斧文蛤(M.lamarckii)4种贝类进行了系统学研究。经ClustalX多重比对及DNAsp软件分析后,用PAUP4.0分析软件,计算出种间序列的碱基转换/颠换频率,利用邻接法NJ构建系统发育树。结果表明,帘文蛤与该属其他三种的分歧时间较早,两类序列与其他种类间的相对遗传距离分别在0.25866—0.28218和0.15644—0.20104之间。文蛤与丽文蛤间的16SrDNA及ITS1序列间的遗传距离仅为0.04805和0.04201,拓扑结构图显示关系很近,并且二者的分布区大面积重叠,其序列间的转换/颠换频率接近种内单元型(haplotype)间的序列变化,鉴于它们的贝壳形态有一定差别,应归为同一个种内的不同地理亚种比较恰当。     

我国重要帘蛤科(Veneridae)贝类的16S rRNA序列系统学分析

本文对我国隶属于帘蛤科(Veneridae)10个亚科、17个属、20种贝类的16S rRNA基因片段进行了系统学分析, 上述动物的16S rRNA片段长度在438—648bp之间, 利用PAUP软件包在对序列比对基础上构建了邻接系统树(NJ)和最大拟然系统树(ML)。16S rRNA数据显示, 我国帘蛤科贝类由三个主要分支组成, 美女蛤亚科中的加夫蛤属(Gafrarium)可能是一个单型属, 该属与美女蛤属合并为加夫蛤属比较恰当。帘蛤亚科与雪蛤亚科应属于不连续的分类单元。另外, 青蛤亚科与仙女蛤亚科均应作为独立的亚科存在。本文的研究结论与修订后的帘蛤科形态分类观点一致。     

丽文蛤血清中外源凝集素的凝集性能

丽丽文文蛤蛤（（ＭＭｅｅｒｒｅｅｔｔｒｒｉｉｘｘｌｌｕｕｓｓｏｏｒｒｉｉａａ））属属瓣瓣鳃鳃纲纲 ,,帘帘蛤蛤科科 ,,文文蛤蛤属属。。是是沿沿海海滩滩涂涂养养殖殖的的主主要要品品种种之之一一 ,,内内含含丰丰富富的的蛋蛋白白质质。。具具有有高高营营养养、、易易养养殖殖的的优优势势。。但但随随着着丽丽文文蛤蛤养养殖殖的的连连年年持持续续 ,,其其病病害害的的发发生生率率正正逐逐年年提提高高。。而而凝凝集集素素作作为为软软体体动动物物体体内内参参与与体体液液免免疫疫的的重重要要免免疫疫因因子子 ,,其其在在免免…     

青蛤滩涂围网精养高产高效技术的研究

青蛤是我国南北沿海常见的经济贝类之一,属帘蛤族,帘蛤科,生活在浅海泥沙中。它不仅肉嫩味美,营养丰富,在国内外市场深受欢迎,而且还具有适应性广、抗污染能力强等优点,是发展滩涂养殖的良好品种。尤其在前几年海区赤潮影响严重,滩涂养殖文蛤大批死亡的情况下,发展青蛤养殖,越来越被沿海各级政府和养殖户所重视。     

帘文蛤精子超微结构及与其他双壳贝类的比较

利用扫描电镜和透射电镜技术,详细观察了帘文蛤（Meretrix lyrata）精子的形态和超微结构.研究发现,帘文蛤的精子为典型的原生型,全长42.2±1.8μm,包括头部、中段和尾部三部分.头部为稍弯曲的狭茧形,长约2.4μm,由前端的顶体和其后的细胞核组成,顶体呈倒＂V＂形,前端电子密度较小,后端电子密度较大;核内含有高度浓缩的染色质,可见染色较浅的核泡存在,无核前窝,有明显核后窝和植入窝.中段由5个呈辐射状排列的线粒体和中央的2个相互垂直的中心粒复合体构成,线粒体近球形,由内、外两层膜组成.尾部鞭毛长39.3±1.9μm,由波浪状质膜和包裹其中的轴丝组成.另外,将帘蛤科（Veneridae）尤其是文蛤属（Meretrix）贝类精子超微结构与其他贝类进行了比较和分析,为文蛤属的种类鉴别提供细胞学依据.     

胶州湾两种习见帘蛤(Venerupis semidecussata和Venerupis philippinarum)的生殖周期

1.为进行生殖周期研究的需要,本文首先对胶州湾两种习见帘蛤动物的种名重新进行了鉴定,发现其中原来定名为杂色蛤Venerupis variegata的一种应是半叉蛤V.semidecussata。其另一种仍为蛤子V.philippinarum。 2.本文以组织学和细胞学方法为主,研究了胶州湾两种习见帘蛤动物的性腺发育周期,并根据性细胞的发育过程,把它们的性腺发育周期分为:A(增殖期)、B(生长期)、C(成熟期)、D(生殖期)、E(后生殖期)等五个时期。 3.半叉蛤和蛤子雌性腺发育周期的形态学过程彼此完全没有什么差别。此外,两者雄性腺体的发育也有同样表现。这些都是我们进一步考虑它们两者分类关系的依据。 4.结合性腺组织学检查、室内自然产卵观察,人工授精实验、性腺发育指政(平均体重与平均壳长比值)的测定和性腺解剖观察等方法所获得的结果,可以肯定胶州湾半叉蛤和蛤子的生殖周期是一年一次。其生殖季节是从9月上旬到10月中旬,共约一个半月左右的时间。 5.在雄性个体产卵以后,泡囊内仍然残留一部分卵子。鉴于大量吞噬细胞的侵入,这部分卵子继续成熟和产出的可能是不大的。 6.雄性排精活动可能较产卵时间要长一些。甚至到12月底前后,仍有个别个体的泡囊内残留极少精子。但新精子的产生必须到4月初旬左右才能开始。 7.在卵母细胞早期发育过     

中国近海蛤仔属的研究

软体动物帘蛤科的蛤仔属Genus Ruditapes在中国近海发现有两种。一种是菲律宾蛤仔Ruditapes philippinarum (Adams et Reeve)，另一种是杂色蛤仔R. variegata (Sowerhy)。菲律宾蛤仔在我国沿海分布广，天然产量很大，是我国水产捕捞和养殖的重要贝类。 十多年来，国内对这两种蛤仔的鉴别以及属名、种名的采用都存在混乱现象。归纳起来有以下三个问题:1.我国的蛤仔，特别是黄渤海沿岸的蛤仔是一种还是两种; 2.菲律宾蛤仔和杂色蛤仔在我国的分布情况怎样; 3.这两种蛤仔的外部和内部形态有什么区别。 针对上述三个问题，我们从外部和内部(组织切片)形态学的研究，对菲律宾蛤仔和杂色蛤仔进行比较，搞清了这两种蛤仔的主要区别和它们在我国沿海的分布情况。 我们检查了我所历年来在我国沿海采到的共325号3730个标本。切片材料，菲律宾蛤仔采自青岛，杂色蛤仔采自海南岛三亚，各自在软体部的相同部位取材，用70%酒精、10%福尔马林或波恩(Bouin)氏液固定，石蜡包埋，切片厚度8-12μ。Ehr1ich氏苏木精-伊红(H. E.)染色法或Mallory 氏染色法染色。     

不同种群泥蚶的5种同工酶研究

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对韩国自然种群、广西自然种群、乐清自然种群、山东自然种群和乐清养殖种群泥蚶的苹果酸脱氢酶(MDH)、过氧化氢酶(CAT)、醇脱氢酶(ADH)、苹果酸酶(ME)和超氧化物歧化酶(SOD)等5种同工酶进行分析比较。结果表明,不同种群泥蚶的ME同工酶无差异;ADH和SOD同工酶除韩国自然种群泥蚶外,其它4个种群泥蚶无差异;MDH同工酶除乐清自然种群和养殖种群泥蚶外,其它3个种群泥蚶均有差异;CAT同工酶在广西自然种群泥蚶中没有表达,在韩国自然种群泥蚶与山东自然种群、乐清自然种群和乐清养殖种群泥蚶中有一定差异。     

贝类同工酶技术的应用研究进展

对近年来同工酶技术在贝类个体发育、组织特异性、亲缘鉴定、形态分类、群体遗传及生理病理诊断等方面的应用研究进行了系统总结和综合评述,为今后进一步开展研究贝类的生物遗传和养殖生产提供参考。     

翡翠贻贝三个野生群体的生化遗传分析

采用聚丙烯酰胺梯度凝胶垂直平板电泳对湛江、北海和汕尾三地翡翠贻贝(Perna viridis)野生群体10种同工酶21个的位点的生化遗传特性进行分析.分析结果表明8个位点(Alp-1, Alp-2, G6pdh-1, Me-1, Me-2, Sdh-1, α-Est-5, β-Est-2)具有多态性.湛江、北海、汕尾群体的多态位点比例分别为0.381,0.286,0.381,平均期望杂合度分别为0.6 097, 0.5 407和 0.6 893.群体内杂合度较高,遗传多样性较丰富.群体间的基因分化系数在 0.0 140 ～ 0.0 389 范围内,北海和湛江群体间,湛江和汕尾群体间以及北海和汕尾群体间的遗传相似性分别为0.9 838,0.9 861 和 0.9 630; 聚类分析表明湛江和汕尾群体遗传距离极小,而与北海群体分歧稍明显.上述的结果表明,翡翠贻贝 3 个群体种质资源遗传多样性依然处于良好状态.     

Isozyme changes during larval development of Penaeus chinensis

Isozyme changes during early development of Penaeus chinensis are described for six enzymes (EST, AMY MDH, GDH, Gd and LDH) by means of polyacrylamide gel vertical plate electrophoresis. The results show that the number of isozymes varies considerably and the enzyme activity also rises gradually with development. The band number of EST increases from 1 in nauplius stage to 6 in postlarval stage. There are three types of AMY, α-AMY, R-AMY and Q-AMY. The phenotype of LDH changes slightly, showing the same pattern except nauplius in all the stages. The remaining three enzymes (MDH, Gd and GDH) have more bands and their isozyme number also increases with development.     

泥蚶同工酶谱在不同组织的差异研究

用聚丙烯酰胺电泳法对泥蚶5种组织中的19种同工酶进行检测分析,发现除其中4种酶未显示任何有活性的区带,两种酶只显示极微弱且不稳定的区带外,其他种酶类在各个组织中都显示出清晰稳定的图谱,且这些酶在分布和活性上均表现出高度的组织特异性,说明泥蚶组织中已存在相当丰富和完整的酶系统,基本具备了与高等动物相类似的机体代谢方式,而且这些酶基因的表达存在着组织分布上的自我调控机制.同时与其他贝类和高等动物相比,泥蚶的同工酶基因的表达既表现出了与其分类地位相一致的特征,又反应出在分类阶元上的特殊性.     

硬壳蛤同工酶的组织特异性研究

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对硬壳蛤5种组织(足、外套膜、闭壳肌、鳃和肝)的酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(M DH)和乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行了比较研究,并对酶谱表型及位点表达进行了分析。结果表明,硬壳蛤上述组织的EST和M DH同工酶存在不同程度的组织特异性,而LDH没有组织特异性。在EST酶谱中,肝组织染色最深,说明其EST活性最高,这与肝脏为重要的消化腺和解毒器官相适应。在M DH酶谱中发现了s-M DH和m-M DH所形成的谱带,闭壳肌的M DH谱带染色很深,这与肌肉需要由三羧酸循环提供大量ATP相适应。     

中华绒螯蟹不同发育阶段腹肢粘液腺同工酶的比较

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对中华绒螯蟹不同发育阶段(幼蟹、未成熟蟹、成熟蟹及抱卵蟹)腹肢粘液腺的乳酸脱氢酶(LDH)、醇脱氢酶(ADH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、过氧化物酶(POD)、酯酶(EST)及淀粉酶(AMY)等同工酶进行研究。结果表明不同发育阶段中华绒螯蟹腹肢粘液腺中，LDH同工酶的表达较稳定，均只有一条酶带，酶活性呈逐步减弱趋势，至抱卵蟹时活性又增强；ADH同工酶在不同发育阶段酶带数及酶活性也呈减少趋势，至抱卵蟹时又重新增加；MDH同工酶有m-MDH和s-MDH两种类型，其比值随发育阶段不同有一定变化；不同发育阶段POD同工酶活性均较弱；EST同工酶至抱卵蟹时酶带数最多，活性相对最强；AMY同工酶随不同发育阶段，酶带数及酶活性呈逐步复杂趋势。     

尖刀蛏和小荚蛏不同组织同工酶的比较分析

通过聚丙烯酰胺凝胶垂直板不连续电泳对尖刀蛏外套膜、鳃、肝胰腺和足等4种组织和小荚蛏外套膜、足和内脏团等3种组织的9种同工酶进行研究。结果表明,两种蛏相应组织不同同工酶的分布既具一定组织特异性,也存在一定种属特异性,且两种蛏的种属差异明显大于同种蛏的组织间差异。其中,尖刀蛏与小荚蛏在足组织间差异最大,而尖刀蛏肝胰腺与小荚蛏内脏团两组织间的差异相对较小。由于不同种蛏各具其稳定的酶谱表型,故可利用两种蛏同工酶酶谱表型的特异性作为蛋白质分子标记而应用于刀蛏科不同属蛏的物种鉴定。     

不同地理品系卤虫的同工酶变异初步研究

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，对国内外不同生态地区的孤雌生殖和两性生殖卤虫进行了酯酶（ＥＳＴ）、四唑氧化酶（ＴＯ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）同工酶变异分析。指出不同地理品系卤虫有其独特的ＥＳＴ和ＴＯ标志酶带；孤雌生殖卤虫具有与两性生殖卤虫显著不同的ＴＯ基本带型和ＡＬＰ标志带区。这些结果为卤虫地理品系的纯度鉴定，以及两种生殖方式卤虫的分类和鉴别提供了生化指标。     

大黄鱼肌浆蛋白和肝酯酶同工酶的电泳分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术,对大黄鱼肌浆蛋白(Pm)和肝酯酶(EST)同工酶进行研究。结果表明,大黄鱼的Pm电泳酶谱不存在个体间差异,而肝EST酶谱复杂,Est-2和Est-3为多态位点。X2检验表明,这两个多态位点等位基因频率都符合Hardy-Weinberg平衡。