5种海洋微藻多糖体外免疫调节活性的筛选

目的:研究5种海洋微藻多糖对小鼠体外免疫细胞功能的影响,筛选出免疫调节活性强的微藻藻株。方法:考察5种海洋微藻多糖对小鼠脾脏淋巴细胞增殖,腹腔巨噬细胞RAW264.7增殖、吞噬中性红、释放NO能力的影响。结果:5种海洋微藻多糖对小鼠免疫细胞具有不同的刺激能力,其中,紫球藻多糖可极显著增强吞噬细胞的吞噬功能,促进巨噬细胞合成NO,促进脾淋巴细胞及腹腔巨噬细胞的增殖。证明紫球藻多糖具有增强小鼠细胞免疫功能的作用。     

黄鳍金枪鱼酶解物免疫活性及其氨基酸分析

本文旨在研究黄鳍金枪鱼(Thunnus albacares)碎肉中4种不同蛋白酶酶解物的3k Da超滤组分对RAW264.7细胞的免疫活性。以RAW264.7细胞为实验模型, 采用噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性, 中性红吞噬实验检测细胞吞噬能力, Griess试剂检测细胞培养上清液中NO含量, 并分析酶解物氨基酸组成和分子量分布。实验结果表明, 胰蛋白酶酶解物在12.5~200μg·mL^-1范围内无明显细胞毒性, 能增强RAW264.7细胞吞噬能力, 浓度为400μg·mL^-1时达到最大值132.50%(P<0.01), 浓度在50~200μg·mL^-1范围内能促进巨噬细胞NO释放(P<0.01), 且NO释放量与酶解液浓度存在一定的量效关系; 胰蛋白酶酶解物中必需氨基酸(essential amino acid, EAA)含量最高, 为51.09%, 其碱性氨基酸组氨酸、赖氨酸和精氨酸的含量分别为11.59%、11.00%和6.90%, 均高于其他蛋白酶酶解物, 并且分子量小于1k Da的小肽含量高达97.48%。研究结果表明, 4种蛋白酶酶解物中, 黄鳍金枪鱼碎肉胰蛋白酶酶解物的3k Da组分具有较明显的免疫活性, 这为其作为免疫活性肽的开发利用提供了理论依据。     

海蒿子多糖的结构组分及生物活性研究

采用水提醇沉法制备海蒿子多糖,利用红外光谱法(FT-IR)和PMP柱前衍生化法研究海蒿子多糖的理化特性及糖元组成,并采用实时荧光定量PCR法和ELISA法,研究免疫相关因子和细胞凋亡相关因子的mRNA表达。结果表明,海蒿子多糖总糖含量为24.32%,硫酸根含量为5.39%,具有α糖苷键。单糖分析表明,海蒿子多糖主要由半乳糖、岩藻糖、甘露糖组成。进一步体外免疫实验结果表明,海蒿子多糖具有促进小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖的作用,能够提高巨噬细胞系免疫因子IL-1β、IL-6、iNOS和TNF-α的mRNA表达量。此外,海蒿子多糖还能抑制肺癌细胞A549的增殖,提高Bax/Bcl-2的比例,说明其具有抑制肿瘤的效果。ELISA分析表明,海蒿子粗多糖能显著提高RAW264.7分泌NO、IL-1β、TNF-α和IL-6细胞因子。因此,海蒿子多糖不仅具有免疫增强活性,还具有一定的抗肿瘤活性。     

转录组学分析B-3胞外多糖对巨噬细胞RAW264.7基因表达的影响

B-3胞外多糖是从一株南极嗜冷菌Psychrobacter sp.B-3发酵液中提取的胞外多糖,前期研究发现该多糖能够激活巨噬细胞并影响其免疫调控活动。为探明其免疫调控途径,采用转录组学分析对经B-3多糖刺激的RAW264.7巨噬细胞系进行了差异表达基因分析。研究结果表明B-3多糖的刺激引起了420个基因的差异表达,其中上调178个、下调242个。差异表达基因与细胞功能存在诸多关联,但主要集中在代谢和免疫两个通路上：其中在多个免疫相关通路上,富集最显著的是抗原处理和表达途径;另一个明显富集的则是代谢通路,B-3多糖处理引起了大量参与代谢的酶类的表达变化,包括氨基酸,碳水化合物,脂质和核苷酸代谢相关基因均发生了一定程度的改变。因此,B-3胞外多糖作为一种免疫激活剂直接影响了RAW264.7巨噬细胞系的免疫功能,同时也对其胞内的代谢途径产生了影响。本论文首次开展了南极嗜冷细菌胞外多糖对RAW264.7巨噬细胞系的影响,该研究为不同来源的活性多糖对巨噬细胞免疫激活研究提供了科学依据。     

κ-卡拉胶硫酸多糖的免疫调节活性初步研究

从角叉菜中提取卡拉胶,分级得到κ-卡拉胶(KC),采用氯磺酸-吡啶法对其进行硫酸化修饰得到硫酸化卡拉胶(SKC),并测定了κ-卡拉胶硫酸化前后硫酸基的含量;通过体外试验比较了KC及其硫酸化衍生物SKC对淋巴细胞增殖、巨噬细胞增殖活性以及NO释放活性的影响。结果表明,KC和SKC都能促进淋巴细胞和巨噬细胞的增殖活性,在样品实验浓度范围100~400 mg/L内,SKC对T淋巴细胞和巨噬细胞的具有促增殖作用,增殖率分别为158.76%和153.63%,与KC相比具有显著性差异(P0.01)。SKC促进巨噬细胞产生NO的活性较KC更强,并呈一定的剂量的依赖性,SKC在400 mg/L时,可促使巨噬细胞产生NO量为21.385μmol/mL。对KC进行硫酸化修饰,可以提高其对淋巴细胞巨噬细胞的免疫活性,能促进机体的免疫调节。     

革皮氏海参皂苷对小鼠免疫功能的调节作用

从革皮氏海参(Pearsonothuria graeffei,P.graeffei)中提取海参皂苷,并探讨其对正常小鼠和免疫功能低下小鼠免疫功能的影响。结果表明,对于正常小鼠,革皮氏海参皂苷能显著提高小鼠的细胞免疫和非特异性免疫功能,显著增加小鼠的足跖增厚值(P0.05),促进腹腔巨噬细胞的吞噬能力(P0.05)。对于免疫功能低下小鼠,革皮氏海参皂苷能显著提高小鼠的抗体形成细胞数和小鼠血清溶血素含量(P0.05,P0.01),促进小鼠的体液免疫功能;显著促进小鼠的迟发型变态反应,提高小鼠脾淋巴细胞的增殖能力(P0.01),提高小鼠的细胞免疫功能;显著促进小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数(P0.01),促进小鼠的非特异性免疫功能。提示革皮氏海参皂苷对小鼠具有显著的免疫调节作用。     

紫球藻胞外多糖抗氧化和免疫调节活性的研究

采用密闭微波法降解紫球藻胞外多糖。通过测定多糖对羟自由基OH·、超氧阴离子O2-·和二苯代苦味酰基自由基DPPH·的清除效果及对小鼠单核-巨噬细胞RAW264.7和淋巴细胞的增殖效果,考察低分子量紫球藻多糖的体外抗氧化活性和免疫调节活性。结果表明,在一定的浓度范围内,降解后的紫球藻多糖对OH·、O2-·和DPPH·的清除能力与浓度呈正相关性,它们的半抑制率IC50分别为0.619,0.114和0.015mg/mL,表明紫球藻胞外多糖具有体外抗氧化活性。溶液浓度在50～200μg/mL的多糖都表现出体外免疫促进作用,与对照组相比,100μg/mL的多糖对巨噬细胞RAW264.7的促进作用最大,其增值指数为1.72。200μg/mL的多糖对脾淋巴细胞的增值指数为2.11。     

互花米草总黄酮对小鼠免疫功能的影响

互花米草总黄酮(TFS)是从盐沼植物互花米草中分离得到的一种免疫活性物质。在研究TFS对小鼠免疫功能的影响时发现TFS156.25×10~(-6)ip qd×8导致由环磷酰胺引起的免疫抑制小鼠的胸腺重量增加。TFS154.25×10~(-6)sc qd×5还显著提高C_(57)/BL和昆明小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数。TFS 3.125,12.5ug/ml在体外可明显促进由ConA诱导的~3H-TdR参入的淋巴细胞转化。     

月华丸（胶囊）及其拆方对巨噬细胞增殖影响的研究

目的：研究月华丸（胶囊）对小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）活性的影响,为后续研究月华丸（胶囊）对耐多药结核分支杆菌感染细胞自噬的影响提供前期实验基础。方法：取对数生长期的RAW264.7细胞,用10%胎牛血清培养制成的细胞悬液加入96孔培养板中培养。分别采用终浓度为1.25g/mL、0.63g/mL、0.32g/mL、0.16g/mL、0.125g/mL、0.063g/mL、0.032g/mL、0.016g/mL不含阿胶的月华丸（胶囊）以及相同浓度梯度含阿胶的月华丸（胶囊）处理RAW264.7细胞,并设不加药的对照组。以4-甲偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞存活情况。结果：（1）不含阿胶的月华丸（胶囊）在1.25g/mL、0.63g/mL浓度时对RAW264.7细胞增殖抑制率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）,表明不含阿胶的月华丸（胶囊）高浓度对巨噬细胞的增殖有一定的抑制作用。（2）含阿胶的月华丸（胶囊）对RAW264.7细胞增殖率明显升高,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）,提示含阿胶的月华丸（胶囊）对巨噬细胞的增殖有明显促进作用。（3）浓度为0.32g/mL的含阿胶月华丸（胶囊）对RAW264.7细胞增殖率最高,为最佳促细胞增长药液浓度。结论：月华丸（胶囊）能提高巨噬细胞的活力,增强巨噬细胞的增殖。     

两种海藻提取物抗水产动物病原菌活性的初步研究

研究了两种大型海藻——羊栖菜(Sargassum fusiforme)、条浒苔(Enteromorpha clathrata)提取物对11种水产动物病原菌的抑制活性。结果显示:羊栖菜乙醇粗提物乙酸乙酯相对溶藻弧菌(Vibrio algi-nolyticus)的抑制作用最明显,抑菌圈可达21.6 mm;薄层层析表明羊栖菜乙醇粗提取物乙酸乙酯相有6条层析带,其中Rf=0.54带对哈氏弧菌(Vibrio harveyi)的抑制作用最强,抑菌圈可达13.6 mm;条浒苔乙醚粗脂对11种水产动物病原菌均表现出了较强的抑制作用,其中对灿烂弧菌(Vibrio splendidus)的抑制作用最强,抑菌圈可达24.7 mm;进一步的实验显示,条浒苔乙醚粗脂3种洗脱组分抗菌性均比粗脂减弱了,而其95%乙醇洗脱组分对恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的抑菌圈仍可达13.8 mm。说明利用羊栖菜、条浒苔为开发海洋药物资源提供了可能。     

Antioxidant efficacy of extracts from a variety of seaweeds in a cellular system

As a part of an ongoing search for antioxidants frodm marine sources, antioxidant activities of 24 kinds of seaweeds (4 green algae, 8 brown algae, and 12 red algae) were investigated. The seaweeds were extracted by acetone/ dichloromethane and methanol, respectively. The antioxidant properties of both extracts were evaluated using four different activity tests, including degree of occurrence of intracellular reactive oxygen species (ROS), NO, lipid peroxidation, and GSH (glutathione) in mouse macrophage Raw 264.7 cells. The levels of intracellular reactive oxygen species (ROS) and GSH were measured using 2’,7’-dichlorofluorescin diacetate (DCF-DA) and monobromobimane as fluorescence probe, respectively. Moreover, the generation of NO and lipid peroxidation products were determined by each method based on the Griess reaction and TBARS assay. Solvent extracts from seaweeds such asScytosiphon lomentaria, Prionitis cornea, Laruencia okamurae,Callophyllis japonica, Sargassum horneri, Dictyopteris divaricat a,Lomentaria catenata, Corallina confuse, Ishige okamurae, andAhnfeltiopsis flabelliformi exhibited high antioxidant activities in cellular oxidizing systems.     

南方鲇(Silurus meridionalis)豚鼠气单胞菌溶血素的分离、纯化与致病性研究

采用硫酸铵盐析、DEAE-Sephadex A50凝胶层析法对豚鼠气单胞菌的溶血素进行分离、纯化,获得分子量为32.2kDa的单一多肽溶血素,测定溶血价为25。将该溶血素倍比稀释后梯度接种南方鲇,研究其对南方鲇的致病性和组织病理损伤情况。结果表明:豚鼠气单胞菌溶血素具有较强的毒力,对南方鲇的半数致死剂量(LD50)为0.29mg蛋白/kg体重;病鱼表现为体表褪色,腹部膨大,肝、脾、肾肿大,肝、脾淤血、出血明显;胃肠道内充有大量粘液,黏膜充血、出血;组织病理学表现为骨骼肌水肿、变性,肝细胞变性、坏死,血窦扩张淤血,肾小管上皮细胞变性、坏死,脾脏淋巴细胞减少,胃肠道黏膜上皮变性、坏死,脱落。     

南非紫菜多糖抗衰老作用的研究

研究了南非紫菜(Porphyra capensis)多糖(PCP)对自然衰老小鼠抗氧化活性及免疫器官的影响。将PCP 以三个剂量(50、100、200 (mg/(kg)?d）)腹腔注射给药, 连续给药20 d, 可以显著提高衰老小鼠的脾脏和胸腺指数, 提高衰老小鼠SOD 和GSH-Px 的活力及总抗氧化能力, 在高剂量时降低衰老动物的MDA 的含量。PCP 能够提高衰老小鼠的免疫机能和机体的抗氧化能力, 是一种比较理想的抗衰老保健产品。     

Effects of several salt marsh plants on mouse spleen and thymus cell proliferation using mtt assay

In the present study, we have tested the effects of 21 salt marsh plants on cell proliferation of mouse immune cells (spleen and thymus) using MTT assay in culture. The methanolic extracts of six salt marsh plants (Rosa rugosa, Ixeris tamagawaensis, Artemisia capillaris, Tetragonia tetragonoides, Erigeron annus, and Glehnia littoralis) showed very powerful suppressive effects of mouse immune cell death and significant activities of cell proliferationin vitro. Especially, the methanolic extract ofRosa rugosa was found to have fifteen times compared to the control treatment, demonstrating that Rosa rugosa may have a potent stimulation effect on immune cell proliferation. These results suggest that several salt marsh plants includingRosa rugosa could be useful for further study as an immunomodulating agent.     

Anti-oxidant and anti-inflammatory activities of ultrasonicassistant extracted polyphenol-rich compounds from Sargassum muticum

Polypehnol is an important,potentially bioactive component of Sargassum muticum.In this study,ultrasonic assisted extraction of polyphenol-rich substances was performed using a 38%ethanol solution at a solid:liquid ratio of 1:30 at 68℃ for 32min,determined by single-factor and response surface methodology(RSM)optimization.The content of polyphenol was 5.66mg/g in the crude extract.Further extraction showed that the polyphenol mainly distributed in ethyl acetate(SKEE)and water phases(SKEW).The anti-oxidation test by electron spin resonance(ESR)spectrum showed that the SKEE had the strongest scavenging activity on DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)and alkyl radicals.SKEE was shown noncytotoxic but could inhibit the generation of cellular ROS,showing protective effects in H2O2 and AAPHinduced Vero cells and UV-B irradiated HaCaT cells.SKEE also signifi cantly inhibited the release of NO of LPS-induced RAW 264.7 cells.Therefore,the polyphenol-rich extracts in ethanol and ethyl acetate showed excellent anti-oxidant and anti-infl ammatory activities,which is beneficial to the development of high-value bio-substances.     

篮状菌DYM25胞外产物的初步鉴定及其生物学活性

本研究以西太平洋雅浦海沟分离得到的篮状菌(Talaromyces sp.)DYM25为实验菌株,通过水饱和正丁醇萃取菌株DYM25的胞外产物,利用生物碱沉淀显色法初步考察胞外产物的种类,进而研究了胞外产物的抗菌、抗氧化和抗肿瘤活性。结果表明,1 L菌株DYM25的发酵液通过水饱和正丁醇萃取旋蒸后可得到约2 g的产物;生物碱显色反应预示着胞外产物中生物碱盐类物质的存在;篮状菌DYM25胞外产物对枯萎病致病菌木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)的生长具有显著的抑制作用,是篮状菌作为F.equiseti拮抗菌的首次报道。同时,此胞外产物还具有一定的抗氧化活性和抗肿瘤活性,其抗氧化能力随产物浓度的升高而增强,对人胰腺癌细胞PANC-1的抑制能力也呈现出一定的浓度依赖性。篮状菌DYM25多样的生物活性凸显了其良好的研究价值和应用前景。