鲻鱼精子发生的组织学研究

本文报道用组织学方法研究了不同季节鲻鱼的精巢结构和精子发生过程。结果表明，鲻鱼精巢属于叶状结构。根据精子发生的特点，分为5个时期：精原细胞增殖期、初级精母细胞期、次级精母细胞期、精子形成期和精子成熟期。依雄性鲻鱼精子发育和成熟的季节来看，厦门鲻鱼繁殖季节为每年11－12月，系一次性排精类型。文中详细描述各级生精细胞的特征，并讨论了Sertoli细胞在精子发生中的生理作用。     

17α—甲基睾酮对赤点石斑鱼性逆转的影响：卵细胞退化过程的观察

在非繁殖季节,将17α-甲基睾酮拌入饲料中,喂低龄和高龄组赤点石斑鱼,持续58d,可诱发其卵细胞的退化。本文较详细地观察了卵细胞的退化过程:即17αMT抑制卵细胞发育,而后出现核变形,在胞质中开始出现小的空泡,随着激素效应时间的延长,而出现核膨胀、扩张和核仁空泡化,胞质中空泡扩大、固缩而最后崩解。与此同时,17αMT 激发精子发生。这些观察有助于分析17αMT 引起性逆转的作用机制。     

大西洋鲑雄鱼活体和离体分泌性类固醇激素的研究

10月份,大西洋蛙Salmo salar流精雄鱼血清中11-氧睾酮(11-OT)的含量升高到23.2±7.12ng/ml,明显地较睾酮水平4.7±1.42ng/ml为高,并含有一定量的17α20β-双羟孕酮(17α20βP),为7.6±2.45ng/ml;而9月份血清中17α20βP的含量低于0.1ng/ml。 用部分纯化的大麻哈鱼Oncorhynchus keta的促性腺激素(GTH)0.1μg/ml和1μg/ml进行大西洋鲑成熟精巢的离体培育,持续6天,定时间隔作培养液取样,进行测定。 GTH明显地促进11-OT释放,并达到相当高的水平。培养液中睾酮和雄烯二酮的浓度仅略为升高;孕酮和17α-羟孕酮的浓度水平都较低,与对照组相差不大。在离体培育两天后,GTH诱发17α20βP迅速升高。培养液中11-OT、17α20βP、睾酮和雄烯二酮浓度的升高与GTH剂量大小无明显的依赖关系。     

外源激素诱导赤点石斑鱼雄性化

以每次剂量为体重的５×１０＾－＾６（ｍ／ｍ）１７ａ－甲基睾酮（１７α－ＭＴ）投喂２－４龄赤点石斑鱼，成功地促使其提早３－４ａ性转变为具有生殖功能的雄性鱼。经５０ｄ投喂药饵４６次，累积总剂量达到鱼体重的２４１．３×１０＾－＾６（ｍ／ｍ）时，性腺中的卵巢组织萎缩，绝大部分卵母细胞已退化；精巢组织发达，间质细胞数量增多，精小囊内充满成熟精子，雄性化率达１００％。实验组的流精率为９３．５％。雄性化后的平均     

水温对文昌鱼生殖活动的影响及其内分泌机制

采用慢性实验方法,研究在不同水温条件下饲养性腺发生前的文昌鱼(Branchiostoma belcheri)对其性腺分化和发育的影响。另外,在繁殖季节研究在低温16℃、中温22℃和高温28℃下饲养性成熟的文昌鱼对其产卵和排精的影响。同时,采用免疫组织化学方法对几种生殖相关激素在不同发育期文昌鱼的生殖调控轴(脑-哈氏窝-性腺)中的分布进行免疫识别,并用磁酶免定量测定方法检测睾酮和17 β-雌二醇在文昌鱼性腺中的含量,以分析和探讨水温影响文昌鱼生殖活动的内分泌机制。结果表明:低温有利于文昌鱼性腺向雌性分化,雌雄比例为4.2:1,中温和高温组则不受影响,雌雄数量大致相等。高水温则有利于文昌鱼的精巢发育和生精活动。28℃海水适于文昌鱼的产卵和排精。根据免疫组织化学和磁酶免定量测定的结果分析提示,温度影响文昌鱼性别分化和发育以及繁殖活动的内分泌机制是:首先水温经皮肤或哈氏窝化学感受器,刺激神经系统(脑泡)释放GnRH。然后GnRH促进哈氏窝分泌LH,从而可能刺激性腺产生和分泌性类固醇激素,始动文昌鱼性腺的发育至成熟及其生殖活动。此外,脑中芳香化酶可能介导文昌鱼性别分化。     

17α-甲基睾酮刺激鲻鱼精子发生机制的初步研究

在非繁殖季节,将17α-MT混入颗粒饵料,饲喂性腺未成熟的鲻鱼,对照组喂含酒精饵料,每日投饵一次,连续6周。研究结果表明:(1)实验后第二周,实验组有少数鱼轻压鱼腹可见少量精液流出,随后阳性率逐周提高,第五周达到高峰,其后持续较恒定水平。(2)激素处理组释精雄鱼的生殖指数大于不释精雄鱼,也大于对照组。(3)鲻鱼睾丸组织学切片看出,17α-MT处理的释精和不释精雄鱼精细管中各级生精细胞均处于生精活动的旺盛时期,而对照组精细管中充满精原细胞;另外,释精和不释精雄鱼的间质细胞的核的体积和数量都大于和多于对照组。因此,我们认为17αMT可刺激精原细胞增殖、精母细胞成熟分裂和精子形成。     

水温对文昌鱼生殖活动的影响及其内分泌机制

采用慢性实验方法,研究在不同水温条件下饲养性腺发生前的文昌鱼(Branchiostoma belcheri)对其性腺分化和发育的影响。另外,在繁殖季节研究在低温16℃、中温22℃和高温28℃下饲养性成熟的文昌鱼对其产卵和排精的影响。同时,采用免疫组织化学方法对几种生殖相关激素在不同发育期文昌鱼的生殖调控轴(脑-哈氏窝-性腺)中的分布进行免疫识别,并用磁酶免定量测定方法检测睾酮和17 β-雌二醇在文昌鱼性腺中的含量,以分析和探讨水温影响文昌鱼生殖活动的内分泌机制。结果表明:低温有利于文昌鱼性腺向雌性分化,雌雄比例为4.2:1,中温和高温组则不受影响,雌雄数量大致相等。高水温则有利于文昌鱼的精巢发育和生精活动。28℃海水适于文昌鱼的产卵和排精。根据免疫组织化学和磁酶免定量测定的结果分析提示,温度影响文昌鱼性别分化和发育以及繁殖活动的内分泌机制是:首先水温经皮肤或哈氏窝化学感受器,刺激神经系统(脑泡)释放GnRH。然后GnRH促进哈氏窝分泌LH,从而可能刺激性腺产生和分泌性类固醇激素,始动文昌鱼性腺的发育至成熟及其生殖活动。此外,脑中芳香化酶可能介导文昌鱼性别分化。     

青岛文昌鱼(Branchiostoma belcheri tsingtauense) 染色体荧光原位杂交条件研究

采用青岛文昌鱼18SrDNA序列为探针进行荧光原位杂交,根据囊胚晚期细胞上的核杂交信号多少及特异性确立青岛文昌鱼染色体荧光原位杂交的最佳反应条件。结果表明适合于青岛文昌鱼染色体荧光原位杂交的条件为:预处理采用5ng/μl的胃蛋白酶处理3—5min和10ng/μlRNA酶处理1h;100—300倍探针浓度的鲑鱼精DNA进行封闭;50%甲酰胺/2×SSC,1×SSC,2×SSC,42℃的洗脱强度;3%BSA进行抗体封闭;杂交时间可以控制在12—18h;杂交温度保持37℃;PI(1.5μg/ml)的量每片20μl以内。     

激素诱导斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)雄性化的研究

石斑鱼属雌雄同体雌性先成熟鱼类,低龄鱼卵巢先成熟,表现为雌性,高龄鱼才性转变为雄性。本实验通过持续跟踪取样,分析了人工养殖条件下斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)在36月龄内的性腺发育过程,发现其性分化完成后,雌性卵巢在9月龄后开始发育。因此,采取投喂含有雄激素甲基睾酮(MT)饲料的方法,可以在石斑鱼卵巢发育之前,成功诱导8月龄的斜带石斑鱼幼鱼向雄性方向发育。结果表明,以MT 10mg/kg饲料的剂量投喂3个月能够有效诱导卵巢未发育的幼鱼往雄性方向发育;但停止投喂MT后,幼鱼精巢又开始出现退化,不会继续往雄性方向发展,而转变为雌性。以上结果表明,斜带石斑鱼性别决定和分化除了受遗传因子和内分泌调控外,还受到年龄、体型和群体、环境等因子的影响,人工投喂MT激素的作用并不能从根本上影响石斑鱼幼鱼的性腺发育的方向,只有在持续剂量的MT激素诱导下,石斑鱼幼鱼才能发育为成熟的雄鱼。     

孔鳐雄性生殖系统解剖学与组织学观察

本研究对成年雄性孔鳐(Okamejei kenojei)的生殖系统进行解剖学和组织学观察,结果表明,孔鳐的生殖系统主要由精巢、附睾、输精管、储精囊、间质腺、鳍脚腺和鳍脚组成。其中孔鳐的精巢中的精小囊,按照成熟度依次由中心向小叶外周辐射状排列,其精子发育成熟过程根据精巢支持细胞的位置、精小囊的大小和精小囊中的生精细胞所处的状态可划分为7个时期:精巢支持细胞未迁移期、精巢支持细胞迁移期、精巢支持细胞定植早期、精巢支持细胞定植晚期、精子变形期、精子迁移期、精子聚拢期。变态成熟的精子最终每59~64根精子组成精子束进入附睾。精子束在附睾中经历“游离-聚拢-游离”3个过程后,最终储存在储精囊中。鳍脚是孔鳐的外生殖器,主要有鳍扇、扇盾等结构组成,它与储精囊相连,是将精液输送至体外的器官。     

17 β-雌二醇对雄性瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)的雌激素效应

以三峡库区小型经济鱼类瓦氏黄颡鱼雄鱼为对象,研究17β-雌二醇对它的雌激素效应.在不同的温度和剂量条件下测定血清卵黄蛋白原、Ca2+、总磷、无机磷的含量,以及肝胰脏RNA/DNA比率.结果表明,与对照组相比,当水温≥16℃、剂量≥1.0μg/g,以及水温≥19℃、剂量≥0.1μg/g条件下,17 β-雌二醇可诱导雄性瓦氏黄颡鱼产生卵黄蛋白原,而且其水平增加呈明显的剂量依赖;当水温≥16℃、剂量≥1.0μg/g时,血清Ca2+含量极显著增加,呈明显的剂量依赖;试验组血清各种 磷组分增加也呈剂量依赖;17 β-雌二醇也引起肝胰脏代谢指标RNA/DNA比率增加.结果表明,雄性瓦氏黄颡对雌激素有较高的敏感性,加上其体型适中,容易获得等特性,可以作为水环境雌激素内分泌干扰物检测的指示生物.血清卵黄蛋白原与Ca2+可以作为污染水体雌激素内分泌干扰物的检测指标.     

Aroclor 1254对大弹涂鱼精巢线粒体氧化应激的影响

大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)是盛产于我国东南沿海滩涂的两栖经济鱼类。分别用1,2,4μg/g的Aroclor 1254对生殖期雄性大弹涂鱼腹腔注射28 d后,检测大弹涂鱼精巢与储精囊的绝对与相对重量,并检测其精巢线粒体氧化水平、抗氧化酶活性与非酶类抗氧化剂含量。结果显示,1μg/g Aroclor1254剂量组中大弹涂鱼精巢、储精囊绝对重量与对照组均无显著差异(p=0.90),而较高剂量组(2,4μg/g Aroclor1254)上述指标均显著低于对照组(p0.05);相对重量指标中仅4μg/g Aroclor1254剂量组的储精囊相对重量显著低于对照组(p0.05)。此外,Aroclor1254使精巢抗氧化防御能力降低,三个处理组的SOD活性与GSH含量均比对照显著下降(p0.05),较高剂量组CAT,GPx,GR活性及Vit C含量也均显著低于对照(p0.05);而H2O2产量与脂质过氧化反应显著增加,1,2和4μg/g剂量组中MDA含量分别为对照组的1.12,1.52和1.80倍,H2O2含量分别为对照组的1.20,1.40和1.75倍,与Aroclor1254剂量呈现明显相关性。表明Aroclor1254可以诱导精巢线粒体的氧化应激对精巢产生毒性,影响雄性大弹涂鱼生殖机能。     

中华绒螯蟹不同组织LDH同工酶凝胶电泳分析

采用高pH不连续系统聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳,特异性组织化学染色对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的血清、肌肉、鳃、心脏、肝胰腺、精巢和精子等组织的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶酶谱进行了研究。同时,利用2种底物(乳酸钠和α-羟基丁酸钠)进行了特异性反应,并对其精子特异性乳酸脱氢酶进行了研究。结果表明:以乳酸钠为底物时,中华绒螯蟹的肌肉、鳃、血清和心脏有2条谱带,而精巢和精子有3条谱带,但在肝胰腺中未发现谱带;以α-羟基丁酸钠为底物时,只在血清、精巢和精子发现有1条谱带。从而说明,中华绒螯蟹乳酸脱氢酶同工酶存在组织特异性;精子存在特异性乳酸脱氢酶。     

中华乌塘鳢(Bostrichthys sinensis) 和大弹涂鱼( Boleophthalmus pectinirostris) 成熟产卵过程中17a-羟基孕酮和前列腺素水平的研究

以酶联免疫吸附分析法测定了中华乌塘鳢和大弹涂鱼成熟产卵过程中卵巢液、精巢液、贮精囊液、雌鱼尿液和雄鱼尿液中的17α-羟基孕酮(17α-P)、前列腺素E2(PGE2)和前列腺素R2α(PGF2α)的含量。结果表明，中华乌塘鳢卵巢液中的17α-P和PGE，含量随着卵巢发育成熟而升高。性成熟前后卵巢液中的PGE，含量高于PGF2α。性成熟雄鱼尿液和贮精囊液中的PGE2含量显著高于精巢液或雌鱼尿液。性成熟前后雌鱼尿液中的17α-P、PGE2和PGF2α含量均显著高于卵巢液。性成熟和退化期雌鱼尿液中的PGE2含量明显高于PGF2α。性未成熟大弹涂鱼(第Ⅳ期)卵巢液中PGE2和PGF2α，含量极低；性成熟时(第V期)卵巢液中的PGE2、PGF2α和17α-P含量显著上升，PGF2α含量显著高于PGE2。     

中国对虾人工诱导雌核发育的研究 Ⅱ.紫外线辐射对精子顶体反应和受精能力的影响

研究了 36 5 nm波长紫外线辐射中国对虾精子对其顶体反应和受精能力的影响。结果表明 ,低剂量紫外线辐射促进精子发生顶体反应 ,大剂量辐射使精子丧失发生顶体反应的生理机能并死亡。 36 5 nm波长紫外线能够透过精荚和纳精囊盖 ,对其内精子起到杀伤作用。精液稀释液在紫外线下辐射 5～ 8s,仍有部分精子具有受精能力 ,但胚胎在早期阶段即死亡。人工诱导雌核发育的过程中 ,紫外线辐射精液稀释液 5～ 8s,可获得遗传物质失活的精子 (激活源 )。经透射电镜观察分析 ,紫外线对精子遗传物质的损伤是一种使染色质变性的化学作用。     

苯并[a]芘对雄性褐菖鲉精巢成熟的影响

本实验采用雄性褐菖鲉作为实验对象,腹腔注射0.5×10-6、1×10-6、5×10-6、10×10-6(m/m)苯并[a]芘,7d后苯并[a]芘处理组精巢睾酮水平和睾酮与17β-雌二醇的比值都有上升,但都未表现出显著性差异(P>0.05).腹腔注射50×10-6(m/m)苯并[a]芘,11d后取出精巢,常规石蜡切片,结果显示雄性褐菖鲉的精巢,精小叶腔和输出管中精子密集程度明显增加,次级精母细胞减少,精巢壁厚度变薄.结果提示,苯并[a]芘对褐菖鲉具有类雄激素效应.     

斗嫁蜮精子发生及雄性性腺组织学研究

采用石蜡切片法,对分布于粤西沿海的斗嫁蜮Cellana grata(Gould)的精子发生和雄性性腺的组织结构进行了研究。斗嫁蜮精子发生经历雄性性细胞的增殖、生长、成熟、变态等阶段.依据精子发生过程中生精细胞形态的变化,精子发生过程可分为精原细胞期、初级精母细胞期、次级精母细胞期、精细胞期和精子形成期等5期。雄性性腺组织主要由滤泡构成,滤泡为生殖细胞增殖、生长、成熟、变态的场所,滤泡腔中的精子经生殖输送管向外输送。显微观察与分析表明:(1)精子发生中,生长期不明显,初级精母细胞较精原细胞小;(2)生精细胞及核的大小随发育逐渐变小,核嗜碱性逐渐增强;(3)精子发生过程中的变态期长,易观察到变态过程中的不同形态的精细胞;(4)成熟精子为鞭毛型,头部短杆状,约0.5×(3~4)μm,尾部细长呈鞭毛状;(5)生长-成熟期的雄性性腺由形态较规则的(多边形)滤泡构成,滤泡界限清晰;(6)雄性滤泡壁由不同发育时期的生精细胞依次排列,较原始的生精细胞呈嗜酸性,靠近滤泡膜分布,而发育晚期的生精细胞呈嗜碱性,渐离滤泡膜分布,成熟精子群集并呈涡旋状分布于腔中;(7)成熟雄性性腺可伸入足部或肝组织中;在肝组织切片中,可观察到结构不同的4个级别的生殖输送管;8)斗嫁蜮雌雄异体,但存在雌雄同体、性转化现象。还对斗嫁蜮精子发生与成熟过程及雌雄同体的有关问题进行了探讨。     

线纹海马(Hippocampus erectus)性腺特异性结构与生殖细胞发育特征研究 *

海马属(Hippocampus)鱼类具有独特的雄性育儿繁殖方式, 其卵巢和精巢结构也极其独特。本研究系统阐明了线纹海马(Hippocampus erectus)的性腺及生殖细胞的发育特征, 根据组织学结构和细胞形态学变化特征, 将线纹海马的精巢和卵巢发育过程均分为6个时期。其中, 卵巢发育方式为不同步成熟型, Ⅰ期卵巢只包含第Ⅰ时相卵母细胞, 包括卵原细胞和早期初级卵母细胞(d<20μm); Ⅱ期卵巢开始出现第Ⅱ时相卵母细胞(d=20~140μm); Ⅲ期卵巢卵母细胞数量显著增多, 体积增大, 并开始出现第Ⅲ时相卵母细胞(d=140~260μm), 此时细胞内开始出现皮质小泡、卵黄颗粒和卵黄膜; Ⅳ期卵巢开始出现第 Ⅳ时相卵母细胞(d=260~1100μm), 卵黄颗粒充满整个细胞质, 形成过渡期的卵黄球; Ⅴ期卵巢出现大量第Ⅴ时相成熟卵母细胞(d=1100~2000μm), 细胞内形成流动性卵黄囊; Ⅵ期卵巢为排卵不久后的卵巢, 卵母细胞数量显著减少。线纹海马精巢属于非限制型小叶精巢, Ⅰ期精巢主要含精原细胞, 核大, 含一到多个核仁; Ⅱ期精巢开始形成精小囊, 囊内出现初级精母细胞; Ⅲ期精巢呈乳白色, 开始出现次级精母细胞; Ⅳ期精巢体积较 Ⅲ期时显著增大, 开始出现精子细胞, 并逐渐移向中央生精腔; Ⅴ期精巢内含大量的成熟精子, 随时准备释放。精子释放后精巢进入Ⅵ期, 残留少量精细胞在生精腔中。组织化学反应结果显示, 氨基酸、蛋白质和脂肪的信号在卵母细胞的细胞质、卵黄囊中呈阳性, 且随着卵母细胞的发育而增强。本研究结果为进一步探索海马属鱼类雄性繁殖策略提供了重要的基础数据。     

室内培育条件下青岛文昌鱼性腺的年周期发育

青岛文昌鱼(Branchiostoma japonicus)采自于青岛沙子口海区,在室内进行周年培育。每月采集样品,经测量、固定以及组织切片观察,研究了其周年卵巢和精巢的发育规律。结果表明,室内培育的文昌鱼一周年内全长没有明显变化,仅体质量在繁殖期即其性腺发育至Ⅴ期时有明显增大(P0.05=,精卵排空后则恢复原来体质量。文昌鱼1 a内在夏季6～7月繁殖1次,能自行排放卵和精子,排空后个体的卵巢或精巢,在适宜的条件下,经历Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ期的发育过程,进行下一轮的性腺发育。文昌鱼精巢在Ⅳ期前先于卵巢发育,两者在Ⅳ期前发育都不同步,精巢处于Ⅳ期时间较长,一般从3月持续到5月,而卵巢处于Ⅳ期一般是在4月～5月。     

黑鱾精子发生过程中的超微结构变化

利用透射电镜对黑鱾Girella leonina精子发生过程中的各个阶段细胞以及精子的超微结构变化进行了观察.结果表明:1)黑鱾的精子发生过程主要经历了初级精原细胞、次级精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子6个阶段.由精子细胞形成成熟精子还需经过前、中、后期的一系列变态过程.2)各阶段生精细胞以初级精原细胞体积最大,大小约为10.00μm×6.40μm,核大小约为8.801μm×5.80μm,而精子细胞体积最小,大小约为3.20μm×2.60μm,核约为2.80μm×2.50μm;随着生精细胞不断分裂和成熟,细胞的体积逐渐减小,核的位置、核仁、线粒体等发生相应的变化,核内染色质趋于浓缩,电子密度增加,染色程度也逐步加深.3)线粒体是各期细胞内的最主要细胞器之一,在精子发生过程中,它的数量逐渐减少,至成熟精子形成时,核内仅存4个线粒体,但体积却不断增加,内嵴变得长而明显.4)与大多数硬骨鱼类精子特点相似,黑纪的成熟精子不具顶体,核后窝深,精子的鞭毛细长,两旁具侧鳍.尾部为典型的"9+2"型结构.