中国对虾血细胞中酚氧化酶活力研究

脊椎动物血淋巴中的酚氧化酶的研究已有大量资料，不少学者［４，７，８］认为黑色素的聚集与昆虫伤口愈合、结节形成及包被作用有联系，而黑色素的聚集则与昆虫血淋巴中的酚氧化酶及其底物相关。程振衡和梁子才［１］他发现在亚洲玉米螟血淋巴中的酚氧化酶可以粘附到酵母菌细胞表面。在水生无脊椎动物中，有关酚氧化酶的研究报道甚少，特别是对虾酚氧化酶的特性研究，还未见到这方面的有关资料。本文报道中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｓｉｓ）血淋巴中血细胞内的酚氧化酶的存在及各种因子对其活力特性的影响。１材料与方法１．１实验…     

久效磷对中国对虾血淋巴酚氧化酶活力影响的初步研究

初步研究了低浓度久效磷胁迫对中国对虾胁迫对中国对虾血淋巴酚氧化酶（ＰＯ）活力的影响,结果表明,低浓度久效磷短时间胁迫,对中国对虾血淋巴的ＰＯ活力有刺激增强的作用;增大药物浓度和延长胁迫时间,可使其活力降低,且随药物浓度的增加和胁迫时间的延长,这种降低作用逐渐增强。因此认为,久效磷胁迫会抑制机体识别和清除病原体的能力,将可能导致对虾疾病的发生,是虾病暴发的可能诱因。     

中国对虾血清中酚氧化酶活力研究

１９９５年７－９月,以养殖中国对虾为材料,实验室用弧菌菌悬液注射感染对虾,血甭中测得一定量的酚氧化酶（ＰＯ）。正常状态下对虾血清中ＰＯ活力变化不大,而濒死对虾血清中ＰＯ活力变化较大。较低浓度的菌悬液能有效地提高ＰＯ活力,促使有机体对病原体的防御能力,这在实践中有重要意义。     

中国对虾血淋巴中的抗菌、溶菌活力与酚氧化酶活力的测定及其特性研究

以海捕中国对虾亲虾为材料，对其血淋巴中的抗菌、溶菌活力及酚氧化酶活力进行测定，并研究经注射大肠杆菌、海洋弧 菌及酵母聚糖等糖等刺激物以后，其活性的变化规律等。结果表明，适当的免疫刺激可提高对虾自身的抗病能力、为免疫药物的研究制造等提供依据。     

中国对虾血淋巴中的抗菌、溶菌活力与酚氧化酶活力的测定及其特性研究

以海捕中国对虾亲虾（1992年4月捕）为材料，对其血淋巴中的抗菌、溶菌活力及酚氧化酶活力进行测定，并研究经注射大肠杆菌、海洋弧菌及酵母聚糖等刺激物以后，其活性的变化规律等。结果表明，适当的免疫刺激可提高对虾自身的抗病能力、为免疫药物的研制等提供科学依据。     

短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因的克隆和序列分析

采用RT-PER原理和长片段扩增技术克隆短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因。设计合成特异引物、提取血细胞总RNA，反转录后扩增获得的特异片段回收并克隆到pGEM-TEasyVector系统的T载体上，重组子进行碱基序列测定。结果表明，所克隆的短沟对虾酚氧化酶原基因含起始密码子A1B到终止密码子TGA的2055bp，编码684个氨基酸。斑节对虾酚氧化酶原基因含ATG到TGA的2061bp，编码686个氨基酸。短沟对虾酚氧化酶原推算分子量为78153Da，等电点pI为6．25；斑节对虾则为78581Da，pI为5．83，用DNA分析软件分析显示两种对虾酚氧化酶原基因具有高度的同源性，二者的碱基和推测的氨基酸序列同源性分别为93％和92％；对虾与其他节肢动物酚氧化酶原基因的同源性的高低与种类间亲缘关系相关；不同种类间酚氧化酶活性中心重要组成部分的2个铜结合位点、位于铜结合位点内的6个组氨酸以及与铜结合位点相邻的氨基酸序列高度保守。     

日本蟳酚氧化酶的分离纯化及其部分生物化学性质研究

利用离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,从日本(Charybdis japonica)血淋巴中分离纯化出了酚氧化酶,并以L-二羟苯丙氨酸(L-DOPA)作为特异性底物对其生化性质和酶性质进行了研究。结果表明,酚氧化酶和酚氧化酶原的分子质量分别为64.5 ku和69.5 ku。以L-DOPA为底物对酚氧化酶纯品进行研究发现,其最适pH值为6.0、最适温度为40℃。对底物L-DOPA和儿茶酚的米氏常数Km值分别为3.41和7.97 mmol/L。该酶对亚硫酸钠、苯硫脲极为敏感,对硫脲、苯甲酸非常敏感,表明该酶很可能是一种儿茶酚酶型的酶。此外,EDTA,DETC,Zn2 ,Mg2 和Cu2 均能显著抑制该酶活性,且10 mmol/L Cu2 能有效地回复该酶被DETC所抑制的酶活性,表明该酶确为一种Cu-金属酶。     

中国对虾血细胞酶细胞化学的初步研究

运用电镜酶细胞化学技术 ,对中国对虾 (Penaeus chinensis)的血细胞和血清中的酚氧化酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和过氧化物酶的酶活性部位进行标记。实验结果显示 :酚氧化酶主要以酶原形式存在于大颗粒细胞的颗粒体中 ,酸性磷酸酶和碱性磷酸酶以酶原形式存在于小颗粒细胞的颗粒体中。健康虾和患病虾血细胞中酶活性的表现形式不尽相同 ,在病理情况下 ,颗粒细胞能以细胞解体的方式 ,排出细胞内的颗粒 ,转化成有活性的酶 ,以此提高血淋巴中这几种酶的活性。透明细胞可以吞噬排放颗粒后的颗粒细胞 ,透明细胞中由高尔基体合成的酸性磷酸酶等溶酶体酶主要用于透明细胞的细胞内消化作用。研究认为 :3种血细胞因含有不同的免疫酶以及酶的作用方式不同而具有不同的免疫功能     

复合免疫药物对中国对虾血淋巴氧化酶和抗氧化酶活力的影响

中国对虾口服复合免疫药物“虾康素”后，于第1，3，5，7天分别测定了中国对虾血清中髓性过氧化物酶（MPO），酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活力，结果表明，血清中MPO，SOD和CAT活力在第1，3，5，7天时均与实验组高于对照组，并且差异极显著。血清中PO活力仅在第1天时，血细胞中PO活力则仅在第1天和7天时，实验组高于对照组，且差异极显著。     

摄食对中国对虾能量代谢影响的初步研究

于 1996年 5～ 6月在水温 2 5℃时测定了两种规格中国对虾 ( Penaeus chinensis)摄食沙蚕和配合饲料后的耗养率和氨排泄率。小规格中国对虾摄食配饵的代谢率略高于摄食沙蚕 ,而大规格组中摄食沙蚕的代谢率大于摄食配饵组。小规格中国对虾摄食配饵和沙蚕的代谢能比未摄食组提高了 33.2 2 %和 2 7.4 0 %;大规格中国对虾摄食配饵和沙蚕的代谢能比未摄食组提高了 34 .78%和 4 0 .0 5%。中国对虾摄食后的氨排泄率明显增加 ,表明蛋白质在摄食代谢中具有重要作用。     

中国对虾(Penaeus chinensis)精子ATP酶活力与生殖关系的探讨

首次报道了中国对虾精子存在有Ｎａ，Ｋ－ＡＴＰ酶及Ｍｇ－ＡＴＰ酶活力，并对 其生物功能进行了探讨。对来自不同季节的雌虾纳精囊中精子的两种ＡＴＰ酶活力 进行了测定。酶分析的结果为春虾精子的 Ｎａ，Ｋ－ＡＴＰ酶活力为 １．１４５±０．２２９μｍｏｌ Ｐｉ／ｍｇ· ｈ，秋虾则为 １． ０５８±０． ４３１μｍｏｌ Ｐｉ／ｍｇ· ｈ；春虾精子的 Ｍｇ－ＡＴＰ酶活力为 １． ６４７±０． ６９１μｍｏｌ Ｐｉ／ｍｍ· ｈ，秋虾则为 １． ５８４±０． ３１５μｍｏｌ Ｐｉ／ｍｇ· ｈ。因此在表观 上，春虾精子的两种ＡＴＰ酶活力均略高于秋虾，但差异不够显著。     

96孔酶标板法测定中国对虾血淋巴上清液抗菌活力和酚氧化酶活性的初步研究

用96孔酶标板法测量单尾中国对虾血淋巴上清液抗菌（Uα）应力和过氧化酶活性。实验表明，该法具有以下优点：1）可测定大批单尾对虾血淋巴上清液的抗菌活力，酚氧化酶活性；2）所需对虾血淋巴上清液微量化；3）用酶标仪读取酶的活性，减少了不同试验者人为读数时的误差；4）重复性高。     

菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)漆酶型酚氧化酶的纯化及特性分析

采用非变性电泳结合特异性底物发色方法从菲律宾蛤仔血细胞中分离出一种酚氧化酶,研究了该酶的酶促反应动力学参数,金属离子、抑制剂对酶活的影响。结果表明,分离获得的酚氧化酶分子量约为563kDa;对底物邻苯二酚、左旋多巴(L-DOPA)、多巴胺、对苯二酚的米氏常数Km分别为0.42、1.60、1.79和1.76mmol/L;酶的活性在Mg2+、Zn2+、Mn2+、Fe2+、Cu2+和Ca2+浓度为5、10、20、30mmol/L时受到抑制;酶的活性可被抑制剂抗坏血酸、二乙基二硫代氨基甲酸钠(DETC)、半胱氨酸、亚硫酸钠、柠檬酸、乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、叠氮钠和硫代尿素等抑制。根据底物特异性、抑制剂等结果,所分离获得的酚氧化酶属于漆酶型的含铜酚氧化酶。     

丁字湾增殖中国对虾适宜量的研究

丁字湾位于山东省海阳、莱阳、即墨三市交界处,面积为１３０ｋｍ２。该海湾局封闭式内湾,不易受风浪影响,地势平坦,潮间带宽阔,水深较浅,最深处１０ｍ。湾内水质肥沃,营养丰富,中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ喜食的寻氏肌蛤、鸭嘴蛤资源丰厚。该湾春季有亲虾产卵繁殖,６,７月份有幼对虾分布,是进行对虾增殖的优良海湾。但因受饵料和空间等制约,放流数量并非可以无限增加,据１９８８～１９９２年对丁字湾中国对虾放流增殖适宜量的研究表明,随放流数量增加,对虾个体变小,生长减慢,自然死亡率上升。因此,放流…     

中国对虾组织细胞中的过氧化物酶体

运用电镜细胞化学技术，研究中国对虾(Penaeus chinensis)组织细胞中的过氧化物酶体，透射电镜下观察中国对虾的淋巴器、肝胰腺、触角腺和中肠4种组织。观察显示：过氧化物酶体主要存在于肝胰腺细胞和触角腺的迷路上皮细胞中。在肝胰腺的R-细胞中过氧化物酶体的形成与粗面内质网、脂滴和胞质溶胶有密切关系。肝胰腺中的R-细胞和触角腺的迷路上皮细胞富含过氧化物酶体，提示这两个组织在对虾降解外来有毒物质的过程中发挥着重要的作用。     

无特定病原中国对虾种群选育的研究

报道了无特定病原中国对虾种群（SPF）选育的结果，主要介绍1999－2000年选育子3代和子4代的养殖结果。1999年选育对虾子3代养殖平均1788kg/ha，对虾平均体长13．69cm。而对照池中暂养池对虾体长3－4cm发病死亡，养殖池对虾体长6cm发病死亡；2000年选育对虾子4代养殖平均3168kg/ha，对虾平均体长15．00cm；对照池产量为3450kg/ha，对虾平均体长13．30cm。说明经过连续几代的人工选育，对虾生长速度明显加快。