紫球藻胞外多糖抗氧化和免疫调节活性的研究

采用密闭微波法降解紫球藻胞外多糖。通过测定多糖对羟自由基OH·、超氧阴离子O2-·和二苯代苦味酰基自由基DPPH·的清除效果及对小鼠单核-巨噬细胞RAW264.7和淋巴细胞的增殖效果,考察低分子量紫球藻多糖的体外抗氧化活性和免疫调节活性。结果表明,在一定的浓度范围内,降解后的紫球藻多糖对OH·、O2-·和DPPH·的清除能力与浓度呈正相关性,它们的半抑制率IC50分别为0.619,0.114和0.015mg/mL,表明紫球藻胞外多糖具有体外抗氧化活性。溶液浓度在50～200μg/mL的多糖都表现出体外免疫促进作用,与对照组相比,100μg/mL的多糖对巨噬细胞RAW264.7的促进作用最大,其增值指数为1.72。200μg/mL的多糖对脾淋巴细胞的增值指数为2.11。     

氮源对紫球藻和蓝隐藻胞外多糖及藻胆蛋白含量的影响

本文研究了4种不同氮源(硝酸钠、氯化铵、脲和硝酸铵)对紫球藻(Porphyridium sp.)和蓝隐藻(Chroomonas placoidea)叶绿素荧光参数(PSII最大光能转化效率F_v/F_m、相对电子传递效率rETR、光化学淬灭系数qP、非光化学淬灭系数NPQ)、细胞密度、干重、胞外多糖和藻胆蛋白含量的影响。研究结果表明,有利于紫球藻和蓝隐藻生长和光合作用的最佳氮源是硝酸钠,在此条件下,实验结束时,2种微藻的F_v/F_m、rETR、qP、细胞密度和干重均达到最大值,而氯化铵则对其上述参数均有抑制作用。有利于紫球藻分泌胞外多糖和合成藻胆蛋白的最佳氮源分别是氯化铵和硝酸铵,在此条件下,该藻胞外多糖和藻胆蛋白含量分别达到干重的29.0%和17.5%;有利于蓝隐藻分泌胞外多糖和合成藻胆蛋白的最佳氮源分别是脲和硝酸铵,在此条件下,该藻胞外多糖和藻胆蛋白含量分别达到干重的17.5%和18.8%。综合考虑生物量和活性物质含量,获取2种微藻胞外多糖的较理想氮源是脲,获取2种微藻藻胆蛋白的较理想氮源是硝酸钠。该结果为2种微藻的培养及开发利用提供了理论依据。     

含硒紫球藻胞外多糖的制备及对体内外肿瘤细胞生长的影响

采用在培养液中添加亚硒酸来实现藻对无机硒的富集和转化,制备一种含硒的紫球藻(Porphyridiumsp.)胞外多糖(Se-PSP);通过DAN荧光法测硒含量及红外光谱,对硒是否结合在多糖上进行了初步探讨;用四唑盐比色法(MTT)研究了不同浓度含硒的紫球藻胞外多糖对3种体外肿瘤细胞生长的影响。通过建立荷瘤小鼠模型,研究了含硒多糖对腹水瘤S180的作用。结果表明含硒的胞外多糖含硒量约为0.015mg/g,40,80mg/LSe-PSP对3种肿瘤细胞SMMC7721、A549、A357均有一定程度的抑制作用,尤其是对SMMC7721抑制程度最为明显。荷瘤小鼠模型实验结果表明100mg/(kg.·d)Se-PSP可以延长荷瘤小鼠的生存时间,Se-PSP有可能成为一种抗肿瘤药物。     

紫球藻的研究进展

紫球藻是多种天然产物的来源，特别是硫酸多糖。本文就近年来紫球藻生理活性物质中的多不饱和脂肪酸（PUFA）、多糖和规模培养的研究进展作一综述。内容涉及二十碳五烯酸（EPA）和花生四烯酸（AA）的分离纯化和测定方法，三酰甘油（TAG）对高不饱和脂肪酸、半乳糖脂合成的贡献。紫球藻多糖具有抗病毒、抑制病毒复制，对单疱疹病毒1型和2型（HSV1，2）及水痘－带状疱疹病毒（VZV）有明显的抗性，它能降低白来亨鸡的血清胆固醇水平和改善蛋黄脂肪酸组成，改变雄性Sprague-Dawley鼠肠形态和降低血清胆固醇水平。紫球藻的规模培养包括采用室外成规模玻璃平板式反应器、气升式反应器、改进型气升式反应器、管式反应器等。     

紫球藻的生物活性物质

对紫球藻细胞内的蛋白质、脂肪酸和多糖等主要生物活性物质的含量和分布进行了分析,同时对Ｂ－藻红蛋白进行了分离纯化,并获得了产量和纯度均较高的Ｂ－藻红蛋白。     

紫球藻的生长及高不饱和脂肪酸的研究现状

海洋微藻是海洋生态体系中的主要初级生产力,具有生物合成二十碳五烯酸(EPA,20:5n-3)和二十二碳六烯酸(DHA,20:6n-3)的能力,海洋微藻脂肪酸的组成除因种类不同而不同外,还随培养基的成份、光照、温度、pH等因素的改变而变化.目前国内外已对众多种类的微藻脂肪酸(Fas)组成进行了报道,其中紫球藻(Porphyridium)以其对环境的适应能力强、营养要求简单、繁殖速度快、且生长过程中能合成高度不饱合和脂肪酸(PUFAs)、紫球藻多糖[1]、藻胆蛋白(phycobiliprotein)等生物活性物质[2],引起了广泛的观注.     

紫球藻细胞破碎方法研究

采用反复冻融法和超声波细胞破碎法分别对不同密度的紫球藻细胞进行了破碎研究，并通过细胞计数和藻红蛋白含量测定的手段对两种方法所得细胞破碎效率进行了比较。结果表明，随着冻融温度的降低，细胞的破碎率明显增大，而藻液密度对破碎率的影响较小。超声波法对细胞的破碎率明显高于冻融法，其中占空比和破碎时间两个因素对细胞的破碎率影响较大，在占空比为50％、输出功率为150W和时间20min的条件下，紫球藻细胞的破碎率可达到87.4％，并且随着细胞破碎效率的提高，藻红蛋白的提取量也明显增加。     

NaHSO3对两种微藻生长及胞外多糖和藻胆蛋白含量的影响

本文研究了0.25~3 mmol/L浓度的NaHSO3对紫球藻(Porphyridium violaceum)和0.06~0.96 mmol/L浓度的NaHSO3对蓝隐藻(Chroomonas placoidea)的叶绿素荧光参数(PSII最大光能转化效率Fv/Fm、相对电子传递速率rETR、光化学淬灭qP、非光化学淬灭NPQ)、细胞密度、干重、胞外多糖和藻胆蛋白含量的影响。研究表明,较低浓度的NaHSO3对紫球藻和蓝隐藻的生长及活性物质积累有促进作用,2种微藻进行生长和活性物质积累的最适NaHSO3浓度分别为0.5和0.12 mmol/L,此条件下,实验结束时,2种微藻的Fv/Fm、rETR、qP、细胞密度、干重、胞外多糖和藻胆蛋白含量均达到最大值,显著高于对照组。其中,紫球藻的最终细胞密度、干重、胞外多糖和藻胆蛋白含量分别比对照组增加了36.0%、19.1%、71.8%和69.0%。蓝隐藻的上述参数在NaHSO3浓度为0.12 mmol/L时则比对照组增加了60.8%、45.4%、60.0%和53.1%。另一方面,NaHSO3浓度为2~3 mmol/L时显著抑制紫球藻生长及活性物质积累,NaHSO3浓度为0.48~0.96 mmol/L则不利于蓝隐藻生长及活性物质积累。研究结果表明,适合紫球藻和蓝隐藻生长及胞外多糖和藻胆蛋白积累的最佳NaHSO3浓度分别为0.5和0.12 mmol/L,该研究为2种微藻的开发利用提供了理论依据。     

产胞外多糖极地微生物的筛选及其胞外多糖对大菱鲆免疫活力的初步研究

采用苯酚硫酸法和醇沉淀法,从600余株南极微生物中筛选得到10株胞外多糖产量较高的菌株.分子鉴定与系统发育分析表明,9株菌株属于假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas),1株属于嗜冷杆菌属(Psych robacter).对10株菌株进行发酵培养,发酵液经醇沉、除蛋白、冷冻干燥后得到粗胞外多糖.其中菌株3-3-1-2的胞外多糖产量达0.6 g/L.对粗多糖产量较高的4株菌所产的胞外多糖进行免疫活性试验,粗胞外多糖20#3在注射3d时,实验组AKP活性比对照组增加了39％,CAT活性比对照组增加了24％,二者均差异显著(P＜0.05),注射5d时,ACP活性比对照组增加了20％,差异显著(P＜0.05),总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性比对照组增加了14％,差异极显著(P＜0.01);粗胞外多糖33-1-2在注射3d时,实验组AKP活性比对照组增加了12％,差异不显著(P＞0.05),注射5d时,酸性磷酸酶(ACP)活性比对照组增加了24％,过氧化氢酶(CAT)活性比阳性对照组增加了5％,二者均差异显著(P＜0.05).研究结果表明,菌株20#3与3-3-12产生的胞外多糖对大菱鲆(Scophthalmus maxoimus)具有显著的免疫促进作用.由此可知,筛选出的极地细菌胞外多糖20#3和3-31-2可显著提高大菱鲆非特异性免疫力,可作为水产饲料添加剂应用于大菱鲆的生产养殖.     

硒对紫球藻抗氧化酶活性及丙二醛含量的影响

利用添加0.5mg.L-1硒的人工海水(ASW)培养基培养紫球藻Porphyridium sp.UTEX 637,并采用试剂盒、氯化硝基四氮唑蓝(NBT)光化学还原反应法、紫外分光光度法、硫代巴比妥酸(TBA)分析法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)的含量,着重探讨硒对紫球藻抗氧化酶活性及丙二醛含量的影响。结果表明,硒明显促进紫球藻细胞的GSH-Px活性(p<0.05)。加硒处理组和未加硒对照组紫球藻的GSH-Px活性均在第15天达到最高;加硒组紫球藻的最大酶活性达到4.31个酶活力单位(U),为对照组的1.31倍。SOD和CAT的活性分别在第18天和15天达到最大值,但加硒组与对照组之间差异不显著(p>0.05),说明0.5mg.L-1硒对紫球藻的SOD和CAT活性影响不明显。加硒能明显降低藻细胞丙二醛的含量,加硒组藻细胞的丙二醛含量比对照组藻细胞的丙二醛含量降低了15.21%。     

一种栉孔扇贝寄生虫——车轮虫的初步研究

2000年夏季，对在胶南、蓬莱、烟台三个养殖区采集到的发生大面积死亡前后的栉孔扇贝进行组织学研究，发现鳃丝和外套腔内寄生有大量的车轮虫，并伴随有大量的黏液产生。车轮虫和黏液的平均检出率分别为18％和12％。本对此类车轮虫进行形态学、病理学等方面的研究，并指出了其对栉孔扇贝的危害作用。     

温度、盐度及光照强度对海链藻(Thalassiosira sp.)生长的影响

报道了温度、盐度、光照对海洋硅藻海链藻生长的影响。结果表明 ,海链藻的适应温度范围比较广 ,从9～27℃都可维持正常生长 ,15～21℃为其适温范围 ;在盐度15～35范围内 ,盐度对海链藻的影响不大 ,在盐度为20时 ,海链藻获得最大的生长率;此外 ,海链藻具有广泛的光适应性 ,在7.5～90μmol/(m2·s)的光照范围内均可正常生长,并随着光强的增加生长率不断提高     

臭氧处理海水对小球藻蛋白质、氨基酸和碳水化合物含量的影响

要用臭氧处理的海洋小球藻，分析了不同生长期小球藻的蛋白质、氨基酸、碳水化合物的含量。结果表明，一定剂量的臭氧处理海水不可提高小球藻的蛋白质含量，降低碳水化合物的含量，提高氨基酸的绝对含量，鱼类必需氨基酸占所氨基酸总量例变化不大。说明该处理有利于小球藻营养价值的提高。     

绒螯蟹凝集素的红细胞凝集活性分析

利用血凝试验及糖抑制试验测定一种绒螯蟹的血清及肌肉提取液的凝血活性及糖抑制专一性,同时进行热稳定性、pH及Ca^2 影响试验。结果显示：血清只能凝集9种红细胞,肌肉提取液能凝集12种红细胞。血清对鹌鹁红细胞的凝集可被乳糖、D-甘露糖、D-果糖、D-半乳糖4种糖所抑制,最小抑制浓度均为200mmol／L,其凝集活性均依赖于Ca^2 ,在pH为6．0～7.0范围内较稳定,经50℃保温10min后活性完全消失。肌肉提取液只被D-甘露糖抑制,在pH为4．0～10．0、温度为4℃～90℃范围内均具活性,说明有很强的耐热性,其凝集活性不依赖于Ca。以上结果表明：血清与肌肉提取液均含有凝集素,且凝集素的种类不同。     

有机锡对金藻（Dicrateria sp.）的毒性效应

研究了有机锡对金藻的毒性效应 ,结果表明 ,三丁基锡 (TBT)和三苯基锡 (TPT)在低浓度的情况下 ,即可限制金藻细胞的生长和存活。室内一次培养研究显示 ,该 2种有机锡化合物对金藻表现出很强的毒性 ,对生长速率的 72 h半数效应浓度 EC50 分别为 0 .58和 0 .77μg/ dm3。     

一株分离微拟球藻LAMB0002的鉴定

微藻的分类鉴定是进一步应用的前提。微拟球藻属的6个种都是单细胞微藻,形态简单,难以用形态学方法进行准确鉴定。本研究分离了一株微拟球藻,结合光学显微镜和透射显微镜观察、脂肪酸和色素组成分析、18SrRNA基因和rbcL基因序列分析,将该藻株鉴定为Nannochloropsis oceanica LAMB0002。本研究进行了微藻分类系统的初步探索,为今后形成系统的微藻分类体系奠定了基础。     

藻酸双酯钠对蛋白激酶A活性的影响

大鼠肝脏经匀浆、硫酸铵盐析和DEAE-纤维素柱层析,得到部分纯化的Ⅰ型和Ⅱ型蛋白激酶A。将两型酶制剂在体外分别与藻酸双酯钠孵育,藻酸双酯钠对两型酶的活性均有剂量依赖性抑制作用。