水产胶原蛋白的提取纯化及理化特性的研究进展

胶原蛋白是一种重要的功能性蛋白质。水产动物源胶原蛋白因其丰富的来源和特殊的优点受到广泛关注,本文对国内外水产源胶原蛋白的提取、纯化方法以及理化性质的研究进展了综述,并对今后的研究方向做了展望,以期为水产胶原蛋白的进一步应用研究提供一定的理论基础。     

贻贝超氧化物歧化酶的分离纯化和部分性质

采用热变性－硫酸铵分级沉淀－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００和ＤＥ５２柱层析的方法从贻贝中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶,并对其部分性质进行分析鉴定。结果该酶的比活力为９４５３．３Ｕ／ｍｇ（ｐｒｏｔｅｉｎ）,提纯倍数为６０９．９,对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ敏感,Ｔ氏液和ＳＤＳ对酶活性没影响,对热较稳定。     

广东大鹏湾星虫类的初步研究

我国大鹏湾的星虫类(sipuncula)过去未曾报道。作者自1980—1983年进行了我国南海星虫类区系分类的调查采集。本文就1983年5月至6月在大鹏湾采集的标本共132个，初步鉴定为5种，分隶于4属。     

裸体方格星虫和可口革囊星虫精子超微结构的比较分析

用透射电子显微镜,观察了裸体方格星虫和可口革囊星虫精子的超微结构.这2种星虫成熟精子均由头部、中部和尾部组成,但其精子头部的超微结构不尽相同:裸体方格星虫精子的头部与可口革囊星虫精子的头部相比较小,由棒状"八"字形顶体与哑铃形细胞核及顶体下腔构成,而顶体下腔内没有明显的顶体棒结构.可口革囊格星虫精子的头部虽也由顶体、顶体下腔和核组成,其顶体呈圆弧形,精核为鸭梨形,核物质电子密度高,核内含空泡,顶体下腔中似有一顶体棒结构.这2种星虫精子的中部和尾部基本类似,仅中部的线粒体数目不同,裸体方格星虫精子的线粒体略少,有4～5个,而可口革囊星虫精子有5～7个.精子的尾部由远端中心粒延伸而出,均为细长鞭状,由轴丝及包绕轴丝的质膜组成,轴丝为典型的"9+2"结构.研究结果表明,精子的超微结构可以作为鉴别这2种星虫的依据.     

中国沿海戈芬星虫属(星虫动物门)的研究

戈芬星虫属隶属于方格星虫纲、戈芬星虫目、戈芬星虫科,世界共报道10种,其中2个种各有2个亚种。本文报道我国沿海戈芬星虫属共计3种,即:珠光戈芬星虫、长戈芬星虫和普通戈芬星虫。     

多管藻铜锌超氧化物歧化酶的纯化及性质研究

作为超氧阴离子（０- ２）清除剂的超氧化物歧化酶（ＳｕｐｅｒｏｘｉｄｅＤｉｓｍｕｔａｓｅ ,简称ＳＯＤ）广泛存在于需氧生物体内。自从ＭｃＣｏｒｄ和Ｆｒｉｄｏｖｉｃｈ１９６９年发现ＳＯＤ后 ,国内外不少学者对ＳＯＤ的分离纯化、理化性质及其在生物学和临床等方面的作用进行了广泛的研究 ,其中以铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ·Ｚｎ ＳＯＤ）的研究最为深入。目前国内外已开发或正在开发的ＳＯＤ资源有牛血、猪血、猪肝、人血、刺梨等。但关于藻类中ＳＯＤ的提取尚未见报道。本文结合多管藻的综合利用 ,从多管藻（Ｐｏｌｙｓｉｐｈｏｎ…     

海台及其性质的初步分析

本文对海台及其性质作了初步分析,它具有相对平静或非线性的磁场,一般为无震区,其地壳明显厚于大洋盆地,并具洋陆地壳间的某种过渡性.     

中国沿海管体星虫属(星虫动物门)的研究

报道作者采自我国沿海管体星虫属共计4种。其中富岛管体星虫Siphonosomafunafuti(Shipley)在我国是首次记载。     

可口革囊星虫的营养成分分析与评价

测定了可口革囊星虫的营养成分,干物质中蛋白质、脂肪、总糖和灰分的含量分别为70.68%,2.29%,5.51%和15.32%。必需氨基酸占氨基酸总量的35.41%,氨基酸分为32,化学分为19分。脂肪酸中不饱和脂肪酸(UFA)含量为81.22%,高于饱和脂肪酸(SFA);不饱和脂肪酸中高度不饱和脂肪酸(HUFA)的含量为54.27%;脂肪酸中EPA和DHA的含量为3.9%和0.12%。无机元素丰富,其中常量元素含量规律为Na>K>Mg>P>Ca,微量元素中Fe含量较高,其次为Mn和Zn。     

产甲壳素酶菌株HD001的发酵条件研究及酶的分离纯化

通过对降解甲壳素菌株 HD001 的发酵条件研究,确定了其产甲壳素酶最适培养基组分为 ( w/v ):( NH4 ) 2SO4 2.0%, NaCl 0.5%, K2HPO4 0.07%, KH2P O4 0.03%, MgSO4·7H2O 0.05% 以及葡萄糖 0.1%、酵母粉 0.3% 和胶体甲壳素 1.5%;最适产酶培养条件为:培养基起始 pH 值 6.0,培养温度 30 ℃,培养时间 120 h,发酵液酶活力达 376.2 U/mL.采用硫酸铵分级盐析、DEAE-纤维素离子交换层析、Sephacryl S-100 凝胶过滤层析对该酶进行纯化后,SDS-PAGE电泳显示单一条带,其相对分子质量约为 85.7 kDa.     

蛇鲻胃蛋白酶的分离纯化和性质研究

以蛇鲻Saurida elongata内脏为原料,将蛇鲻胃经组织捣碎,硫酸铵分级沉淀,HitrapTMQ FF离子交换层析,Sephadex G-100凝胶过滤层析,得到胃蛋白酶纯品。经SDS-PAGE显示为单一条带,酶的分子量为37.7kDa,测得其最适温度为45℃,最适pH为2.2,酶的热稳定性很好,在40℃及以下温度处理3h酶活力没有任何变化,酶在pH 1—10以下都比较稳定,在强碱性条件下不稳定。EDTA和Trypsin inhibitor对该酶都没有明显的抑制作用,PMSF和Pepstatin A能完全抑制胃蛋白酶的活性。Ca2 、Mn2 、Mg2 、Ba2 对该酶影响不大,Hg2 对酶有较弱的抑制作用,而Zn2 、Cu2 、Fe3 对酶的抑制作用较强。     

海洋弧菌碱性蛋白酶的分离纯化及部分性质研究

采用硫酸铵沉淀、Sephadex- 75 ,Sephadex- 10 0凝胶过滤层析等方法纯化海洋弧菌 (Vibriop acini) X4 B- 7菌株产生的碱性蛋白酶 ,得到电泳纯酶制品 ,并对纯化酶的性质进行了研究。结果显示 :纯酶的分子量为 2 7KD,等电点 p I=8.7,最适反应 p H9.0～ 10 .5 ,最适反应温度 5 0～ 6 0℃。ED-TA对酶活力没有影响 ,高酶浓度可以降低 SDS对酶的抑制作用 ,该酶可用于解聚组蛋白。 DNA琼脂糖凝胶电泳证明 :酶对 DNA酶有降解作用 ,而对 DNA没有降解作用 ,该酶有希望应用于核酸的提取     

壳聚糖酶的分离纯化及性质研究

以本实验室分离的产壳聚糖酶YJ02菌株出发,制备壳聚糖酶发酵液,经离心、(NH4)2SO4分级盐析、Q-SepharoseFast Flow阴离子交换、Sephacry S-100凝胶过滤分离纯化步骤,SDS-PAGE显示为一条带,壳聚糖酶纯化了28.9倍,收率为47.6%。该酶的性质研究表明,该酶的分子量为66.2KD,最适反应温度为50℃,最适反应pH为6.0;Mn2 对酶活力有明显的促进作用,Cu2 ,Fe3 ,Hg2 对酶活力有抑制作用;小分子有机物EDTA和SDS对酶活力有抑制作用,而IAA和β-巯基乙醇对酶活力稍有促进作用。该壳聚糖酶对高脱乙酰度壳聚糖底物水解作用强,酶解位点可能为NGlc-NGlc,酶最大反应速度Vmax=4.1μmol/min,常数Km为64mmol/L。此壳聚糖酶水解壳聚糖制备的壳寡糖数均分子量为2 400Da。     

羊栖菜岩藻聚糖硫酸酯的提取纯化和化学组成研究

研究分析羊栖菜岩藻聚糖疏酸酯化学组成,为产品研制开发提供理论依据。采用稀酸提取和乙醇沉淀的方法得到羊栖菜岩藻聚糖硫酸酯粗品,粗品通过Q-Sepharose F.F.阴离子交换树脂进行分级纯化,得到硫酸基含量不同的3个组分(F-1,F-2和F-3),并对这3个组分的总糖、硫酸基、糖醛酸、氨基糖的含量及中性单糖组成和得率等进行了全面的分析。结果表明,羊栖菜岩藻聚糖硫酸酯主要由岩藻糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖及少量的鼠李糖、木糖和阿拉伯糖组成。3个组分中F-3的硫酸基含量最高(40.2%)但得率太低(0.8%);F-1的总糖(68.4%)和糖醛酸(17.9%)含量最高;3者氨基糖的含量均很低(≤1.0%);F-1,F-2和F-3相对分子质量分别约为210 000,160 000和140 000,F-2和F-3的纯度较高。     

Vibrio sp.510产褐藻胶裂合酶的底物专一性分析

Vibrio sp.51 0具有很强的产生褐藻胶裂合酶的能力。本实验对该菌发酵产生的褐藻胶裂合酶经疏水色谱除去杂蛋白 ,再经灌注色谱分离得到 3个酶组分峰。经底物专一性检测 ,峰 1和峰 3对聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸均具降解作用 ,峰 2只对聚甘露糖醛酸有降解作用。园二色谱测定酶的二级结构 :峰 1结构最为复杂 ,以β-转角为最高 ,占 31 .5% ,无规线团占 2 7% ,α-螺旋占 2 5.8% ;峰2为β-折叠 ,占 95.5% ;峰 3以 60 %的α-螺旋和 40 %的无规线团形式存在。 3个分离峰的底物专一性和二级结构的差异证明了褐藻胶裂合酶蛋白的结构与功能之间的相关性。     

海洋芽孢杆菌Bacillus sp. CAMT22370所产葡萄糖氧化酶的分离纯化与表征

前期筛选获得一株海洋源Bacillussp.CAMT22370高产葡萄糖氧化酶菌株,本研究进一步通过离子交换及分子筛层析使Bacillus sp. CAMT22370葡萄糖氧化酶纯化了2.12倍,酶活得率32.37%,比活力达到8.47 U/mg,分子质量约为50 kDa。酶学特性研究表明,此酶在低温下有较好的催化活性,最适温度为30℃,超过30℃时酶活迅速下降, 45℃保温2 h活力降至75%左右;最适pH为6.0,在5.0以下和7.0以上时酶活迅速降低, 9.0时损失35%; Ca~(2+)和Mn~(2+)有明显激活作用, Na~+和Zn~(2+)有轻微激活作用, K~+和Mg~(2+)对酶活无显著影响,而Fe~(2+)、Fe~(3+)和Cu~(2+)对酶活有明显抑制作用,酶动力学参数Vmax及Km值分别为26.85 (μmol/(L·min))和109.26 (μmol/(L·min)),以上酶学特性与现有酶制剂存在明显不同,研究结果为该葡萄糖氧化酶的开发利用奠定了初步基础。     

黄鱼(Hexagrammos otakii)脑组织AChE的亲和层析

采用亲和层析法对黄鱼脑组织的乙酰胆碱酯酶进行分离纯化。纯化酶最大比活力为63．136U／mg蛋白，最适pH为8，最适反应温度为35℃。此酶经过SDS-PAGE呈一条带，表明其纯度达电泳纯。对纯化酶进行底物特异性、过量底物抑制效应和抑制剂选择性检验，结果证实该酶为乙酰胆碱酯酶。     

Purification and characterization of lipoxygenase from Entermorpha clathrata

The purification and characterization of lipoxygenase （LOX, EC 1.13.11.12） from the green algae Enteromorpha clathrata were studied. Two components marked LOX - 1 and LOX - 2 were purified and their molecular masses were estimated to be 102 and 79 ku by SDS - PAGE. Both LOX - 1 and LOX - 2 were stable over the pH wide range 6.0 - 10.0 and had the optimum pH of 10.0 and 8.6, at optimum temperature of 30 and 25℃, respectively. Substrate specificities of LOX - 1 and LOX - 2 were the greatest towards linoleic acid, followed by arachidonic acid and linolenic acid. The Michaelis constant values of LOX - 1 and LOX - 2 were 0.23 and O. 20 mmol/dm^3 with the substrate of linoleic acid. The LOX activities were stimulated greatly by Ca^2＋ but inhibited by Hg2 ~ and the antioxidants such as BHA, BHT and TBHQ. The hydroperoxide products of LOX were analysed by HPLC with the substrate of methyl linoleate, and the results showed that LOX - 1 formed mainly 9-hydroperoxides while LOX - 2 formed both 9- and 13-hydroperoxides at a ratio of 24： 76.