鲻鱼卵母细胞成熟机理的探讨

为了探讨鱼类性腺发育成熟规律和卵母细胞成熟过程中激素的调节问题,过去进行了许多性腺发育组织学、细胞学以及组织化学等方面的研究,最近几十年来,应用电镜、免疫、质谱和分子生物学等先进技术对上述问题进行了更深入的研究,并获得了迅速进展^[1~2].Nagahama^[3]首先采用高体方法研究硬骨鱼类性腺类固醇激素的来源,这一技术已被广泛应用于探讨鱼类卵母细胞成熟和排卵过程中激素的作用问题,而且已被认为是一种可靠和有效的方法.     

用LHRH-A2埋植法诱导池养鲻鱼卵母细胞发育成熟的试验

将含LHRH－A2的药物颗粒埋植入池养人工繁殖鲻鱼Mugil cephalus Linnaeus雌鱼体内，以诱导其性腺发育成熟，试验为期81d。发现用LHRH－A2埋植的试验组鱼的卵母细胞直径超过500μm以上，达到成熟的个体比率为30％，而空白对照组鱼达到成熟的个体比率为0％。试验结果表明，采用激素埋植的方法，可促进鲻鱼卵母细胞的发育。     

17β-雌二醇对鲻鱼脑垂体促性腺激素细胞分泌活动的影响

本文用组织学方法研究了17β－雌二醇对鲻鱼脑垂体促性腺激素分泌细胞（gonadotropin cell,GtH)发育成熟和分泌活动的影响。结果表明，17β－雌二醇能够促使鲻鱼脑垂体GtH细胞发育成熟。表现在实验组（高和低剂量组）给药2个月后，脑垂体中外侧部多数GtH细胞胞质充满分泌颗粒，而对照组GtH细胞胞质尚未充满分泌颗粒。另外，给药5个月后，高剂量和低剂量实验组多数GtH细胞胞质出现空胞，而对照组空泡则很少。这说明17β－雌二醇有促进GtH细胞的分泌活动，并促使鲻鱼性腺提早发育。这些结果可为17β－雌二醇的作用机制提供科学依据。     

营养强化的轮虫在鲻鱼育苗中的效用

经连续2a采用小球藻轮虫、酵母轮虫和乌贼肝油＋小球藻进行营养强化的轮虫培育鲻鱼苗，直观比较鱼苗的存活率和生长发育情况。结果表明：以乌贼肝油营养强化轮虫为饵的鱼苗，经35d的培育存活率最高，为25％－61％；以小球藻轮虫为饵的鱼苗次之，存活率为13％－24％；而以酵母轮虫为饵鱼苗的存活率是最低的，仅培育10－15d，仔鱼就全部死亡；以乌贼肝油营养强化轮虫为饵的鱼苗生长速度最快，个体大小整齐、肥满，变态时间比小球藻轮虫组提早1－2d，最长达3－4d。     

17β-雌二醇促进鲻鱼性腺发育的作用机制:雌激素受体的定位

应用免疫组织化学技术对雌激素受体α和β亚型在鲻鱼性腺进行定位研究．结果显示．在早期卵巢．α与β受体蛋白均在早期初级卵母细胞的卵被膜、核膜和核仁表达．受体阳性物质沿胞膜分布．核显免疫阴性；在卵黄发生期，ER，α和β则在卵被膜、卵黄膜和核膜表达．在精巢，α与β受体蛋白在生精细管生殖被膜、精原细胞、初级和次级精母细胞、精子细胞、足细胞和间质细胞表达．受体免疫阳性物质沿细胞膜分布、这些结果表明．鲻鱼性腺(卵巢和精巢)存在雌激素α与β受体亚型，该受体在介导17β-雌二醇对性腺的生理效应中起重要作用、     

激素诱导花鳗鲡精巢发育成熟期间性激素水平及相关细胞的超显微结构

通过注射人类绒毛膜促性腺激素(HCG)诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟,每7d注射一次(剂量为500U·(体重)kg-1),共注射6次.检测此期间血清中促性腺激素(GtH)和性类固醇激素(T、11-KT、E2)的水平,以及相关细胞超显微结构的变化.结果表明,对照组雄性花鳗鲡性腺发育处于Ⅰ―Ⅱ期,GSI(Gonadosome Index)为0.17±0.06%,血清中GtH、T、11-KT水平较低,并且T浓度低于0.1ng(试剂盒测定范围为0.1―20ng·mL-1);注射第3次后,实验组鱼性腺发育处于Ⅲ期,GSI为7.0±0.03%,血清中GtH、T、11-KT的水平均明显上升;排精后的实验组鱼GSI为9.57±2.1%,GtH、T、11-KT的水平比注射第3次的实验组鱼有所下降,但仍然高于对照组;在整个催熟过程中,血清中E2水平持续降低,从对照组的2.36ng·mL-1下降到排精后的0.83ng·mL-1.超显微结构的观察证明,与对照组相比排精后的实验组鱼脑垂体中GtH细胞的小颗粒减少,内质网池扩大,出现分泌并释放促性腺激素后留下的空泡.对照组鱼肝细胞富含糖原,几乎没有脂肪泡的存在,细胞核位于细胞中间,排精后的实验组鱼肝细胞脂肪泡增多变大,脂肪泡的形成导致细胞核偏位.     

皱瘤海鞘神经递质和性类固醇激素含量与性腺发育成熟的关系

运用免疫组织化学和化学发光免疫分析方法研究了皱瘤海鞘(Styela plicata)神经递质多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)及其受体以及性类固醇激素含量与性腺发育成熟的关系.结果显示,DA和5-HT免疫活性定位在脑神经节中大小2种类型的神经细胞,DA免疫活性还定位在不同发育时期神经腺上皮细胞.5-HT受体免疫活性存在于脑神经节小型神经细胞和大生长期神经腺上皮细胞.在小生长期和大生长期性腺中均检测到DA、5-HT及其受体,提示DA和5-HT可能参与调节皱瘤海鞘的性腺发育.皱瘤海鞘为雌雄同体,化学发光免疫分析证实,海鞘性腺能够合成和分泌性类固醇激素,大生长期性腺中雄激素、孕激素和雌激素的含量分别为25.8±0.0、38.9±0.2和14.3±0.6pg/mg,提示性腺既是生殖组织也是内分泌组织.上述发现为证明尾索类海鞘可能像头索类文昌鱼一样,具有原始的生殖内分泌调控轴(脑神经节-神经腺-性腺)提供科学依据.     

促性腺激素释放素类似物（GnRH—A）对文昌鱼卵细胞成熟及产卵的诱发

在繁殖季节，给正在成熟的文昌鱼体腔注射ＧｎＲＨ－Ａ，结果表明，注射激素后３６ｈ时，有５０％文昌鱼产卵，未产动物成熟卵母细胞达９５．５％。而对照组无任何动物产卵，成熟卵母细胞为５５％，我们由引首次直接证实文昌鱼脊椎动物一样，ＧｎＲＨ－Ａ是调控其卵母细胞成熟和产卵的重要激素。     

清肺排毒汤对脂多糖诱导急性肺损伤小鼠的作用机制研究

目的：探讨清肺排毒汤对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）小鼠的作用机制。方法：采用LPS经气道滴注建立小鼠ALI模型,造模成功后将小鼠随机分成治疗组和模型组,每组各10只,另取10只为空白对照组。治疗组给予清肺排毒汤0.3 ml灌胃,空白对照组、模型组给予0.9%氯化钠注射液0.3 ml灌胃,每隔8 h进行1次,共连续给药3次。采用HE染色观察肺组织病理变化情况并检测肺湿/干质量(W/D) 比值,采用ELISA检测白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。结果：与空白对照组比较,模型组肺组织结构破坏严重,肺泡间隔变宽,肺泡萎缩,模型构建成功;与模型组比较,治疗组肺组织结构破坏程度减轻,肺泡间隔厚度变小,充血水肿有所缓解。与模型组比较,治疗组肺组织W/D降低,1L-1β、TNF-α水平下降,1L-10水平上升,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：清肺排毒汤可能通过调节相关炎性因子表达,减轻炎性反应及肺水肿,对LPS诱导的急性肺损伤起到保护作用。     

湛江海域养殖与野生鱼类肌肉中5种激素含量的分析和比较

采用放射免疫分析法测定了养殖与野生黑鲷Sparus macroccephalus、花尾胡椒鲷Plectorhynchus cinctus、军曹鱼Rachycentron canadum、青鲈Nibea japonica、白鲳Pampus argenteus5种湛江海域常见养殖鱼类肌肉中生长激素、雌二醇、孕酮、睾酮及绒毛膜促性腺激素的含量。结果表明,同一种激素含量依鱼种类的不同而有差异。5种激素在5种养殖与野生鱼类中的含量是,生长激素以养殖与野生青鲈最高,雌二醇以养殖黑鲷、野生军曹鱼最高,孕酮以养殖与野生军曹鱼最高,睾酮以养殖与野生白鲳最高,绒毛膜促性腺激素以养殖青鲈、野生花尾胡椒鲷最高。同一种激素含量在同种的养殖与野生鱼类中有显著差异(p<0.01),养殖黑鲷肌肉中5种激素含量分别是野生黑鲷的6.94、4.01、2.81、2.42、2.99倍;养殖花尾胡椒鲷分别是野生花尾胡椒鲷的5.68、2.51、2.15、2.13、1.93倍;养殖军曹鱼分别是野生军曹鱼的46.11、1.71、1.63、5.50、2.91倍;养殖青鲈分别是野生青鲈的6.60、2.75、2.83、3.58、5.38倍;养殖白鲳分别是野生白鲳的2.55、2.67、2.49、2.52、2.70倍。实验结果提示,放射免疫分析法可作为检测水产品中激素含量的有效手段。     

中华乌塘鳢雌雄异体和雌雄同体性类固醇激素含量的季节变化与差异

采用酶联免疫吸附法测定了野生中华鸟塘鳢（Bostrichthyssinensis）不同季节血清E2和1l—KT含量的变化,并比较了生殖季节养殖雌雄同体与野生雌雄异体之间E,、11一KT和17仪,2013一P三种性类固醇激素含量的差异．结果表明,野生雌鱼和雄鱼血清E：和11一KT的含量均具有明显的季节变化,其高低均依次为5〉8〉2〉11月．在相同月份,雌鱼的E,含量显著高于雄鱼,而雄鱼的ll—KT含量显著高于雌鱼．生殖高峰期,雌雄同体E：含量高于雌雄异体雄鱼,但低于雌雄异体雌鱼;雌雄同体l1一KT和17仅,20]3一P含量均高于雌雄异体雌鱼和雄鱼;野生雌鱼和雄鱼血清170L,2013一P含量没有显著差异．性类固醇激素在中华鸟塘鳢的生殖过程中起着重要作用,E：是野生中华乌塘鳢雌鱼的主要雌激素,而11一KT则是野生雄鱼的主要雄激素．     

5-HT对马氏珠母贝卵体外促熟的影响及5-HT受体的细胞学定位

研究了5-羟色胺(5-HT)对马氏珠母贝解剖获得卵母细胞的促熟作用及5-HT受体(5-HTpf)在其性腺中的分布情况。通过体外浸泡的方法处理马氏珠母贝卵母细胞使其成熟,结果表明一定浓度的5-HT可显著促使马氏珠母贝卵母细胞生发泡破裂,并使已经发生生发泡破裂的卵母细胞进一步成熟,同时可诱导5-HT受体基因的表达。用原位杂交的方法对5-HT受体在马氏珠母贝性腺中的分布的研究结果揭示,卵巢中次级卵母细胞和卵细胞均存在5-HT受体,有阳性信号出现;精巢中仅滤泡壁及精母细胞中有少量表达。以上结果表明马氏珠母贝的卵母细胞不仅能产生5-HT并且可表达5-HT受体。     

基于网络药理学探讨酸枣仁汤的作用机制

目的：采用网络药理学方法探讨酸枣仁汤的作用机制。方法：借助TCMSP平台预测酸枣仁汤中药成分的作用靶点与通路,利用Cytoscape软件分别构建成分-靶点网络、PPI网络,使用DIVID数据库进行GO富集分析和KEGG信号通路富集分析。结果：经筛选获得酸枣仁汤中五味中药酸枣仁、川芎、知母、茯苓、甘草含有的135种活性成分,332个相应靶点;PPI网络包括293个节点;GO条目146个,其中生物过程为94个,分子功能条目34个,细胞组成条目18个;KEGG通路22条。结论：酸枣仁汤不仅可以用于治疗失眠、焦虑等精神系统疾病,还可以用于治疗肿瘤、循环系统等疾病,同时参与5-羟色胺、氮素代谢等生物过程,揭示了酸枣仁汤多成分、多靶点、多通路的药理作用特点。     

基于网络药理学探讨芎芷地龙汤治疗偏头痛的作用机制

目的：分析芎芷地龙汤的活性成分,预测其治疗偏头痛的作用靶点及信号通路。方法：通过TCMSP平台收集芎芷地龙汤活性成分并进行ADME筛选,收集活性成分潜在靶点;通过GeneCards数据库收集偏头痛的相关疾病靶点,并与药物活性成分靶点取交集得到共同靶点,进行PPI分析;使用Cytoscape构建“药物-靶点-疾病”网络并进行分析,通过DAVID数据库对共同靶点进行GO富集与KEGG富集分析。结果：共筛选出芎芷地龙汤85个潜在活性成分和145个潜在治疗靶点;芎芷地龙汤治疗偏头痛关键靶点为JUN、TNF、MAPK1、AKT1、RELA等;可能参与的通路有Pathway in cancer通路、HIF-1信号、TNF信号通路、TLR信号通路、神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、T细胞受体信号通路等。结论：槲皮素、β-谷甾醇等是芎芷地龙汤中的主要活性成分;TNF、MAPK1、AKT1等基因可能在治疗偏头痛时参与调控;芎芷地龙汤主要通过调节氧化应激反应、低氧反应、炎性因子释放、神经递质传递、血管张力等机制治疗偏头痛。     

基于网络药理学研究清痹汤治疗痛风性关节炎的作用机制

目的：利用网络药理学分析技术探寻清痹汤治疗痛风性关节炎（GA）的潜在作用机制。方法：采用TCMSP平台挑选出清痹汤主要活性化合物及靶点;利用五大疾病数据库查找GA的对应靶点;借助韦恩图工具构建“药物-疾病靶点”交集图;将交集靶点导入String数据库构建蛋白互作（PPI）图;通过DAVID数据库进行基因功能GO分析、KEGG通路富集分析;依托Cytoscape 3.7.2绘制“中药-活性成分-靶点”“活性成分-交集靶点”“核心靶点-KEGG 通路”网络图。结果：清痹汤有效活性化合物共133个,潜在对应作用靶点125个;GA疾病相关靶点823个;疾病-药物共同靶点41个。通过蛋白互作网络图提示IL-6、VEGFA、CASP3、RELA、MYC、PPARG等可能是清痹汤治疗GA的核心靶基因。GO富集分析共237个,其中生物过程（BP）174条、细胞组成（CC）20条、分子功能(MF)73条。KEGG通路富集分析共73条。结论：清痹汤主要通过调节细胞增殖和凋亡、控制炎症、抑制血管生成等多途径发挥治疗GA的作用,与“多成分-多靶点-多通路”治疗疾病的特点相契合。     

Heavy metal stress induced hyperglycemia in blue swimmer crab, Portunus pelagicus

The study was to find out the effect of cadmium and mercury on levels of hemolymph glucose, crustacean hyperglycemic hormone (CHH) and hepatopancreas glycogen in the blue swimmer crab Portunus pelagicus. The experiments were performed in both intact and eyestalk ablated crabs. Quantification of CHH was done by the indirect ELISA with the aid of primary anti-Carcinus maenas-CHH antibody. Higher glucose concentration was observed on exposure to 8×10^-6 of cadmium ((825.6±5.42) μg/mL) and 6×10^-6 of mercury ((90.5±6.25) μg/mL) after 48 h and 24 h respectively. Higher level of hemolymph glucose was observed in eyestalk intact crabs on exposure to cadmium and mercury than eyestalk ablated crabs. Decrease in the levels of CHH was observed in both eyestalk intact and ablated crabs on heavy metal exposure. Decline of the hepatopancreas glycogen level was also witnessed with the exposure to heavy metal, which validated its utilization in the production of glucose. Thus this study brings to light, the variations in hemolymph glucose, CHH and hepatopancreas glycogen on heavy metal stress. These carbohydrate metabolites can be used as biomarkers in assessing heavy metal contamination in water bodies.